基于UPLC-QTOF-MS的呼吸道合胞病毒感染鼠盲肠内容物代谢组研究

目的 构建呼吸道合胞病毒(RSV)感染Balb/c鼠模型,分析肺部病毒感染是否会造成盲肠内容物代谢组发生显著改变。方法 13只雌性Balb/c鼠随机分为实验(Case)组(n=7)和对照(Ctrl)组(n=6),Case组以RSV滴鼻,Ctrl组用DMEM滴鼻。在感染后第3天以10%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠,处死小鼠后采集盲肠内容物,利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)检测代谢物组成及其相对含量的变化,结合单变量统计分析(组间差异分析)和多元统计分析[主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)]鉴定在两组间有显著差异的代谢物;采用随机森林模型筛选预测RSV感染的代谢物标志物;通过代谢通路分析确定与RSV感染相关的代谢通路。结果 Case组盲肠内容物代谢物基峰强度色谱图与Ctrl组有明显差别;PCA和OPLS-DA分析均提示Case组和Ctrl组代谢物组成存在显著分离。Case组显著富集的代谢物有L-丝氨酸、2-丁酮酸、油酸和甘氨酸鹅去氧胆酸,显著降低的有L-甲硫氨酸、L-酪氨酸和烟酸等(P<0.05, VIP>1);主要与...     

轮状病毒通过STAT3磷酸化对肠道炎症的影响及机制研究

目的 探讨轮状病毒(RV)感染BALB/c乳鼠后是否通过肠内白细胞介素-22(IL-22)水平变化,促使信号传导转录激活因子3(STAT3)磷酸化,调节肠道炎症反应,为RV的致病机制和有效防治提供理论依据.方法 以RV灌胃感染7日龄BALB/c乳鼠,实验分为5组,分别为正常对照组、PBS对照组、RV感染组、RV+STAT3抑制剂组、STAT3抑制剂组.五组分别在感染后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 d各处死5只乳鼠并收集肠组织标本.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肠黏膜匀浆液IL-22含量的变化情况,免疫印迹法(Western blot)检测各组不同时间点STAT3、pSTAT3和RegⅢ-γ蛋白水平的表达变化.结果 RV感染后肠组织表现出明显的炎症反应,并且肠道内IL-22水平随感染时间延长逐渐上升,在感染第4天达最大值,pSTAT3和RegⅢ-γ蛋白水平呈现出与IL-22类似的变化趋势,而STAT3蛋白水平呈现出相反的变化趋势,在感染后第4天表达水平最低.结论 RV感染机体后可活化IL-22/pSAT3/RegⅢ-γ信号通路,调节肠道炎症的发生与发展.     

日本血吸虫感染小鼠脾多核型髓源抑制细胞变化的初步研究

目的 初步探讨在日本血吸虫感染小鼠脾脏中，多核型髓源抑制细胞（PMN-MDSC）比例、功能及脾组织病理学的动态变化。皮感染日本血吸虫尾蚴（20±1）条/鼠。感染后4、 6、 8周各组随机取6只小鼠取脾，称重并计算脾系数。固定、切片后，苏木精-伊红染色（HE）镜下观察脾组织病理变化。制备脾单细胞悬液，流式细胞术检测PMNMDSC在脾淋巴细胞比例的动态变化。荧光定量PCR检测脾组织及脾PMN-MDSC相关炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、 S100钙结合蛋白A8 (S100A8)、 S100A9、细胞功能因子精氨酸酶1 (Arg1)、一氧化氮合酶（i NOS）、血红素结合膜糖蛋白91 (gp91)、转化生长因子-β (TGF-β)和IL-10的mRNA相对表达水平。采用SPSS 22.0统计学软件进行统计分析，组间比较采用独立样本t检验和ANOVA分析。结果感染后4、 6、 8周，小鼠脾质量分别为（179±10.19）、（350.3±16.84）、（414.3±18.98） mg，脾系数分别为（0.93±0.03）%、（1.97±0.10）%、（2.31±0.08）%，均高于对照组的（1...     

自然杀伤细胞抑制血吸虫病肝纤维化作用的研究

目的 通过单抗敲低或过继自然杀伤(NK)细胞,探讨NK细胞在血吸虫病肝纤维化中的作用。方法 24只C57BL/6健康小鼠取肝脏,制备NK细胞,用白细胞介素-15 (IL-15)、IL-2、IL-18活化NK细胞。40只C57BL/6健康小鼠随机分为单抗组、IgG组、生理盐水组、NK细胞组、PBS组等5组,每组8只,每鼠经腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴(20±1)条。单抗组、IgG组和生理盐水组小鼠于感染前1周开始,每周分别尾静脉注射1次抗NK1.1单抗(100μg/鼠)、IgG (100μg/鼠)、生理盐水,每次200μl/鼠;NK细胞组和PBS组小鼠于感染后4周开始,每周分别尾静脉注射1次活化的NK细胞(1×10~5/鼠)、PBS,每次200μl/鼠。感染后6和8周,分别取各组小鼠肝脏,流式细胞术检测小鼠肝NK细胞比例变化,Masson染色观察肝组织纤维化变化,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Ⅰ-C)、Ⅲ-C、Ⅳ-C、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN) mRNA相对转录水平等肝纤维化指标。结果感染后6周,单抗组肝NK细胞比例为(2.56±0.47)%,低于IgG组的(4.75±0....     

日本斑点热立克次体近缘株重组OmpB蛋白抗原性研究

目的 探讨关于斑点热立克次体的临床诊断及流行病学调查而进行的诊断方法学研究.方法 构建R.Japonica Anhui 120 strain OmpB原核表达质粒,表达、鉴定并纯化重组蛋白,用其作为抗原建立间接ELISA检测方法,检测120份临床样本中日本斑点热立克次体特异性IgG抗体,并评价方法的敏感性和特异性.结果 获得了高表达、高纯度的OmpB重组蛋白,建立的间接ELISA方法体系与美国食品和药物管理局认可的诊断试剂盒相比有良好的特异性和敏感性,两者的特异性为100％,敏感性为96.7％,符合率为99.2％,Kappa值为0.98.结论 OmpB重组蛋白具有很好的免疫反应性,能特异地检出斑点热立克次体IgG抗体,间接ELISA方法可作为临床诊断的技术储备及流行病调查和科学研究.