胃癌原发灶中上皮间质转化相关因子和CD133的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的研究上皮间质转化（EMT）相关因子Snail、E-cadherin、N-cadherin与胃癌患者临床病理特征、预后及胃癌肿瘤起始细胞表面标志物CD133表达的关系。方法利用Western blot方法检测50例胃癌及癌旁正常胃黏膜组织中EMT相关因子及CD133蛋白的定位及定量表达,分析EMT相关因子及CD133蛋白表达与胃癌患者的临床病理学指标的关系,Spearman等级相关分析EMT相关因子和CD133表达的关系,Kaplan-Meier方法分析EMT相关因子及CD133表达与胃癌患者生存的关系。结果①胃癌组织中Snail、N-cadherin及CD133蛋白表达相对灰度值明显高于其在癌旁正常胃黏膜组织中的表达（Snail：0.599±0.114比0.259±0.108,P=0.020;N-cadherin：0.754±0.154比0.329±0.134,P=0.001;CD133：0.635±0.119比0.485±0.116,P=0.029）,E-cadherin蛋白表达相对灰度值明显低于其在癌旁正常胃黏膜组织中的表达（0.378±0.123比0.752±0.156,P=0.003）。②Snail蛋白、N-cadherin蛋白表达平均相对灰度值在有血管浸润、淋巴管浸润、N3淋巴结转移及肿瘤直径≥5 cm和Ⅲ＋Ⅳ期胃癌患者中的表达明显高于无血管浸润、淋巴管浸润、N0～N2淋巴结转移及肿瘤直径〈5 cm和Ⅰ＋Ⅱ期的胃癌患者（P〈0.05）,而E-cadherin蛋白表达平均相对灰度值在有血管浸润、淋巴管浸润、N3淋巴结转移及Ⅲ＋Ⅳ期胃癌患者中的表达显著低于无血管浸润、淋巴管浸润、N0～N2淋巴结转移及Ⅰ＋Ⅱ期的胃癌患者（P〈0.05）,CD133蛋白表达平均相对灰度值在有淋巴管浸润、N3淋巴结转移、肿瘤直径≥5 cm和Ⅲ＋Ⅳ期胃癌患者中的表达显著高于无淋巴管浸润、N0～N2淋巴结转移、肿瘤直径〈5 cm和Ⅰ＋Ⅱ期的胃癌患者（P〈0.05）。③Snail、N-cadherin蛋白表达与CD133蛋白表达分别均呈正相关（rs=0.278,P=0.048;rs=0.406,P=0.003）,而E-cadherin蛋白表达与CD133蛋白表达呈负相关（rs=-0.504,P=0.000）。④Snail、N-cadherin及CD133蛋白低表达组的生存时间明显长于其高表达者（P〈0.05）,联合EMT相关因子和CD133蛋白表达能够最有效预测患者生存。结论EMT与胃癌肿瘤起始细胞特性之间存在明显相关,并且两者与胃癌的高侵袭的临床病理特征相关,联合EMT相关因子Snail、E-cadherin、N-cadherin与CD133能够最有效预测胃癌患者的预后。     

精准医学时代对胆石病诊治的思考

在精准医学时代下,胆石病诊治作为医疗保健的生物医学新策略,应整合传统医疗诊治模式,为每位胆石病患者提供量体裁衣般的预防、筛查、诊断、治疗和康复计划,以最小资源投入获取最大的胆石病诊治效益和健康保障。随着外科理念的更新和手术技术的发展,胆囊手术的发展趋势逐渐朝着微创化、功能化的方向迅猛发展,也为胆囊个体化、人性化、艺术化手术方案提供了可能。     

