p53表达对老年晚期非小细胞肺癌化疗效果的影响研究

121000辽宁省锦州市,辽宁医学院基础医学院免疫学教研室（王阳,卢颖,苗小青,李淑华,张佩）,护理学院（张黎黎,刘堃） 目的 检测老年晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者p53的表达情况,分析其与一线含铂化疗方案治疗NSCLC效果的关系,为NSCLC个体化治疗提供有效依据。方法 选取2007年2月-2008年2月辽宁医学院附属第一医院经病理组织学诊断的73例老年晚期NSCLC患者的病理标本,将患者按照化疗方案不同分为吉西他滨（GP）组22例,长春瑞滨（NP）组23例,多烯紫杉醇（TP）组18例,培美曲塞（AP）组10例。GP组给予GP联合顺铂、卡铂化疗,NP组给予NP联合顺铂化疗,TP组给予TP联合顺铂、卡铂化疗,AP组给予AP联合卡铂化疗。采用免疫组化法检测p53表达情况,并采用实体瘤客观疗效评价标准（RECIST）对患者化疗效果进行评价。结果 4组患者性别、年龄、病理类型、临床分期、分化程度、手术方式比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。73例患者中34例（46.6%）p53阳性表达。不同性别、年龄、临床分期、分化程度、手术方式患者p53阳性表达率比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;不同病理类型患者p53阳性表达率比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。p53阳性表达者化疗有效率为23.5%（8/34）,低于p53阴性表达者的53.8%（21/39）（χ2=8.742,P=0.004）。不同病理类型化疗有效率比较,差异无统计学意义（χ2=4.588,P=0.332）。不同化疗方案有效率比较,差异无统计学意义（χ2=5.421,P=0.143）。多因素Logistic回归分析结果显示,p53表达为NSCLC患者疗效的影响因素（P＜0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示,经不同化疗方案治疗后,NSCLC患者p53阳性表达者与p53阴性表达者总生存期（OS）比较,差异有统计学意义（χ2=10.319,P=0.002）。结论 p53阳性表达会影响NSCLC患者接受一线含铂化疗的疗效。     

重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染对人树突状细胞功能的影响

目的 研究转染pcDNA-HA/ΔNp73α重组质粒对树突状细胞（DC）功能的影响。方法 采取健康人脐带血,分离单个核细胞,置入含有白介素4（IL-4）和粒-巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）的RPMI 1640完全培养基中培养。在培养第5、7天时收获DC细胞,加入FITC-anti-CD1a、PE-anti-CD83抗体,采用流式细胞仪检测CD1a、CD83表达情况。将DC分为正常培养至成熟的DC组（空白对照组）、空载体pcDNA-HA转染的DC组（阴性对照组）、ΔNp73α重组质粒转染的DC组（实验组）。分别在转染24、48、72 h后采用荧光显微镜检测转染效率;转染48 h后收获并提取细胞总RNA,采用RT-PCR检测转染后各组ΔNp73α mRNA表达情况;采用Western blotting检测转染DC的ΔNp73α蛋白表达水平;在收获的各组DC细胞中分别加入PE-anti-主要组织相容性复合体（MHC-Ⅱ）、FITC-anti-CD40、PE-anti-CD80单克隆抗体,流式细胞仪检测CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达情况;ELISA检测各组DC细胞白介素12（IL-12）分泌水平。结果 CD1a和CD83在培养第7天的表达水平均高于培养第5天（t=16.62、34.75,P＜0.001）。DC于第7天诱导成熟。质粒转染DC后,24 h可见特异性绿色荧光蛋白表达,48 h荧光最强,转染效率为38.2%,在48 h后,绿色荧光的表达逐渐减少。实验组在670 bp处可见阳性条带,为ΔNp73α mRNA阳性表达,而空白对照组和阴性对照组未检测到ΔNp73α mRNA的表达。在实验组中检测到ΔNp73α蛋白的表达,而正常对照组和阴性对照组中未检测到ΔNp73α蛋白的表达。各组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平比较,差异有统计学意义（F=12.68、41.18、38.95,P＜0.05）;其中实验组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平均高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。各组IL-12表达水平比较,差异有统计学意义（F=37.43,P＜0.001）;其中实验组IL-12表达水平高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 从人脐带血中可成功分离DC;重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染DC促进其成熟,将有效提高DC的抗原提呈能力。