睾酮对青春期大鼠病理性攻击行为及前额叶皮质PSD-95和GAP-43表达的影响

目的 探讨去势后睾酮水平对青春期大鼠病理性攻击行为和前额叶皮质突触可塑性的影响.方法 将30只出生后21 d的雄性SD大鼠随机分为去势组、模型组和对照组.去势组和模型组大鼠采用国际通用应激方法建立病理性攻击模型,持续到青春期.采用居住-入侵实验检测青春期大鼠攻击行为,ELISA法检测睾酮水平,蛋白质印迹分析检测前额叶皮质突触后致密物质95(PSD-95)和生长相关蛋白43(GAP-43)表达水平.结果 居住-入侵实验结果显示,去势组攻击潜伏期显著低于模型组和对照组(P＜0.01,P＜o.01),屈服后继续攻击次数高于模型组和对照组(P＜0.01,P＜0.01).ELISA检测结果显示,去势组睾酮水平显著低于模型组和对照组(P＜0.01,P＜0.01),且睾酮水平与攻击各指标呈中-高度负相关(P＜0.01).蛋白质印迹结果显示,去势组前额叶皮质PSD-95和GAP-43表达水平均低于模型组和对照组(P＜0.01,P＜0.01).结论 低水平血清睾酮对青春期大鼠前额叶皮质结构可塑性有损伤,可能与其病理性攻击行为相关.     

5-HT1A受体激动剂对青春期大鼠病理性攻击行为和前额叶皮质、海马内脑源性及胶质细胞源性神经营养因子的影响

目的 探索5-羟色胺1A(5-HT1A)受体激动剂8-OH-DPAT对青春期大鼠病理性攻击行为及对前额叶皮质、海马内脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的影响.方法 出生后21 d的雄性SD大鼠42只随机分为6组(n=7):模型组、正常组、模型+药物组、模型+生理盐水(NS)组、正常+药物组、正常+NS组.模型组、模型+药物组及模型+NS组采用早年慢性应激建立病理性攻击模型,余3组正常饲养.建模成功后对模型+药物组、正常+药物组及模型+ NS组、正常+NS组分别行2周的8-OH-DPAT(0.5mg/kg)或生理盐水(2 mL/只)腹腔注射.用居住-入侵实验检测大鼠攻击行为,蛋白质印迹分析检测大鼠脑前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组攻击潜伏期缩短(P＜0.01)、攻击持续时间及攻击总数增加(P＜0.01).模型+药物组攻击潜伏期较模型+NS组延长(P＜0.05);模型+药物组攻击持续时间较正常+药物组增加(P＜0.05);药物干预后攻击总数组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).模型组前额叶皮质、海马内BDNF及GDNF表达水平均低于正常组(P＜0.01),模型+NS组较正常+NS组降低(P＜0.05,P＜0.01),模型+药物组较模型+NS组升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF可能与早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为的发生有关.5-HT1A受体激动剂可上调前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF的蛋白表达,并在一定程度上减轻早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为.     

