逆向斑点杂交检测乙型肝炎病毒基因型及YMDD变异

目的 应用逆向斑点杂交技术检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型及YMDD变异。方法 合成有生物素标记的引物，PCR扩增两种DNA片段，与尼龙膜上的探针同时杂交，BCIP／NBT显色。结果 检测21例拉米夫啶治疗中的慢性乙型肝炎患者，11例HBV为基因型B，10例为基因型C；YMDD基序有47．6％（10／21）为YMDD，28．6％（6／21）为YVDD，23．8％（5／21）为YIDD。结论 在同一张尼龙膜上检测HBV基因型及YMDD变异，经济实惠、准确快捷，且易于开展。     

应用单链构象多态性和异源双链分析研究拉米夫定耐药变异

目的 应用单链构象多态性/异源双链分析技术研究慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后乙肝病毒准种组成的改变。方法 聚合酶链反应扩增6例患者治疗前后共12份血清标本中目的片段并逐一分析。结果 拉米夫定治疗前患者体内乙肝病毒聚合酶基因序列准种组成较复杂,准种数在7-14(平均9.8),均高于治疗后准种数4-8(平均5.7),t=3.98,P<0.05。6例患者治疗前的准种分布中有一种或两种优势准种,但比例较低(33.3％-81.80％);治疗后显著升高(78.80％-90.9％),t=3.24,P<0.05。选择优势克隆测序,6例患者经拉米夫定治疗后2例在酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)序列出现M550V/L528M,3例为M5501变异,1例无变异。结论 采用单链构象多态性/异源双链分析技术对人体内病毒作整体性的研究,可避免其他研究方法的片面性,为发现新的变异点提供机会,进一步解释拉米夫定的耐药机制。     

心脏特异性lncRNA-uc.167转基因小鼠的构建与表型分析

目的:构建lncRNA-uc.167心肌组织特异性转基因小鼠并对其进行表型分析?方法:采用SfiⅠ?AscⅠ双酶切载体质粒pRP.ExSi-Isl1和目的片段uc167-pMD18?禄R-T质粒,回收连接,从而把uc.167基因克隆入心肌组织特异表达的Isl启动子的下游,构建转基因表达载体,将所得载体线性化后,通过显微注射法建立uc.167转基因小鼠,并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型?通过心脏组织学和超声检查对转基因小鼠的表型进行了初步分析?结果:成功构建 uc.167转基因小鼠;超声心动图显示转基因小鼠心脏结构及相关功能指标均未见明显异常;心脏重量指数也无明显改变;HE染色提示心室大小和室壁厚度均无显著性差异,心肌细胞大小也无明显改变,且未见炎症浸润?细胞水肿等异常现象;Masson染色表明转基因阳性和同窝阴性小鼠均未出现明显的心肌纤维化改变?结论:uc.167转基因小鼠并未出现明显的心脏发育畸形,心脏结构与功能也未见明显异常?     

乳腺癌易感蛋白1序列结构特征及致病性突变的分析

目的:利用生物信息学方法分析乳腺癌易感基因1(BRCA1)序列结构特征,并预测BRCA1功能编码区突变与致病性遗传效应的关系?方法:采用Maximum Likelihood?ClustalW?SMART和Selecton等在线生物信息学分析工具,对BRCA1进行分子系统发育?保守性?选择压力?结构域?三维结构和错义结构的分析?结果:分析获得195个固定残基位点(10.5%)和393个保守位点(21.1%),其分布是非随机性的;发现人BRCA1序列中的保守结构域BRCT的三维结构与其他物种存在着较大的差异,表明BRCT结构域在不同物种中具有不同的生物学功能;关联性分析证实发生在保守位点的突变致病性高?结论:基于生物信息学的BRCA1序列结构分析,能充分利用相关数据的资源,加深对BRCA1基因变异与肿瘤发生的相关性的认识?     

SLC26A4基因编码区功能特征及分子进化分析

目的:探讨溶质转运家族26,成员4 (SLC26A4)基因编码区的功能特征及其突变与遗传性非综合征型耳聋(NSHL)发生的关联性?方法:应用生物信息学方法对37个物种的SLC26A4基因编码蛋白(Pendrin)的序列进行系统发育分析,并用滑窗法进一步预测保守区,同时利用在线软件对其编码产物进行结构预测和同源建模?结果:SLC26A4基因在哺乳动物中尤其是灵长目动物中高度保守,通过滑窗法预测得到了12个保守区?二维结构预测提示Pendrin的N末端和C末端可能存在卷曲螺旋结构,同源建模预测显示STAS结构域中的插入序列(IVS)存在物种间差异性?结论:SLC26A4基因突变在NSHL发生中发挥重要作用,发生在保守区的错义突变将导致蛋白结构和功能的改变,从而产生相应的表型?C末端的STAS结构域内的插入序列可能在人类中有独特的作用?     

