阿尔茨海默病与PRNP突变体小鼠动物模型

阿尔茨海默病是由β淀粉样蛋白造成的人类神经损伤性痴呆病之一,目前尚无治疗办法。朊蛋白是β淀粉样蛋白的受体,是阿尔茨海默病发病过程的关键蛋白之一,具有传递神经毒性和保护神经细胞的双重作用。人朊蛋白编码基因（PNRP）多态性影响阿尔茨海默病潜伏期和临床症状,而PRNP突变体小鼠的发现弥补了现有阿尔茨海默病动物模型的不足,并具有在朊蛋白疾病多项研究中的潜在应用价值。本文总结了朊蛋白在阿尔茨海默病病理中的作用及PRNP突变对阿尔茨海默病的影响,并详细总结了PRNP突变体小鼠的发现及在蛋白沉淀样病变研究中的应用和价值,旨在为阿尔茨海默病动物模型研究提供理论参考。     

黄芩素诱导乳腺癌细胞自噬

目的:考察黄芩素诱导乳腺癌细胞的自噬作用,并初步探讨其机制。方法:采用MTT实验考察黄芩素对乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞活力的影响,确定给药剂量。Western blot检测黄芩素(25、50和100μmol/L)及联合自噬抑制剂3-MA作用下,MCF-7细胞和4T1细胞中自噬特征蛋白LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的表达水平,流式细胞术Annexin V/PI双染法观察3-MA对黄芩素诱导MCF-7细胞和4T1细胞凋亡的影响,确认黄芩素诱导自噬的作用。通过Western blot考察自噬信号通路相关蛋白p-mTOR、mTOR、p-AKT和AKT的蛋白水平,结合AKT-mTOR激活剂EGF明确AKT-mTOR通路在黄芩素诱导乳腺癌自噬中的作用。结果:50μmol/L及其以上剂量的黄芩素可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞的活力,其作用具有显著的时效和量效性。Western blot结果表明,50和100μmol/L黄芩素作用下MCF-7细胞和4T1细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例显著增强,3-MA加入后又明显降低。流式细胞术结果显示,相比黄芩素单用组,联合自噬抑制剂可促进MCF-7细胞的坏死和凋亡。通路蛋白研究表明mTOR和AKT总量不变,其活化蛋白水平在黄芩素作用下显著降低,而加入EGF后又再次增加。结论:黄芩素可通过抑制AKT-mTOR通路诱导乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞自噬。     

基于OPG-RANK-RANKL系统研究饲粮不同钙水平对生长期WHBE兔骨代谢的影响

目的 利用护骨素-核因子κB受体活化子-核因子κB受体活化子配体（OPG-RANK-RANKL）系统,探讨饲粮不同钙水平对生长期WHBE兔骨代谢影响。方法 选择21只雄性断奶WHBE兔,随机分为3组（I、Ⅱ、Ⅲ组）,分别饲以钙水平为0.95%,1.10%和1.30%,其他营养水平基本一致的饲粮。实验期42 d。实验结束,测定兔血清钙（Ca）、甲状旁腺素（PTH）和骨源性碱性酶（BALP）含量;分别运用荧光定量PCR法和免疫组织化学法对WHBE兔骨组织进行OPG-RANK-RANKL的基因转录和蛋白表达分析。最后以RANKL/OPG比值为指标,评估WHBE兔骨代谢与饲粮钙水平间的相关性。结果 实验结果表明,I、Ⅱ、Ⅲ组在血清Ca、PTH含量和BALP活力上差异无显著性（P>0.05）。WHBE兔骨组织RANKL mRNA表达水平和RANKL/OPG mRNA比值均以Ⅱ组最低,与I、Ⅲ组差异有显著性（P<0.05）。钙水平对WHBE兔骨组织OPG-RANK-RANKL蛋白表达影响显著（P<0.01）,Ⅱ组和Ⅲ组OPG蛋白表达阳性指数均极显著高于I组（P<0.01）;而Ⅱ组兔骨组织RANK蛋白表达阳性指数则极显著低于I组和Ⅲ组（P<0.01）,RANKL/OPG的蛋白表达阳性指数比值以Ⅱ组最低,与I组差异有显著性（P<0.01）。此外,WHBE兔骨组织RANKL/OPG mRNA比值和的蛋白表达阳性指数比值均与饲粮钙水平间存在显著的二次曲线相关（R²=0.4068,0.8433,P<0.05,P<0.001）。结论 生长期WHBE兔的骨代谢与饲粮钙水平间呈显著相关性,当饲粮钙含量为1.10%时,生长期WHBE兔可获得较理想的骨代谢水平。     

