体外转染Cyclin A2基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响

目的探讨体外转染细胞周期素A2(Cyclin A2)基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响,为心脏再生提供细胞学依据。方法 SD乳鼠12只,分离、培养、鉴定原代乳鼠心肌细胞并分为3组,实验组:转染带有强化绿色荧光蛋白(GFP)和Cyclin A2基因的重组腺病毒(Ad-Cyclin A2-GFP);空病毒组:转染不含目的基因带有GFP的重组腺病毒(Ad-Null-GFP);阴性对照组:未做转染处理,仅加入等量的培养基。利用GFP示踪技术,评估原代心肌细胞转染效率;转染后的细胞继续体外培养3~5d,利用免疫荧光技术分别检测Cyclin A2、磷酸化组蛋白H3(H3P)、心肌肌钙蛋白-T(c Tn T)。结果 1.荧光GFP示踪表明原代心肌细胞的转染效率高达(97±0.74)%;2.免疫荧光标记显示,空病毒组和对照组结果相似;心肌细胞特异性标记蛋白c Tn T分布于细胞质,原代心肌细胞纯度高达(95±0.62)%;心肌细胞Cyclin A2主要在胞核内聚集,少数分布于细胞质。H3P为核蛋白在细胞核内分布。3.转染Cyclin A2后,实验组H3P阳性率明显高于空病毒组和对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组可见大量多核细胞,以双核为主,伴少量3核细胞。结论腺病毒作为转染载体对原代心肌细胞有很好的侵染效率;Cyclin A2超表达促进原代心肌细胞形成双核。     

心脏成纤维细胞生物表型多样性

目的 探讨心脏成纤维细胞（CFs）生物表型多样性。方法 新生1～3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白（vimentin）、成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1）和盘状结构域受体（DDR2）的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况。 结果 酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高。Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达。部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog⁺ /CD73⁺共表达阳性率最高（59.02%±8.39%）,与其他3组相比差异均有极显著性（P<0.01）;而 nanog⁺ /CD90⁺共表达阳性率与nanog⁺ /sca-1⁺之间差异无显著性（P>0.05）,但这两组与CD90⁺ /sca-1⁺相比差异均有极显著性（P<0.01）;CD90⁺ /sca-1⁺共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义（P<0.01）。 结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性。     

着丝粒蛋白A在大鼠心脏的表达及增龄变化

目的 探讨着丝粒蛋白A（CENP-A）在大鼠心脏中的表达部位及增龄变化。方法 取新生1 d、1周龄、2周龄、3周龄、4周龄、3月龄、6月龄大鼠各10只,采用免疫组织化学、免疫荧光、Western blotting、Real-time PCR技术,观察心脏不同部位CENP-A的分布和增龄变化;利用图像分析系统对CENP-A进行定量分析,并对不同年龄组心脏CENP-A含量进行对比。结果 大鼠心脏中CENP-A的表达主要分布在血管壁、心外膜及外膜下组织。随着年龄增长血管壁中CENP-A表达基本稳定,心外膜及外膜下组织中CENP-A表达逐渐减少,新生1 d表达最多,3月龄、6月龄明显减少。血管壁中CENP-A主要是在平滑肌细胞表达,且各年龄段表达基本不变。在靠近心外膜的组织中也有少量心肌细胞表达,且随增龄变化而减少。结论 大鼠心脏CENP-A的表达随增龄变化逐渐减少,血管壁CENP-A的表达稳定不变。     

心脏端粒酶的研究概况

端粒长度、端粒酶活性在心血管疾病发生发展过程中的变化引起了心血管界的关注。现就端粒酶在正常心脏中的表达及活性的变化,端粒酶与心肌细胞损伤、冠状动脉粥样硬化、心力衰竭等心血管疾病之间的关系和检测心脏端粒长度和端粒酶活性的技术和方法作一综述。     

5-氮杂胞苷诱导大鼠心脏成纤维细胞向心肌样细胞分化进程相关基因的表达差异

目的 探讨5-氮杂胞苷（5-aza）诱导心脏成纤维细胞（CFs）向心肌样细胞分化5 d、7 d、14 d、21 d和28 d相关基因的表达差异。方法 新生1～3 d SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新生大鼠CFs,采用CFs分子标记盘状结构域受体2（DDR2）并行细胞免疫荧光染色。含15 μmol/L 5-aza心肌细胞诱导液培养第3代CFs, Real-time PCR检测心肌化诱导不同时间点相关基因vimentin、DDR2、Nanog、sox2、c-kit、sca-1、Tbx5、CD73、CD34、cMyc、klf4、Gata4、Oct4、Mef2c和心肌肌钙蛋白T（cTnT）的表达差异,细胞免疫荧光检测心肌化诱导后5 d、7 d、14 d、21 d和28 d肌钙蛋白T（cTnT）的表达。透射电子显微镜观察心肌化诱导28 d CFs的超微结构变化。结果 5-aza诱导CFs后3 d 细胞生长速率减慢,部分细胞由三角形、梭形向圆形和杆状转变。诱导后7 d、14 d、21 d 和28 d,与诱导前相比,DDR2表达稳定,vimentin在14 d表达下降,Nanog、c-kit、sox2和Tbx5伴随着心肌化进程呈现表达下降趋势,而CD73、Mef2c、CD34、Gata4、Oct4和cTnT表达逐步增加,sca-1在7 d 表达上升又下降,cMyc和klf4在14 d表达上升又下降。诱导后 5 d少量细胞表达cTnT,14～21 d cTnT阳性细胞数明显增高,28 d表达cTnT较多且趋于稳定。透射电子显微镜显示,CFs心肌化诱导28 d,细胞与细胞间出现端-端连接,细胞质内出现大量的肌原纤维,排列较为规律,但肌节不明显,H带、Z线和M线显示不清。结论 CFs经5-aza诱导,可向心肌样细胞分化,但不能形成成熟的心肌细胞。     