胃癌CD133阳性细胞亚群肿瘤起始细胞样特性的检测

目的 探讨人胃癌细胞CD133＋亚群的分选及其特性的鉴定.方法 对50例胃癌原发灶和癌旁胃黏膜组织标本行免疫组织化学染色及Western blot检测CD133蛋白的表达.采用流式细胞仪检测不同分化胃癌细胞系CD133所占百分比,免疫磁珠法分选CD133＋细胞亚群,悬浮培养并观察其生长特性,并检测CD133阳性细胞裸鼠皮下接种致瘤能力.单细胞克隆观察单个CD133＋细胞生长特性,半定量反转录聚合酶链反应法鉴定相关干细胞标记的表达.结果 CD133蛋白多定位于胃癌原发灶黏膜及黏膜下层的肿瘤细胞膜表面,其相对表达量高于癌旁胃黏膜组织（P＜0.05）.不同分化程度的人胃癌细胞系KATO-Ⅲ、SGC-7901、AGS及MKN-45中CD 133＋亚群所占相对百分比为（28±2）％、（17±2）％、（6±2）％及（4±2）％.人胃癌细胞系KATO-Ⅲ分选后阳性组中CD133＋亚群比例分别为（91±3）％;培养1周后,达到（95±2）％,并不断增殖形成细胞球.而且其增殖能力强于阴性细胞[群体倍增时间分别为（21±3）h和（40±8）h,P＜0.05].CD133阳性组和未分选组细胞裸鼠皮下接种时成瘤率分别为100％和80％;而CD133阴性组不成瘤,CD133阳性组移植瘤平均体积及重量均大于未分选组（P＜0.05,P＜0.05）.单克隆形成实验示单个CD133＋细胞可形成新的细胞克隆.半定量RT-PCR检测示其表达干细胞标记物Oct-4、Nanog、Sox-2、Musashi-1及EGFR.结论 体外可成功分离、纯化和扩增人胃癌细胞CD133＋亚群,其具有自我更新、增殖能力及较强的致瘤能力,并表达部分干细胞相关基因.     

TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化及促进干细胞特性获得的研究

目的 观察TGF-β1能否诱导胃癌KATO-Ⅲ细胞上皮间质转化及促进胃癌细胞干细胞特性的获得.方法 5 ng/mL TGF-β1处理胃癌KATO-Ⅲ细胞72 h后,置于倒置显微镜下观察其形态学变化,CCK-8法检测TGF-β1对KATO-Ⅲ细胞增生的影响,RT-PCR与Western blotting法检测上皮间质转化相关因子Snail、E-cadherin、N-cadherin,胚胎干细胞相关因子Sox2、OCT4、Nanog、EGFR及肿瘤起始细胞相关标志物CD44、CD133表达的变化.单克隆形成实验研究TGF-β1对KATO-Ⅲ细胞克隆形成能力的影响.结果 TGF-β1处理KATO-Ⅲ细胞后,细胞形态由上皮细胞形态向间质细胞样形态转变;TGF-β1处理组KATO-Ⅲ细胞Snail、N-cadherin mRNA表达相对灰度值为(0.5219±0.0147)、(0.6640±0.0124),显著高于对照组(0.2049±0.0214,P=0.004;0.2722±0.0098,P=0.001),TGF-β1处理组Snail、N-cadherin蛋白表达相对灰度值为(0.4769±0.0234)、(0.5014±0.0216),显著高于对照组(0.2534±0.0345,P=0.02;0.2026±0.0268,P=0.009),TGF-β1处理组中E-cadherin mRNA及蛋白表达相对灰度值分别为(0.4701±0.0215)、(0.1349±0.0258),显著低于对照组(0.6792±0.0157,P=0.01;0.6055±0.0227,P=0.004);TGF-β1处理后KATO-Ⅲ细胞增生能力明显降低(P＜0.05).与对照组相比(0.143±0.013、0.156±0.025、0.325±0.046),胚胎干细胞相关因子Sox2、OCT4、Nanog mRNA表达相对灰度值显著增加(0.594±0.039,P=0.001; 0.438±0.033,P=0.001;0.489±0.037,P=0.03),TGF-β1处理组CD44与CD133 mRNA表达相对灰度值分别为(0.437±0.037)与(0.543±0.028),显著高于对照组(0.247±0.024,P=0.000;0.139±0.016,P=0.000);TGF-β1处理组CD44与CD133蛋白表达相对灰度值分别为(0.429±0.034)与(0.316±0.027),显著高于对照组(0.152±0.014,P =0.000;0.110±0.010,P=0.000).TGF-β1处理后,KATO-Ⅲ细胞克隆形成数目及直径均显著高于对照组(P＜0.01).结论 TGF-β1能诱导胃癌KATO-Ⅲ细胞发生上皮间质转化转变,同时促进其干细胞特性获得.     