高脂环境下雄激素缺乏对小型猪内脏脂肪蓄积和炎症基因表达的影响

目的 探讨高脂环境下雄激素缺乏对小型猪内脏脂肪沉积、血清激素以及炎症相关基因表达的影响。方法 将性成熟的雄性五指山小型猪随机分成三组,即不去势组（SHAM）,去势组（CAS）和去势加睾酮组（CAS+T）,每组6只,所有动物均饲喂高脂饲料。12周实验结束时,采血检测血清激素水平变化,分离内脏脂肪并进行称重,采用荧光定量PCR技术检测脂肪合成与脂肪分解基因以及炎症相关基因的表达。结果 （1）去势显著减少高脂饮食小型猪血清睾酮含量但增加其血清瘦素含量,给予外源性睾酮处理能够恢复去势小型猪血清睾酮和瘦素水平;（2）去势导致高脂饮食小型猪内脏脂肪大量沉积,给予睾酮处理后,去势小型猪内脏脂肪含量显著降低;（3）去势和睾酮处理对高脂饮食小型猪内脏脂肪组织FAS、ACC、HSL和ATGL等脂肪代谢基因的表达没有显著影响;（4）去势显著上调高脂饮食小型猪内脏脂肪组织Leptin、CD68、CCL16、CCL23和SAA等炎症基因的表达,采用外源性睾酮处理去势小型猪则能降低上述基因的表达。结论 去势诱导的雄激素缺乏促进高脂饮食小型猪内脏脂肪沉积,并上调其内脏脂肪组织中炎症基因的表达,采用睾酮处理则能够改善去势小型猪内脏脂肪蓄积和炎症反应。     

基于3.0 T磁共振成像系统初步观察WHBE兔脑部形态解剖结构

目的 基于3.0 T磁共振成像（MRI）技术,活体观察WHBE兔脑部形态解剖结构,累积WHBE兔脑的影像学基本生物学数据,为进一步拓宽WHBE兔的应用提供背景资料。方法 成年雄性WHBE兔9只,用3%戊巴比妥钠溶液静脉注射麻醉,行3.0 T MRI加兔脑专用线圈常规横断面和矢状面扫描,并测量分析脑部的各种结构大小。结果 MRI扫描可成功获得活体WHBE兔脑矢状面和横断面T2WI或T1WI图像,可完整清晰地观察到活体WHBE兔的嗅球、大脑、小脑和垂体等基本结构,并发现了4只兔脑T2WI中左右两侧颞叶海马区高信号,相应区域在T1WI出现低信号外,其余均无异常。同时,获得了额叶、海马、大脑、侧脑室、垂体等相关解剖结构的参考值。结论 采用3.0 T磁共振成像系统加上兔脑专用线圈,可以清晰地观察到WHBE兔脑部的各种形态解剖结构,并初步建立了WBHE兔脑影像学基本数据。     

高脂诱导五指山小型猪动脉粥样硬化模型的建立及Lp-PLA2的表达调控

目的 高脂诱导建立五指山小型猪动脉粥样硬化（AS）模型,观察脂蛋白相关磷脂酶A₂（Lp-PLA₂）在AS模型血浆和斑块中的表达变化。方法 将10只五指山小型猪随机分为正常对照（Ctr）组4只饲喂普通饲料、AS模型（AS model）组6只饲喂高脂饲料,连续造模24周。造模24周时,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、甘油三酯（TG）、C-反应蛋白（CRP）、Lp-PLA₂活性和成分的变化,并取主动脉进行油红O染色以及取腹主动脉血管行HE染色和IL-6免疫组化染色,观察血管脂质沉积和斑块病理以及IL-6蛋白表达变化。采用RT-PCR和Western Blot法观察腹主动脉组织中Lp-PLA₂mRNA和蛋白的表达情况。结果 与正常对照组比,AS模型组体重、体质量指数（BMI）、TC、LDL-C、HDL-C、CRP、Lp-PLA₂活性和成分均显著升高（P < 0.05,P < 0.01）,同时主动脉脂质沉积明显（P < 0.01）和AS斑块形成,腹主动脉组织中Lp-PLA₂mRNA和蛋白表达以及IL-6蛋白表达均显著升高（P < 0.05）。结论 长期高脂饮食24周能诱发五指山小型猪AS,且Lp-PLA₂在参与血管炎症和AS斑块形成中发挥了关键作用。     