广西猕猴房室结的形态学特征

目的探讨猴房室结的形态学特征,比较物种之间的生物学差异。方法取4例广西猕猴房室结区域,石蜡包埋,连续切片,分别用HE染色、Van Gieson染色和间苯二酚品红液染色,光镜观察其房室结的形态学特征和组织结构。结果猴房室结呈前后长的三角体状。左侧紧贴中心纤维体,右侧有胶原纤维和心房肌覆盖。向前延续为房室束。房室结内存在少量起搏细胞、Purkinje细胞和大量移行细胞。细胞间质内含量有大量胶原纤维和丰富的弹性纤维,两者交织成网。结论广西猕猴房室结的形态较人和其他动物相似,细胞成分较成年人典型,间质内胶原纤维和大量弹力纤维丰富。     

Nanog在大鼠心肌梗死后组织表达的变化

目的:研究nanog在心肌梗死后心肌组织表达的变化,为急性心肌缺血的临床治疗和研究提供形态学依据。方法:健康雄性SD大鼠20只,随机分心肌缺血组(即模型组,n=10)和假手术组(n=10)通过免疫荧光及Western blot等技术方法,比较两组间心肌组织细胞nanog蛋白的表达。结果:(1)荧光染色结果显示:假手术组心肌细胞中nanog蛋白均为阴性表达,模型组心肌细胞中nanog蛋白大部分为弱阳性表达。(2)Western blot结果显示模型组心肌组织nanog蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:nanog蛋白对于急性心肌缺血后的心肌修复具有一定保护作用。     

牛右心室节制索及右束支的解剖观测

目的了解牛右心室节制索及右束支的形态特点及分布规律,为比较解剖学和兽医学积累解剖学资料。方法24例新鲜市售牛心,用大体解剖和墨汁灌注方法显示牛右心室传导系。肉眼观察右心室内各结构的形态和分布,用游标卡尺测量数据,SPSS统计软件处理相关数据。结果节制索多为扁圆柱状(90.5%),长(45.48±1.32)mm,长直径(3.78±1.54)mm,短直径(2.55±1.26)mm,右束支长(65.52±20.78)mm,直径(1.45±0.56)mm。发现1例双节制索。Purkinje纤维的分布第Ⅰ、Ⅱ象限最密集,第Ⅲ三象限较少分布,第Ⅳ象限分布最少。结论牛心节制索的形态与其他哺乳动物相似,其中有右束支穿行,其表面有分布不均的Purkinje纤维。     

心肌梗死后心淋巴管的改变及其意义

心淋巴管作为心组织的主要组成之一，参与心肌间流体平衡的调节，对维持心肌正常代谢、心肌细胞内环境的稳定起着重要作用。阻断心淋巴循环可以引起心肌变性、水肿及心律失常，因此，心肌病诊断和治疗中应考虑到淋巴因素，尤其是心肌梗死。心肌梗死后的心淋巴管再生将可能在临床治疗中具有重要意义。     

兔心包液CD44和波形蛋白阳性细胞具有多项分化潜能

目的 探讨兔心包液内的细胞成分及其分化潜能,为心包液细胞基础研究和临床应用提供形态学依据。 方法 成年新西兰大白兔 30 只, 无菌开胸,用输液针软管抽取心包液,离心培养。取不同培养代次细胞,倒置显微镜下行细胞形态观察。利用免疫荧光技术对心包液细胞进行免疫显色,观察CD44、CD45、波形蛋白（vimentin）的表面标记。取第3代细胞进行成骨、成脂诱导。利用 PCR技术检测CD44、CD45、vimentin相关分子表达情况及分析表达量的差异。结果 成年兔心包液中含有形态较为均匀、生长状态良好、增殖能力强的细胞群。免疫荧光结果显示,CD44、vimentin阳性表达, 不表达CD45。成脂和成骨诱导后,可向成骨和成脂细胞分化。 结论 兔心包液中含有多项分化潜能的细胞,它们可能对心肌修复具有积极意义。