脂肪干细胞局部注射改善淋巴水肿的实验研究

目的 研究脂肪干细胞 (adipose derived stem cells, ADSCs)体内减轻炎性反应治疗淋巴水肿的可行性及作用机制,为淋巴水肿疾病的干细胞治疗探索新的思路。方法 提取小鼠皮下脂肪干细胞,体外培养、扩张至3~5代。建立淋巴水肿鼠尾模型,手术阻断鼠尾深、浅淋巴回流,造模当天,于皮下注射ADSCs或磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS),ADSCs组共20只小鼠,PBS对照组共30只小鼠。术后3周,分别用HE染色、Whole mount-BODIPY染色、Masson染色、免疫荧光染色检测鼠尾皮下组织/脂肪厚度、纤维化程度、淋巴管形态,干预后8周,FITC-Dextran检测淋巴回流。结果 ADSCs组淋巴水肿缓解,鼠尾体积在术后4周内较对照组减小;皮下脂肪厚度降低约40%;皮下组织的纤维化缓解,Masson染色结果显示胶原纤维所占面积比例下降约20%;高倍镜视野下的淋巴管数量未发生变化,但是横截面积减小约60%;FITC-Dextran检测淋巴回流发现,ADSCs组荧光染料通过手术切口明显多于PBS对照组。结论 ADSCs局部注射后,可缓解淋巴水肿。     

环孢素A联合IL-2融合蛋白在小鼠皮肤移植模型中增强乙肝疫苗免疫原性的研究

目的 研究环孢素A(CsA)联合IL-2融合蛋白对小鼠移植术后乙肝疫苗的体液免疫反应影响,寻求肝移植术后预防乙型肝炎的有效方法.方法 将C57BL/6小鼠40只,分为实验组、对照组和空白组,未免疫组,每组10只.实验组、对照组行皮肤移植后(DBA小鼠为供体),实验组给予CsA(30 mg/kg,腹腔内注射)+IL-2融合蛋白,对照组只给予CsA,空白组只行皮肤移植,3组均给予乙肝疫苗安在时,未免疫组不作任何处理.14 d后测定各组乙肝抗体滴度水平、IL-4、IL-10、IL-2、IFN-γ水平,流式细胞测定各组淋巴组织中滤泡辅助T细胞(follicular helperT cell,Tfh)的比例及应用RT-PCR测定各组淋巴组织中IL-21和叉状头转录因子FoxP3的表达.结果 实验组移植术后14 d乙肝抗体滴度明显高于对照组(F=29.886,P=0.010),皮肤移植物的存活时间也明显长于对照组(F=29.772,P=0.011),ELISA测定血清Th2类因子IL-4,IL-10的水平实验组明显低于对照组(F=42.102,P=0.009;F=23.734,P-0.015),Th1类因子IL-2和IFN-γ水平明显高于对照组(F=18.156,P=0.0020;F =90.042,P =0.003).实验组混合淋巴细胞RT-PCR测定IL-21、FoxP3的表达水平明显高于对照组(F=9.784,P =0.048;F=27.883,P=0.012).结论 CsA联合IL-2融合蛋白能够增强乙肝疫苗的抗体滴度,同时能够延长小鼠皮肤移植物的存活时间,可能与促进IL-21及FoxP3基因的表达有关.     

CD4+CD25-T淋巴细胞转化为CD4-CD8-调节T细胞的体外实验研究

目的 探讨体外诱导和纯化CD4+ CD25-T淋巴细胞(effector T cell,Teff)转化为CD4-CD8-双阴性调节T细胞(double negative regulatory T cell,DN Treg)的最适条件.方法 采用免疫磁珠分选方法提取C57BL/6小鼠的CD4+ CD25-T淋巴细胞、DBA/2小鼠的成熟树突状细胞共培养,加入不同剂量的IL-2,通过流式细胞检测CD4-CD8-T细胞的转化比例并确定最适条件,免疫磁珠阴性选择分选提纯转化的CD3+ CI4-CD8-T细胞,流式细胞仪检测转化的CD4-CD8-调节T细胞对CD4+ CD25-效应T细胞增殖抑制情况.结果 CD4+ CD25-T淋巴细胞与DBA/2小鼠的树突状细胞共培养6d后检测CD4-CD8-调节T细胞的转化比率为6.21％ ±2.03％,实验组加入不同浓度IL-2的转化率:A组(25 ng/ml)为14.77％±2.15％,B组(50 ng/ml)为21.29％±2.68％,C组(75 ng/ml)为43.45％ ±4.45％,D组(100 ng/ml)为28.59％±3.05％,IL-2浓度在75 ng/ml时,转化获得率最高(C组与对照组、实验A、B、D组比较分别t=10.700,8.288,6.158,3.932,均P＜0.05);分离提纯CD4-CD8-双阴性调节细胞纯度达到98.10％,CD4-CD8-双阴性调节细胞与CFSE染色的CD4+ CD25-T淋巴细胞、小鼠树突状细胞共培养6d,实验组增殖指数为1.15明显低于对照组2.07.结论 小鼠CD4+ CW25-T淋巴细胞在体外,成熟树突状细胞刺激下可转化为CD4-CD8-双阴性调节T细胞,IL-2可显著提高其转化率.     

下肢继发性淋巴水肿患者脂肪抽吸术中失血的处理

目的分析下肢继发性淋巴水肿患者脂肪抽吸术的失血量情况, 总结相关经验及处理策略。方法回顾性分析2018年9月至2020年1月共214例单侧下肢继发性淋巴水肿行脂肪抽吸术治疗患者的临床资料。结果患者中女209例, 男5例, 平均抽脂量(2 934.58±1 114.83 ml), 平均失血量(986.04±425.16)ml, 输血患者117例, 其中输注自体血90例, 输注异体血15例, 输注自体血+异体血12例, 患者淋巴水肿的分期、手术时间、抽脂量与失血量呈正相关, 是影响术中失血量的独立危险因素。结论下肢继发性淋巴水肿患者脂肪抽吸术的抽脂量较大、失血量较多, 是导致术后贫血的重要因素。     

成人直肠脱垂、直肠内套叠、直肠前膨出及阴道肠疝的评估与处理

直肠脱垂是指直肠全层肠壁突出于肛缘。直肠内脱垂或称直肠内套叠的定义为直肠全层肠壁脱垂但并没有突出于肛门外。直肠脱垂和内套叠常常与直肠前膨出（直肠阴道隔向前方疝人阴道）和阴道肠疝（直肠阴道腹膜形成深疝）同时存在。总地来说,这些问题常统称作“盆底功能障碍”。本综述的重点是后盆腔,即直肠,上述疾病均绕其发生。