慢性脑缺血大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α及β-淀粉样蛋白1-42的表达研究

目的研究慢性脑缺血大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α等免疫炎性因子和β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）表达水平的变化及两者的相关性。方法将16只SD大鼠采用随机数字表法分为模型组和假手术组,各8只。模型组大鼠永久结扎双侧颈总动脉,建立慢性脑缺血大鼠模型。假手术组大鼠切开颈部皮肤后分离双侧颈总动脉,但不结扎。使用激光多普勒血流仪检测两组大鼠手术前、手术后（30min内）海马CA1区局部脑血流（rCBF）。术后4周处死大鼠,取出大鼠脑组织并分离海马,采用ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α和Aβ1-42表达水平。比较两组大鼠手术前后rCBF与脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Aβ1-42表达水平;分析大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平与Aβ1-42表达水平的相关性。结果手术前两组大鼠rCBF比较差异无统计学意义（P＞0.05）,手术后模型组大鼠rCBF明显低于假手术组（P＜0.05）。模型组大鼠手术后rCBF明显低于手术前（P＜0.05）,而假手术组大鼠手术前后rCBF比较无统计学差异（P＞0.05）。模型组大鼠脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6等免疫炎性因子表达水平均高于假手术组（均P＜0.05）,Aβ1-42表达水平亦高于假手术组（均P＜0.05）。大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α及Aβ1-42表达水平均呈正相关（r=0.7755、0.5920、0.5536,均P＜0.05）。结论慢性脑缺血大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α等免疫炎性因子与Aβ1-42表达水平明显升高,免疫炎性反应或与慢性脑缺血所导致的脑组织Aβ1-42异常沉积有关。     

睾酮缺乏对高脂饮食小型猪血脂和肝内脂质沉积的影响

目的 探讨睾酮缺乏对高脂饮食小型猪血脂水平和肝脏脂质沉积的影响.方法 取6~7月龄性成熟后的雄性五指山小型猪18只按体重随机分成三组,即不去势组,去势组和去势加睾酮处理组,每组6只.三组动物均采用高脂饲料饲喂12周,每周测定动物体重.采血检测血清睾酮、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平变化.12周后动物处死,采集肝组织,检测肝脏TG和TC含量.肝组织标本石蜡包埋切片后进行苏木素-伊红染色,观察肝脏病理变化. 结果 (1)高脂饮食诱导后,三组小型猪体重均呈线性增长趋势,不去势和去势加睾酮处理组小型猪的体重略高于去势组小型猪,但三者差异不显著;(2)去势小型猪血清睾酮含量显著减少,但给予外源性睾酮后,睾酮水平恢复;(3)去势显著增加高脂饮食小型猪血清TC,LDL-C和TG水平,但对血清HDL-C水平没有显著影响.睾酮处理后,血清TG,TC和LDL-C水平均显著降低;(4)去势组小型猪肝脏TG和TC含量均显著高于不去势组小型猪,睾酮处理后TG和TC含量显著减少;(5)与不去势组小型猪相比,去势组小型猪肝细胞脂肪变性程度增加,睾酮处理后,去势小型猪肝脂肪变性程度明显减轻.结论 睾酮缺乏加剧高脂饮食诱导小型猪的血脂代谢紊乱,增加肝脏脂质沉积.     

D-半乳糖诱导的衰老大鼠心脏S100A8/A9及相关炎症通路基因表达的研究

目的：探讨D-半乳糖（D-Gal）诱导的衰老大鼠模型心脏差异基因表达的变化，并对其中S100钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)及其下游p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/核因子κB(NF-κB)通路关键因子进行验证。方法：（1）将8～10周龄SD大鼠随机分为正常对照（control）组和D-Gal组，每组6只。D-Gal组大鼠每天颈背部皮下注射D-Gal(150 mg/kg),control组大鼠注射相同体积的生理盐水。Morris水迷宫检测学习记忆能力；测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）水平；超声心动图测定心功能变化；进行心脏HE、Masson、衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）和二氢乙啶染色，并用透射电镜观察线粒体超微结构。转录组测序分析大鼠心脏基因表达差异，qRT-PCR和Western blot检测大鼠心肌组织衰老标志基因、S100A8/A9、p38 MAPK和NF-κB通路相关因子的mRNA和蛋白表达。（2）利用D-Gal(10 g/L)诱导建立H9C2心肌细胞衰老模型，并用S100A8/A9抑制剂帕奎莫德（paquin...     

高脂诱导下雄激素缺乏小型猪肾脏脂质沉积的关键基因表达分析

目的：探讨高脂诱导条件下雄激素缺乏小型猪肾脏脂质沉积及关键基因表达的变化。方法：将雄性五指山小型猪随机分为3组，即不去势（IM）组、去势（CM）组和去势+睾酮（CMT）组，每组6只动物，均饲喂高脂饮食。12周后检测血清肾功能指标，测定肾脏甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）含量；进行肾脏苏木精-伊红（H&E）和油红O染色，观察其脂质沉积和组织病理学变化。利用转录组测序分析肾脏组织表达谱差异，并用RT-qPCR和Western blot方法验证参与TG合成、胆汁酸代谢和雌激素合成相关差异表达基因。结果：CM小型猪肾脏重量明显低于IM和CMT小型猪（P<0.05）；与IM组和CMT组小型猪相比，CM小型猪血尿素氮含量显著升高（P<0.05），但血清肌酐和总蛋白水平没有显著变化；CM组小型猪肾脏内出现大量脂滴，且TG含量显著高于IM和CMT小型猪（P<0.05）；与IM组和CMT组小型猪相比，CM组小型猪肾脏TG合成基因包括固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)、糖类应答元件结合蛋白（ChREBP/MLXIPL）和硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）等表达升高，而胆汁酸...