拉米夫定与乙型肝炎病毒准种及变异特点的关系

目的 研究拉米夫定治疗前后慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒聚合酶(HBV P)基因序列的准种组成及变异特点。 方法 目的片段经聚合酶链反应扩增后克隆,每份标本选择3 3个克隆,用单链构象多态性/异源双链分析法对准种复杂性及变异特点进行分析。 结果 拉米夫定治疗前患者体内HBV P基因序列准种数为7～14(平均9.8),高于治疗后准种数4～8(平均5.7),t=3.98,P<0.05。6例患者治疗前的准种分布中有一种或两种优势准种,但比例较低(33.3％～81.8％);治疗后显著升高(78.8％～90.9％),t=3.42,P<0.05。选择优势克隆测序,6例患者经拉米夫定治疗后2例出现M550V/L526M变异,3例为M550I变异,1例无YMDD变异。此外为个体化的点突变,无明显趋势。 结论在拉米夫定的药物筛选作用下HBV准种的组成改变,同时出现YMDD序列变异。     

新生小鼠心脏再生机制的研究进展

成年哺乳动物心脏损伤后很难再生,心脏功能严重受损,发生持续性的心脏衰竭。相反,在生后早期,哺乳动物的心脏短暂地保持了再生能力。目前的研究已经在新生哺乳动物中发现了多种进化保守的心脏再生机制。现综述新生小鼠心脏再生机制的最新进展,着重介绍在蛋白激酶方面的研究成果,并讨论这些研究对未来心脏再生治疗发展的影响。     

耳聋基因GJB3c．538C〉T突变致病性效应的初步研究

目的对人GJB3基因c．538C〉T点突变进行生物信息学及功能分析，预测并验证其致病性。方法聚合酶链反应扩增含GJB3基因c．538C〉T突变的编码区全序列，DNA测序验证后与T载体连接，再通过重组DNA技术，将GJB3基因编码区全序列导入pEGFP—N1载体，构建了GJB3基因野生型（pEGFP．Cx31-wT）和突变型（pEGFP．Cx31-R180X）表达载体，验证并纯化后，分别转染人胚肾HEK293细胞，观察EGFP-Cx31融合蛋白在细胞内定位表达情况。通过生物信息学方法分析c．538C〉T突变前后。Cx31蛋白的三维空间结构和平均势能变化。结果细胞内荧光定位结果显示GJB3c．538C〉T突变后，Cx31蛋白只于胞内表达，未能正常形成细胞间隙连接结构。而生物信息学分析结果也表明突变后Cx31蛋白的三维空间结构和Anolea原子平均势能均发生了明显变化。结论GJB3基因c．538C〉T点突变导致其编码的Cx31蛋白的结构与功能发生变化，可能通过影响细胞间隙连接的形成，从而导致遗传性耳聋的发生。     

丹黄散激活PINK 1/Parkin信号通路对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的 基于PINK 1/Parkin信号通路探究丹黄散对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的作用，并探讨其具体的作用机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞进行体外培养，随机分为对照组、生长因子组、丹黄散组、高糖组、高糖+生长因子组、高糖+丹黄散组，每组3例，干预48 h;细胞划痕实验检测细胞转移率，Transwell实验检测细胞侵袭率；免疫荧光法测定抗凋亡蛋白Bcl-2、Beclin-1、促凋亡蛋白Bax的表达水平；Western blot技术测定假定激酶(PINK 1)、帕金森病蛋白(Parkin)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC 3-Ⅱ)的蛋白表达水平。结果 细胞划痕实验、Transwell实验结果显示，在正常环境下及高糖处理后，丹黄散均可降低细胞的细胞转移率和侵袭率(P<0.05);荧光免疫法结果显示，在正常环境下及高糖处理后，丹黄散均可上调细胞中的Bcl-2、Beclin-1蛋白表达水平(P<0.05);Western blot结果显示，在正常环境下及高糖处理后，丹黄散均可下调Bax的蛋白表达水平(P<0.05),升高细胞中的PINK 1、Parkin和LC 3-Ⅱ蛋白表达水...