能量限制对化疗大鼠卵巢的形态结构与功能的保护作用

目的探讨能量限制对环磷酰胺处理大鼠卵巢的保护作用。方法将48只10周龄大鼠随机分为对照组、能量限制组、环磷酰胺组、能量限制加环磷酰胺组。观察各组动物的动情周期,实验结束时称取卵巢重量,并进行卵巢组织形态学观察及卵泡计数,测定血清雌二醇、促黄体生成素、促卵泡生成激素评估卵巢储备功能。结果经环磷酰胺处理的大鼠出现精神萎靡、体重下降、动情周期逐渐消失,卵巢体积缩小,颗粒细胞变性、坏死,各期卵泡数均明显减少,闭锁卵泡数增加（P〈0.01）。能量限制组大鼠卵巢的原始卵泡数比对照组明显增多（P〈0.01）,窦状卵泡数减少（P〈0.01）。能量限制加环磷酰胺组的原始卵泡和初级卵泡数比环磷酰胺组明显增多（P〈0.01）,且卵巢组织受损程度较单用环磷酰胺轻。环磷酰胺处理组大鼠血清雌二醇显著低于对照组和能量限制组,促黄体生成素和促卵泡生成素水平则显著高于对照组和能量限制组（P〈0.01）。结论能量限制模型可以抑制原始卵泡的的转化使其数量明显增多,并可以适度减轻化疗造成的结构与功能损伤,使卵巢保留有一定储备功能。     

槲皮素对大鼠卵巢发育和卵巢寿命的影响

背景：研究发现一些植物雌激素可改变生殖系统发育,并可能最终影响生殖衰老的年龄。槲皮素是一种黄酮类物质,具有微弱的雌激素效应,但对卵巢卵泡发育和卵巢衰老进程究竟有无影响还不清楚。 目的：观察槲皮素对大鼠卵巢卵泡发育和卵巢寿命的影响。 方法：健康成年SD 大鼠30只雌雄按2∶1合笼所生的新生雌鼠,分为3组：母鼠灌胃组,对孕10.5 d母鼠槲皮素灌胃,1次/d,直至分娩,取1,2,4 d新生雌鼠;腹腔注射组,对正常出生后12 h内新生雌鼠槲皮素腹腔注射,1次/d,取2,4 d新生雌鼠;空白对照组：不进行任何干预的1,2,4 d新生雌鼠;观察新生鼠卵巢发育情况。另取12月龄雌性大鼠22只,以数字表法随机分为实验组和对照组：实验组用槲皮素灌胃4个月,1次/d;对照组灌胃给予生理盐水。对灌胃前和灌胃期间12月龄雌性大鼠行阴道涂片,观察大鼠动情周期模式;灌胃结束后,计算卵巢和子宫系数,苏木精-伊红染色观察各期卵泡发育情况和卵泡总数变化。 结果与结论：用槲皮素干预1,2 d龄新生大鼠未装配的卵泡均减少,而发育更晚期阶段的卵泡即原始卵泡或发育卵泡有所增加。灌胃前大部分大鼠动情周期已经不规则,用药后,随着大鼠年龄的增长,实验组与对照组显示了相似的动情周期变化：规则的动情逐渐消失,周期变得延长或不规则,灌胃结束时均以不规则动情为主。灌胃4个月后,实验组大鼠卵巢大部分由闭锁卵泡组成,另外可见少许原始卵泡、发育卵泡以及窦状卵泡和黄体,实验组窦状卵泡较对照组增加(P < 0.05),两组卵巢和子宫系数及体质量增加无差异。 提示槲皮素可能具有一定促进卵巢卵泡发育和成熟的作用,但不影响卵巢寿命。     

