嗅内衬细胞的培养

目的 :探索一种简单的培养纯化嗅内衬细胞的方法。方法 :取新生 2 0 d的大鼠嗅球表层 ,以阿糖胞苷和牛垂体提取液分别作用 ,应用差速贴壁分选方法纯化培养细胞 ,以P75NGFR抗体鉴定。结果 :取得了较高纯度的嗅内衬细胞。结论 :应用阿糖胞苷和牛垂体提取液 ,联合差速贴壁分选法是有效可行的获取高纯度嗅内衬细胞的方法。     

CYP2B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

目的:构建CYP2 B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白。方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2 B6基因,并将其分别插入pET-22b( )、pET-28b( )和pET-32a( )质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2 B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b( )-CYP2 B6未见目的蛋白表达;pET-28b( )-CYP2 B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a( )-CYP2 B6可以高效地表达CYP2 B6,在低浓度(50μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2 B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2 B6。结论:成功地使CYP2 B6基因在原核系统中高效表达。     

颅内出血—急性白血病死亡的主要原因(附32例分析)

１　临床资料１－１　５１例急性白血病（ＡＬ）的死亡原因　在５１例死亡的ＡＬ中,死于颅内出血者３２例;呼吸衰竭７例;循环衰竭２例;多脏器功能衰竭４例;感染性休克２例;ＤＩＣ２例;大咯血窒息１例;重症肝炎、肝昏迷１例。１－２　颅内出血死亡病例资料　３２例死于颅内出血的病例中,男１７例,女１５例,年龄１１～６８岁。按ＦＡＢ分型标准,Ｍ１３例;Ｍ２１４例;Ｍ３７例;Ｍ５１例;Ｍ６２例;Ｌ１２例;Ｌ２２例;Ｌ３１例。３２例病例中７例因病情危重在化疗前死亡;３例为治疗缓解后复发者;其余２２例均为持续未缓解病…     

GST-HPV18 E7融合蛋白纯化及相互作用蛋白的检测

目的筛选人类乳头瘤病毒(HPV)18E7相互作用蛋白质,为进一步研究HPV18E7的功能及致癌机理提供线索。方法通过基因工程技术体外构建表达载体,诱导可溶性GST-HPV18E7融合蛋白的高效表达,glutathione Sepharose4B亲和层析纯化,利用GST-pulldown方法初步筛选与HPV18E7结合的蛋白质,并经双向电泳分离,质谱分析,用Mascot软件在蛋白质数据库中进行检索并鉴定。结果纯化的GST-HPV18E7融合蛋白与CHO细胞相互作用后,捕获到与HPV18E7作用的蛋白质,经双向电泳分离得到分辨率较好的图谱,并对其中的26个蛋白质点进行分析,初步鉴定出19个涉及参与细胞的增殖、分化、细胞周期调控、免疫调节及物质代谢等方面的蛋白质。结论所鉴定出的与HPV18E7相互作用的蛋白质,有望成为今后研究HPV致癌机理及抗病毒治疗的候选靶蛋白。     

芪丹通脉片预防大鼠急性心肌缺血及对VEGF, bFGF表达的影响

目的: 研究芪丹通脉片 (QDTMT)对大鼠急性心肌缺血预防作用及其可能作用机制. 方法: 采用SD大鼠为研究对象,随机分为假手术组、损伤组、QDTMT大剂量组、QDTMT小剂量组. 各组均用生理盐水配置等体积药液灌胃14 d,每日2次. 冠脉结扎方法制造心肌梗死动物模型,采用心肌酶谱、心梗面积来检测模型,免疫组织化学染色检测缺血心肌血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达. 结果: 与模型组相比,用药组大鼠血清肌酸激酶同工酶含量降低乳酸脱氢酶[LDH: (946±83) U*L-1, (754±75) U*L-1 vs (1582±90) U*L-1, (P<0.01); CPK: (1135±69) U*L-1, (960±39) U*L-1 vs (1513±47) U*L-1, (P<0.01)],心肌梗死面积缩小,VEGF,bFGF表达增加. 结论: QDTMT能够预防急性心肌缺血;刺激心肌分泌VEGF, bFGF可能是其重要的作用机制之一.     