胆囊癌CD133阳性细胞侵袭机制的实验研究

目的研究胆囊癌CDl33阳性细胞侵袭能力的产生机制。方法Yranswell法检测CDl33阳性细胞和CDl33阴性细胞的迁移和侵袭能力。半定量聚合酶链式反应（RT-PCR）法、蛋白免疫印迹法、细胞免疫荧光法分别检测CDl33阳性细胞和CDl33阴性细胞中CXCR4的表达。分别用SDF-let、AMD3100作用GBC-SD细胞后，Transwell法检测CDl33阳性细胞和CDl33阴性细胞的迁移和侵袭能力。半定量RT-PCR法检测GBC-SD细胞中CDl33mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测GBC．SD细胞中CDl33蛋白表达。结果①CDl33阳性细胞中穿膜细胞数明显多于CDl33阴性细胞（23．78±8．74比6．564-3．09，P=0．0007）。②CDl33阳性细胞中CXCR4mRNA相对灰度值明显高于CDl33阴性细胞（0．6424＋0．0204比0．3359±0．0432，P=0．004）；CDl33阳性细胞中CXCR4蛋白表达相对灰度值明显高于CDl33阴性细胞（0．7650±0．1066比0．4094±0．0195，P=0．013）；CDl33阳性细胞中CXCR4荧光蛋白表达明显强于CDl33阴性细胞。③细胞侵袭能力：穿膜细胞数量在CDl33阳性细胞中，与空白对照组（23．78±8．74）相比，SDF-1et组（62．89±15．27）明显增加（P=0．0006），AMD3100组（10．33±2．00）明显减少（P=0．0002）；在CDl33阴性细胞中，与空白对照组（6．59±3．09）相比，SDF-let组（6．89±4．23）无明显变化（P=0．41），AMD3100组（6．11±2．67）亦无明显变化（P=0．38）。④细胞迁移能力：迁移细胞数量，在CDl33阳性细胞中，与空白对照组（35．56±10．97）相比，SDF-1et组（74．56±15．80）明显增加（P=0．0003），AMD3100组（12．67±2．40）明显减少（P=O．0002）；在CD133阴性细胞中，与空白对照组（9．56±1．74）相比，SDF-let组（9．78±2．04）无明显变化（P=0．43），AMD3100组（9．54±1．74）亦无明显变化（P=0．42）。⑤在GBC．SD细胞中CDl33mRNA表达：与空白对照组（0．4500±0．0243）相比，SDF．1et组明显增加（0．6265±0．0487，P=0．004），AMD3100组（0．3593±0．0473）明显下降（P=O．011）；CDl33蛋白表达：与空白对照组（0．4409±0．0130）相比，SDF．1et组（0．5089±0．0207）明显增加（P=0．016），而AMD3100组（0．3177±0．0137）明显下降（P=0．004）。结论胆囊癌CDl33阳性细胞高侵袭能力可能由于高表达CXCR4。     

趋化因子及其受体与胃癌的关系

目的 介绍趋化因子及其受体,尤其是CCL19/CCL21-CCR7及CXCL12-CXCR4轴在胃癌发生、发展中的作用.方法 查阅国内、外近年来有关趋化因子及其受体与胃癌关系的文献并作综述.结果 趋化因子及其受体通过对胃癌生长微环境的调控,CCL19/CCL21-CCR7在胃癌淋巴结转移过程中起着突出作用,CXCL12-CXCR4轴在胃癌腹膜转移过程中起着关键作用.CCR7可能成为特异性评价胃癌淋巴结转移潜能的分子标志物.阻断CXCL12-CXCR4轴有助于推动进展期胃癌腹膜转移治疗策略的进一步发展.结论 趋化因子及其受体从不同的方面促进胃癌的演进,了解这些方面的机理可以为未来的治疗提供理论依据.以趋化因子及其受体作为一种胃癌标志物和肿瘤治疗的新靶点,在胃癌侵袭转移的评估、预后判断和治疗方面将有着广阔的临床应用前景.     

胃癌患者外周血CD133 mRNA检测及其临床意义

目的 探讨胃癌患者外周血CD133 mRNA表达情况及其临床意义.方法 抽取10名健康志愿者（组1）、5例胃溃疡穿孔患者（组2）,18例胃癌术前患者（组3）及19例胃癌术后患者（组4）外周静脉血2 ml,分离单核细胞,采用半定量RT-PCR检测CD133 mRNA表达水平.结果 组3患者外周血CD133 mRNA灰度值显著高于组1和组2（P=0.001）.组4患者中12例复发转移者外周血CD133mRNA灰度值显著高于7例无复发转移者（P=0.042）.CD133 mRNA表达与淋巴结转移和肿瘤分期有关（P＜0.05）.CD133 mRNA灰度值与淋巴结转移率呈正相关（P=0.007）.结论 胃癌患者外周血高表达CD133 mRNA,其表达与淋巴结转移率正相关.胃癌术后外周血高表达CD133mRNA提示肿瘤复发或转移.     

TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化及其上调CD44表达的实验研究

目的 观察TGF-β1诱导胃癌SGC7901细胞发生上皮间质转化及其对胃癌细胞生物学特性与肿瘤起始细胞特性的影响.方法 TGF-β1处理胃癌SGC7901细胞后,观察其形态学变化;CCK-8法检测细胞增生能力;划痕实验及transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力;免疫荧光法检测上皮钙黏素及间质钙黏素表达的变化;逆转录PCR法与免疫蛋白印迹法检测上皮间质转化相关因子及CD44的表达.结果 TGF-β1处理SGC7901细胞后,细胞形态由上皮细胞形态向间质细胞样形态转变;TGF-β1处理后,处理组划痕愈合程度明显高于对照组(P＜0.05),处理组穿膜细胞数目(107.67±5.48)显著高于对照组(53.33±8.47,P＜0.05),TGF-β1处理组SGC7901细胞上皮钙黏素表达显著降低(P＜0.05),间质钙黏素(P＜0.05)与Snail(P＜0.05)表达显著增加,肿瘤起始细胞相关标志物CD44表达显著增加(P＜0.05).结论 TGF-β1可诱导胃癌SGC7901细胞发生上皮间质转化,增加CD44表达,抑制胃癌细胞增生,促进其侵袭和迁移.     

基质细胞源性因子-1α/CXC趋化因子受体-4轴经PI3K/Akt通路对胃癌细胞CD133表达的调控作用

目的 观察胃癌中基质细胞源性因子-1α/CXC趋化因子受体-4(SDF-1α/CXCR4)轴经由PI3K/Akt信号通路对下游分子CD133表达及其活性的影响.方法 免疫细胞化学染色检测胃癌KATO -Ⅲ细胞株中CXCR4、Akt、p-Akt及CD133的表达.分别用SDF-1α、AMD3100及LY294002作用于胃癌KATO -Ⅲ细胞株,半定量酶链聚合反应(PCR)检测CXCR4 mRNA和CD133mRNA的表达变化,蛋白免疫印迹法检测CXCR4、Akt、p-Akt及CD133蛋白的表达变化.结果 免疫细胞化学染色证实KATO -Ⅲ细胞呈CXCR4、Akt、p-Akt及CD133阳性表达.SDF-1α组中,CXCR4蛋白(0.980±0.083)、p-Akt蛋白(0.770±0.071)及CD133蛋白(0.890±0.078)表达与对照组(0.750±0.042、0.680±0.038、0.720±0.034)比较明显增高(P＜0.05).与对照组(0.540±0.036、0.520±0.034)比较,CD133 mRNA(0.890±0.061)表达明显增高(P＜0.05).AMD3100组与对照组(0.750±0.042、0.680±0.038、0.720 ±0.034)比较,CXCR4蛋白(0.430±0.055)、p-Akt蛋白(0.350±0.050)及CD133蛋白(0.110±0.060)表达显著下降(P＜0.05).LY294002组中,p-Akt蛋白(0.100 ±0.033)、CD133蛋白(0.440±0.055)表达与对照组(0.680±0.038、0.720±0.034)比较显著下降(P＜0.05).同时,与对照组(0.540±0.036)比较,CD133mRNA(0.310±0.021)表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 刺激或抑制SDF-1α/CXCR4轴可经由PI3K/Akt信号通路上调或下调CD133表达.     

腹部复杂粘连腹腔镜胆囊切除术12例分析

目的分析12例因腹部多次手术造成腹腔复杂粘连的患者行腹腔镜胆囊切除术的安全性、可行性。 方法回顾性分析研究12例多次腹部手术后腹部复杂粘连腹腔镜胆囊切除患者的临床资料。 结果12例患者中,11例顺利完成腹腔镜胆囊切除术,1例中转开腹。手术时间33～108 min,平均(59.3 ± 17.2)min。术中使用3～6个Trocar。术后住院时间3～8 d,平均(4.2 ± 1.5)d。所有患者随访6个月,均未出现出血、胆漏、胆管损伤等并发症。 结论多次腹部手术后腹腔复杂粘连患者行腹腔镜胆囊切除术安全、可行,患者创伤小、术后恢复快。