抗CD28＋B7．1单抗共刺激T细胞诱导肝癌细胞凋亡的第二信使系统研究

目的：探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法：用CD28＋B7．1（CD80）单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞（BLE－7402）凋亡,测定不同诱导时间T细胞内cAMP,cGMP和Ca^2 的浓度改变及肝癌细胞凋亡情况。结果：活化的T淋巴细胞中,cAMP浓度在初期短暂升高,继而快速下降,作用于肝癌细胞后逐步回升至1－2倍,而细胞内cGMP的浓度急剧升高6－7倍,Ca^2 浓度也显著增加2－3倍,且均在第4天达最高值,与癌细胞的凋亡呈正相关,结论：T淋巴细胞内第二信使系统cAMP、cGMP和Ca^2 的水平与细胞的活化增殖、杀伤效应密切相关。     

华支睾吸虫成虫总RNA的一步法提取与纯化

目的 对华支睾吸虫cDNA文库的构建提供基础。方法 采用硫氰酸胍－酚－氯仿一步法提取华支睾吸虫成虫总RNA。结果与结论 3.5h左右可自华支睾吸虫成虫获得高纯度、完整性好的RNA。其总RNA存在体内缺口现象,28s电泳主带缺如。     

MOG-IgG在补体参与下介导脱髓鞘损伤体外模型的建立及应用

目的 通过建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病（MOGAD）体外脱髓鞘模型探讨MOGAD的发病机制并筛选疾病治疗药物。方法 采用基于转染细胞的亲和层析方法纯化患者来源的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白自身抗体（MOG-IgG）。基于大鼠小脑切片和神经元-少突胶质细胞共培养的髓鞘模型,通过MOG-IgG和补体共同作用建立MOGAD体外脱髓鞘模型,将髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达量及与神经微丝蛋白（NF）共定位情况作为评估髓鞘形成和损伤的指标。分析多发性硬化促髓鞘再生药物在该模型中的髓鞘修复作用。结果 应用转染细胞的亲和层析方法可获得高特异MOG-IgG。经抗体补体作用后,MOG-IgG组MBP表达水平降低（P = 0.003）,MBP-NF共定位程度降低（P < 0.001）。经药物作用后,氯马斯汀组和多潘立酮组MBP表达水平上升（P = 0.030,P = 0.001）,MBP-NF共定位程度增加（P均< 0.001）。结论 应用该法获得患者来源的高特异MOG-IgG在补体的参与下直接介导髓鞘损伤。氯马斯汀和多潘立酮在MOGAD体外脱髓鞘模型中能促进髓鞘再生。     

药用海洋生物功能基因组研究

在资金有限和技术相对落后的情况下,如何开展我国的功能基因组研究,尽快进行具有资源优势的海洋生物功能基因组研究无疑是我国基因组研究领域赶超国际的突破口之一。结合现代基因组学的研究进展和发展趋势,以及我国传统中医药学研究和应用的基础,本文从一个新视角提出了开展药用海洋生物功能基因组研究的策略。为促进我国中医药的现代化和海洋生物肽类活性物质的研究提供了一个全新的思路和方向。本刊开辟“药学前沿”栏目,选登优秀的前沿药学研究论文,目的是活跃交叉科学和边缘学科在中药研究领域的碰撞,促进中药研究的发展。     

赤魟亲环素A的融合表达、纯化及活性特征

目的探讨赤鱼亲环素A基因(dsCypA)的生物学功能.方法构建硫氧还蛋白基因融合表达体系PETTRx-dsCypA,低温诱导表达的融合蛋白dsCypA-TRX,利用金属螯合亲和层析纯化后,经蛋白酶切割和进一步纯化,得到高纯度成熟重组dsCypA,测定其酶活性.结果重组dsCypA具有与人CypA相近的肽基脯氨酸顺反异构酶活性,这在鱼类CypA中是首次报道.结论 dsCypA的功能克隆可能部分地解释赤魟工尾刺中药应用的分子生物学机制,也为从比较生物学的角度,深入开展CypA基因的结构与功能关系研究奠定了基础.     

赤魟尾刺cDNA表达文库的构建

目的　以赤尾刺为出发材料,构建以真核表达载体pcDNA 3.0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法　应用SMART^TM cDNA Library Construction 技术和初步生物信息学分析等方法。结果　通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析,已获得了56个赤新EST序列,其中已确定的全长cDNA克隆有24个,包括IPL肿瘤抑制因子、亲环素cyclophilin A、硒蛋白selenoprotein W、半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin A、tyrosyl-tRNA synthetase 和 calcineurin 类似物蛋白等。结论　这些基因在赤中绝大多数均为首次发现。赤尾刺cDNA表达文库的成功构建,将有利于对赤尾刺中药应用的分子作用机理的深入研究     

华支睾吸虫cDNA文库的构建

目的　构建华支睾吸虫cDNA文库。方法　采集华支睾吸虫阳性鱼 ,分离囊蚴 ,感染实验动物兔 ,解剖兔收集华支睾吸虫成虫虫体。应用“一步法”提取华支睾吸虫总RNA ;经过mRNA纯化、cDNA合成 ,以PcDNA3(Amp +)质粒为载体构建文库。挑取 2 0个克隆进行扩增 ,选择 9个克隆进行DNA序列测定。序列结果与GenBank中相关基因进行比对。结果　获得含有 9 7× 10 5个重组子库容量的华支睾吸虫cDNA文库。其中PC6号克隆基因序列与华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列具有 93%的同源性。结论　已构建成华支睾吸虫cDNA文库。     

人白细胞介素10的克隆及分泌表达

目的：研究人白细胞介素10（hIL-10)的高效分泌表达。方法：根据Genbank报道的hIL-10基因序列，人工合成hIL-10基因，并将某些稀有密码子替换成E.Coli偏爱密码子，克隆至pUC18质粒中，测序结果与预期一致，将hIL-10基因克隆至PET22b，构建分泌表达克隆PET22b-hIL-10，经IPTG诱导在大肠杆菌BL21（DE3）中表达hIL-10天然蛋白。结果：SDS－PGAE电泳及凝胶密度扫描分析显示，重组蛋白分子量约为18KD和21KD(含信号肽），不同温度条件下重组蛋白的表达状态和表达量不同，结论：18摄氏度重组蛋白hIL-10的表达量为7．6％。