人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮恶性转化的研究

提要研究病毒和促癌物在食管癌形成的作用，用人胚食管上度培养和HPV18E6E7AAV感染。培养细胞分二组，SHEEC1组培养基中加入TPA(5ng/mL)4周。对照组SHEE未加TPA。细胞转化的形态，细胞周期,软琼脂培养和裸鼠致瘤性等指标皆证明SHEEC1已恶性转化。E6E7基因在FISH和PCR检测，两组细胞核皆呈阳性。结论：人胚食管上皮可用HPV18E6E7和TPA在体外协同诱导细胞恶性转化。人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮恶性转化的研究@沈忠英$汕头大学医学院肿瘤病理研究室@蔡维佳$汕头大学医学院肿瘤病理研究室@沈健$汕头大…     

腺病毒伴随病毒表达载体表达人乳头瘤病毒18型E6E7基因构建及其转化作用的鉴定

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）的E6E7基因在细胞恶性转化中所起的作用。方法：将人乳头瘤病毒（HPV）的E6E7基因克隆至腺病毒伴随病毒表达载体中，通过包装的重组病毒感染，将E6E7基因导入并整合到永生293细胞的基因组中。结果：本研究成功地构建了HPV18 E6E7 AAV病毒并感染了永生293细胞，PCR／Southern杂交分析表明E6E7基因在转化细胞293TL中确有表达，转化细胞293TC和293TL具有明显的转化表型，和亲本293细胞相比，生长速度快，接触抑制消失，集落形成率提高20倍，且集落明显增大，形成时间短。结论：成功地构建了HPV18 E6E7 AAV病毒，HPV18 E6E7基因引起永生化人上皮细胞293的恶性转化。此病毒可用于感染正常上皮细胞，研究其致癌机制。     

阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆和序列分析

Rab鸟苷三磷酸酶是细胞膜转运机制的关键调节分子,与原虫的分泌功能密切相关。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因,以便进一步探讨其功能。作者从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出2个Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆,其中1个cDNA序列长658对碱基,读码框含597对碱基,推测蛋白质序列具198个氨基酸。序列分析表明该氨基酸序列与Rab6a蛋白亚家族的同源性最高。另一cDNA序列长764对碱基,读码框含657对碱基,推测蛋白质序列具218个氨基酸。序列比对分析显示该氨基酸序列与Rab6b蛋白有较高的同源性。2个氨基酸序列都拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域、特异性RabF结构域和典型的异戊烯化结构域。进化树分析提示毛滴虫的这2个基因系Rab6家族的同源基因,在进化上更接近原虫和单细胞的酵母Rab6亚家族。序列分析还显示这2个基因都无内含子,其基因组DNA序列与其cDNA序列完全一致。     

阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶eDNA克隆和序列分析

目的 近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是，对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rabll鸟苷三磷酸酶基因，以便进一步探讨其功能。方法 使用SMART cDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库，用生物信息学进行TvRab11同源分析，鉴定TvRab11基因，用PCR方法扩增基因组DNA，TA克隆TvRab11 cDNA、测序及序列分析。结果 在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp，读码框含636bp，推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因，其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性晟高（一致性60％，相似性79％），与人类Rab11b次之（一致性58％，相似性78％）。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域（RabF1-5）。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致．提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因，其功能有待进一步研究。     

阴道毛滴虫Rab1a重组蛋白的表达和细胞内定位

目的制备阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a重组蛋白及其多克隆抗体,并对TvRab1a蛋白进行阴道毛滴虫的细胞内定位。方法将我们已构建的pQE80L/TvRab1a重组表达质粒转入大肠埃希菌E.coliM15,在IPTG诱导下表达重组蛋白,经Ni-NTA亲和柱层析后获得纯度较高的TvRab1a的重组蛋白;用经复性处理的重组蛋白免疫动物,获得TvRab1a重组蛋白抗血清,免疫印迹WesternBlot鉴定抗血清。采用荧光免疫细胞化学对TvRab1a蛋白进行细胞内定位。结果WesternBlot分析显示,TvRab1a重组蛋白可与豚鼠的抗TvRab1a血清反应,同时该抗血清在滴虫提取蛋白中检测到与预测TvRab1a分子量一致的条带;免疫荧光化学检测发现TvRab1a分布于细胞核周围的高尔基复合体与内质网。结论获得的抗TvRab1a蛋白的多抗血清可用于TvRab1a基因功能的研究;TvRab1a功能场所位于高尔基复合体与内质网。     

