免疫PCR研究进展

本文综述了免疫－ＰＣＲ自建立以来的进展状况,包括灵敏度,抗体／ＤＮＡｍａｒｋｅｒ连接物的制备,显示系统,免疫ＰＣＲ种类以及假阳性的控制等。     

IL-18侯选者:IFN-γ诱生因子

IFN-γ诱生因子(IFN-γ Inducing Factor,IGIF)是18.3 kD的细胞因子,最初在BCG和LPS腹腔注射诱导内毒素休克的小鼠中发现。从小鼠IGIF蛋白的氨基酸序列已部分确定了它的核苷酸序列,小鼠IGIF主要来源于肝。在内毒素休克的鼠肝中已克隆出IGIF cDNA;用此作为探针,人IGIF已从肝细胞cDNA库中克隆出来,发现与鼠IGIF有65％的同源性。人IGIF已成功地在E.coli中表     

非病毒载体聚乙烯亚胺转基因因素的优化

聚乙烯亚胺属于阳离子多聚物,可浓缩DNA作为转基因非病毒载体。但其转染影响变量较多,如果不能充分控制将不能得到重复的、良好的结果。这里测定了聚乙烯亚胺转基因效率的影响因素,为合成更复杂的人工转基因载体创造条件。我们通过聚乙烯亚胺转染编码β-半乳糖苷酶的pSVβ质粒到CO S-7和N IH 3T 3细胞中,测定质粒因素、血清、细胞密度、操作方式以及转染复合物的保存因素对聚乙烯亚胺转基因效率的影响。结果表明:质粒中生物活性抑制剂明显降低转染效率,通过截流分子量3000或10000的超滤可以除去生活性抑制剂;断裂的质粒降低转染效率;培养液中的血清、白蛋白降低转染效率;细胞密度影响转染效率;PE I/DNA复合物与细胞作用8h后吸去,转染效果最优。冻存显著降低PE I/DNA转染复合物转染效率。聚乙烯亚胺可以作为合成新型非病毒载体的骨架,但必须控制有关因素才能发挥最佳的和可重复性的转染结果。     

阳离子多聚物转基因载体的研究进展

综述阳离子多聚物作为非病毒载体的研究现状。同时阐述阳离子多聚物转基因载体与脂质体、病毒载体的联合应用。     

聚乙烯亚胺载体介导的基因转移

目的:探讨以聚乙烯亚胺为骨架的非病毒载体在基因转染中的影响因素.方法:利用聚乙烯亚胺分别结合含β半乳糖甙酶报告基因的pSVβ表达质粒,含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP质粒转染Cos-7细胞,通过组织化学法测定细胞抽提产物中βgal的表达量和流式细胞仪法测定绿色荧光蛋白阳性细胞的表达比例,来测定影响转基因效率的各种参数.结果:在培养液中,6 mg/L聚乙烯亚胺作用NIH 3T3细胞24 h,细胞生存率为64.2%,7 mg/L时细胞生存率为54.4%.聚乙烯亚胺在N/P比3.0以上方可完全结合DNA.溶酶体抑制剂氯喹可增加聚乙烯亚胺的转染效率;培养液中的白蛋白、血清可降低转染效率.作为配制聚乙烯亚胺/DNA复合物的溶媒,HEPES缓冲液和生理盐水优于278 mmol/L葡萄糖.在配制聚乙烯亚胺/DNA复合物的溶媒中加入Mg2 可降低转染效率.结论:通过体外细胞试验证明,聚乙烯亚胺是一种有效的真核细胞转染剂和人工合成基因载体的骨架.     

跨膜型超抗原SEA融合蛋白的表达及其对小鼠黑色素瘤的免疫治疗作用

目的 制备跨膜型超抗原融合蛋白，研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法 用已构建的重组跨膜型超抗原的表达载体pET-28a-TM-SEA转化E．coli BL21(DE3)pLys宿主菌，在IPTG诱导下产生目的蛋白；用Ni-NTA His Bind Resin纯化带有His-Tag的目的蛋白。采用免疫组化法、免疫荧光法和流式细胞术检测其对细胞膜的锚定作用。建立C57BL／6小鼠的黑色素瘤模型，观察跨膜型超抗原SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果 跨膜型超抗原融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。结论 跨膜型超抗原融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用，有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白的制备及抗肿瘤作用研究

目的制备糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白(mB7.1GPI),研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法用已构建的重组糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1的表达载体pcDNA3.1( )mB7.1GPI,转染到CHO细胞中,表达和纯化mB7.1GPI。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用。建立C57BL6小鼠的淋巴瘤模型,观察用mB7.1GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果mB7.1GPI融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上,能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL2与IFNγ。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期。结论糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

阳离子多聚物转基因载体的研究进展

综述阳离子多聚物作为非病毒载体的研究现状。同时阐述阳离子多聚物转基因栽体与脂质体、病毒载体的联合应用。     

伊立替康腹腔灌注治疗癌性腹腔积液的疗效观察

目的观察伊立替康40 mg腹腔灌注治疗癌性腹腔积液的效果以及患者的耐受性。方法对50例癌性腹腔积液的患者,随机分为2组,试验组30例腹腔注入伊立替康40 mg,对照组20例腹腔注入顺铂40 mg＋5-氟尿嘧啶1.0 g。结果伊立替康组完全缓解12例（40%）,部分缓解15例（50%）,无效3例（10%）,总有效率90%;对照组完全缓解5例（25%）,部分缓解7例（35%）,无效8例（40%）,总有效率60%。2组有效率相比有统计学差异（P〈0.05）。毒副作用伊利替康组主要表现为第3天短暂轻度腹泻（30%）,短暂轻度白细胞下降（20%）;对照组副作用主要表现为第2天轻度腹部不适（20%）,轻度腹泻（10%）。结论伊立替康40 mg腹腔灌注治疗恶性腹腔积液,疗效显著,毒副作用患者可耐受。