体外刺激肾移植受者外周血淋巴细胞进行免疫监测的临床研究

目的探讨应用体外刺激外周血淋巴细胞的方法进行免疫监测来预测肾移植术后急性排斥反应的价值。方法选取40例肾移植受者,将其分为急性排斥反应组(20例)和肾功能正常组(20例);选取10名健康供者作为正常对照组。抽取所有研究对象的外周静脉血,分离出外周血淋巴细胞,并经佛波酯(phorbol myfismte acetate,PMA)和离子霉素(ionomycin,Ion)体外刺激8h。应用流式细胞术检测细胞培养上清液白介素(IL)-2、IL-6的表达强度及CD3+CD69+、CD3+CD71+淋巴细胞比例;应用受试者工作特征(ROC)曲线评价IL-2联合IL-6、CD3+CD69+联合CD3+CD71+预测肾移植术后急性排斥反应的敏感度和特异度。结果急性排斥反应组的IL-2、IL-6的荧光强度和CD3+CD69+、CD3+CD71+淋巴细胞比例均显著高于肾功能正常组(P≤0.01);IL-2联合IL-6预测肾移植受者急性排斥反应的敏感度为0.90,特异度为0.95。CD3+CD69+联合CD3+CD71+预测急性排斥反应的敏感度为0.95,特异度为0.90。结论监测肾移植受者外周血淋巴细胞体外刺激上清液中的IL-2、IL-6及CD3+CD69+、CD3+CD71+的表达强度,可以预测急性排斥反应。此法简便,敏感度和特异度高。     

长期联合化疗对成人白血病患者外周血细胞姐妹染色单体交换率的影响

目的 :探讨长期联合化疗对缓解期成人白血病患者是否有潜在的诱变性。方法 :应用姐妹染色单体交换 (SCE)技术检测 44例白血病患者外周血细胞 SCE率的改变。结果 :初治、复发的急性白血病 (AL)和 CML组患者 SCE频率明显高于 CR- AL 组和正常对照组 ;CR- AL 仍有少部分高 SCE病例 (5 / 16 ) ,而此类病例主要分布在接受联合化疗在 9个疗程以上的 CR- AL 的患者中 (3/ 6 )。结论 :初治、复发 AL 和 CML 患者存在着 DNA的损伤或 DNA修复机制缺陷 ,长期反复联合化疗可能引起部分病例 DNA的不稳定。     

芪丹通脉片预防异丙肾上腺素所致的大鼠慢性心肌缺血

目的：研究芪丹通脉片（QDTMT）对大鼠慢性心肌缺务预防作用及其机制。方法：采用SD大鼠为研究对象，比较观察QDTMT长期小剂量组药对异丙肾上腺素所致的心肌缺血保护作用，通过检测心肌血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)表达，探讨其可能作用机制。结果：未注射ISO组未见VEGF，bFGF表达，而在注射异丙肾上腺素（Iso）各组VEGF，bFGF表达均增加，给药组VEGF，bFGF表达量高于未给药组。结论：QDTMT能够预防慢性心肌缺血，促进VEGF，bFGF表达。     

当归补血汤血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用

目的 :观察当归补血汤血清对SMMC 772 1增殖影响的量效和时效关系 .方法 :采用纯种新西兰雄兔 2 5只 ,随机分 5组 ,分别给予 5 0mL的 32 ,16 ,8和 4g·kg-1当归补血汤和生理盐水灌胃 ,于不同时间点收集血清 ,以MTT法测定上述血清对人肝癌细胞系SMMC 772 1增殖抑制作用 .结果 :当归补血汤血清对人肝癌细胞SMMC 772 1增殖有抑制作用 ,且具有时间和剂量依赖性 ,灌胃后 4 5min抑制作用最强 ,各组抑制强度分别为 0 .4 6± 0 .0 5 (32g·kg-1,P <0 .0 1) ,0 .5 3± 0 .0 6(16g·kg-1,P <0 .0 1) ,0 .5 5± 0 .0 4 (8g·kg-1,P <0 .0 5 ) ,0 .6 1± 0 .0 3(4g·kg-1,P >0 .0 5 ) .ED5 0为 12 2g·kg-1;效应半衰期为 2 .2 0h .结论 :当归补血汤经肠道进入体内具有一定的抑制肝癌细胞增殖的作用 ,该药效与时间和剂量相关     

芪丹通脉片对大鼠急性心肌缺血损伤的影响

目的 :观测芪丹通脉片 (QDTMT)急性心肌缺血损伤的影响 .方法 :用SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素 (Iso,5mg·kg-1)诱导心肌缺血模型 ,观测心肌线粒体 (Mit)三磷酸腺苷酶(ATPase)活力、Ca2 + 含量 ;在电镜下 ,观察心肌线粒体超微结构的变化 .结果 :QDTMT组Ca2 + ATPase ,Mg2 + ATPase及Ca2 + Mg2 + ATPase活性显著高于模型组 [(4 0 .9± 8.1)vs(2 3.1± 5 .7) ,(4 0 .4± 4 .4 )vs(2 1.7± 6 .6 ) ,(94 .7± 8.6 )vs (6 3.5± 9.5 )mmol·g-1,P <0 .0 5 ];QDTMT组与模型组相比Ca2 + 显著降低 [(7.6± 1.6 )vs(12 .9± 1.3) ,(37.3± 5 .3)vs(73.2± 8.9)mmol·mg-1,P <0 .0 1].同时 ,与对照组相比 ,心肌超微结构的损害明显减轻 .结论 :QDTMT减轻钙超载和保护心肌细胞超微结构的作用 ,可能是其改善心肌缺血的作用机制之一 .