茶多酚对新生大鼠卵巢发育的影响

目的:探讨茶多酚对新生大鼠卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法:受孕11.5dSD大鼠灌胃茶多酚(100mg/kg,qd)直至分娩,分别用多聚甲醛固定出生后1d、2d、4d、8d龄雌仔鼠卵巢(A组),同时将正常出生后1d的雌幼SD大鼠腹腔注射茶多酚(50mg/kg×1-8d),分别固定出生后2d、4d、8d龄卵巢(B组);所有卵巢经HE染色,观察不同发育阶段的卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化方法观察叉头转录因子(FOXO3a)、促凋亡因子(Bim)和抗凋亡因子(MnSOD2)在卵巢组织中的表达水平,并以母、幼均未处理的正常同龄大鼠卵巢为对照(C组)。结果:在茶多酚干预组(包括A组和B组)卵巢内,1d、2d龄未装配卵泡比例及4d、8d龄原始卵泡比例均高于C组;A组、B组中卵母细胞TUNEL阳性率显著低于C组;FOXO3a、MnSOD2在A组的1d、2d、4d龄卵巢中的表达高于C组,但二组间的Bim表达水平相一致。结论:茶多酚能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗,可能有益于延长卵巢的生殖寿命;茶多酚可能通过上调FOXO3a的活性从而抑制原始卵泡的发育启动,同时通过激活其下游靶分子MnSOD2抑制卵母细胞的凋亡,促进卵母细胞的存活。     

二甲基亚砜和珍黄注射液联合用药对小鼠宫颈癌的抗癌作用

目的：探讨二甲基亚砜（Dimethl Sulphoxide,DMSO)和珍黄注射液（Zhenhuang injection,ZHI)联合用药对小鼠宫颈癌的抗癌作用,为临床试验提供科学依据。方法：用DMSO（50mg/kg),ZHI（20mg/kg),DMSO ZHI(DMSO 50mg/kg,ZHI 20mg/kg)分别对小鼠宫颈癌U14腹水瘤模型和实体瘤模型进行治疗,以生命延长率和抑瘤率作为疗效评价指标。实验重复两次,结果：在腹水瘤治疗实验,DMSO组,ZHI组,DMSO＋ZHI组的生命延长率分别为21．37％－25．86％,41．38％－43．59％,65．81％－69．83％,经统计学分析,三个治疗组与对照组比较均有极显著性差异（P＜0．01）,联合用药组（DMSO＋ZHI组）与单药组（DMSO组或ZHI组）比较均有极显著性差异（P＜0．01）,在实体瘤治疗实验,DMSO组,ZHI组,DMSO＋ZHI组的抑瘤率分别为22．50％,25．83％,37．50％,41．67％,60．83％,68．33％,经统计学分析,三个治疗组与对照组比较均有显著或极显著性差异（P＜0．05或P＜0．01）,联合用药组与单药组比较均有极显著性差异（P＜0．01）,结论：ZHI对小鼠宫颈癌U14有一定的抗癌作用,DMSO和ZHI联合用药能起增效作用。     

人胚食管异种移植和诱癌研究

［目的］探讨人胚食管在裸鼠体内的异种移植及苯并在诱癌。［方法］人胚食管移植至探鼠，移植的人胚食管用苯并芘诱癌，观察移植物1－4个月并取材进行光镜、电镜和免疫级化检查。［结果］人胚食管在裸鼠皮下可存活4个月以上。移植的人胚食管用苯并芘诱癌，2个月可出现浸润性鳞状上皮癌。其病变有粘膜上皮坏死脱落、再生、增生、乳头状瘤样增生、不典型增生、原位癌及浸润癌。［结论］苯并芘能诱发人食管上皮癌。实验结果将有助于食管癌病因和发病机理研究。