PSD-95信号通路介导5-HT1A受体激动剂改善大鼠病理性攻击行为的调控机制

目的 探索突触后致密物-95(postsynaptic density-95,PSD-95)信号通路是否参与并介导5-HT1A受体激动剂对大鼠病理性攻击行为的改善作用及调控机制.方法 将成功构建的24只病理性攻击大鼠按照抽签法分为4组,分别为8-OH-DPAT组、8-OH-DPAT+ZL006组、ZL006组、NaCl组,5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)以1 mg/kg每日腹腔注射并持续2周、PSD-5阻断剂(ZL006)以1mg/kg每隔3天腹腔注射并持续2周.分别在给药前、给药1周后及给药2周后用居住-入侵实验测试大鼠病理性攻击行为变化,且每次居住-入侵实验前取大鼠眼眶后静脉血.取前额叶皮层、大鼠海马及下丘脑组织,用Western blot检测各脑区五羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor5-HT1AR)、PSD-95及糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的表达,并采用ELISA试剂盒检测血清糖皮质激素含量.结果 8-OH-DPAT组大鼠攻击总数、攻击持续时间及攻击要害部位比在给药1周及2周后均有明显下降(P＜0.05);8-OH-DPAT+ ZL006组大鼠仅在给药1周后有降低(P＜0.05).Western blot检测结果显示8-OH-DPAT组、8-OH-DPAT+ ZL006组前额叶皮层及海马5-HT1A受体表达均高于其余两组(P＜0.05);8-OH-DPAT组大鼠前额叶皮层及海马PSD-95表达高于其余3组(P＜0.05);且该组海马GR表达低于其余3组(P＜0.05);各组大鼠下丘脑5-HT1AR、PSD-95表达差异无统计学意义(P＞0.05).ELISA结果显示:给药2周后8-OH-DPAT组血清糖皮质激素浓度有明显上升(P＜0.05),而其余3组在干预前后血清糖皮质激素无明显变化(P＞0.05).结论 PSD-95信号通路参与并介导了5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)对大鼠病理性攻击行为的改善作用,可能是通过对血清糖皮质激素的调控而发挥作用.     

青春期病理性攻击动物模型的初步构建

目的 构建理想的青春期病理性攻击动物模型.方法 通过对青春期大鼠进行去奖赏性挫败实验与激惹刺激实验造模.采用旷野实验与糖水偏好实验、高架十字迷宫实验、嗅觉灵敏度实验评估其模型特异性.结果 ①病理性攻击组的总体攻击次数为[(101.17±2.85)次],与普通攻击组[(52.5±5.36)次]、正常对照组[(8.83±1.34)次]比较均存在显著性差异(P<0.01);②各组大鼠各行为指标与总分呈中.高度正相关(r=0.379～0.929);③病理性攻击组在危险部位攻击次数、屈服后继续攻击与攻击/威胁比与普通攻击组比较存在显著性差异(P<0.01);④病理性攻击组存在空间认知能力下降,但不表现抑郁、焦虑情绪和嗅觉障碍(P>0.05).而普通攻击组则存在明显抑郁情绪.结论 各行为学指标满足青春期病理性攻击模型的评定标准,并且可以排除其他因素对模型特异性的干扰,提示该模型是较为理想的青春期病理性攻击模型.

Abstract：

Objective To establish the preferable puberty pathological aggression animal model.Methods The experimental models were established towards puberty rats by frustration test of non-reward and instigation test.Rat models were tested for specificity using open-field test,saccharine test,elevated plus-maze(EPM)and olfactory sensibility.Results ①Compared with normal aggression(52.5±5.36)and control group(8.83±1.34)in total aggressive times,the pathological aggression group(101.17±2.85)increased significantly(P<0.01);②Some behavior items of each model group were moderately or hishly correlated to total score(r=0.379～0.929);③There was a significant difference between pathological aggression group and normal aggression group in the numbers of attack toward vulnerable-body regions,persistence attack after intruder displayed submissive and hish attack/threat ratios(P<0.01);④The pathological aggression group did not show depression,anxiety and olfactory disorder,except for space cognitive function(P>0.05).However,the normal aggression group displayed obvious depressive mood.Conclusion Each behavioral index matches the criteria of pathological aggression model.Meanwhile,it also excludes other factors of disturbing the specificity of the model.It suggests this model may be preferable puberty pathological aggression animal model.     

PTEN、Akt与CREB基因在偏头痛大鼠三叉神经节的表达

目的 检测第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase, Akt)与cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein, CREB)基因在偏头痛模型大鼠三叉神经节的表达情况,探讨其在偏头痛发病机制中的相互关系及作用.方法 通过硝酸甘油(glyceryl trinitrate,GTN)法建立大鼠偏头痛模型,分别在GTN注射后1、4、12和24 h,取三叉神经节通过RT-PCR和免疫组化法对PTEN、Akt和CREB基因在mRNA和蛋白水平进行检测.结果 PTEN的基因与蛋白表达开始呈下降趋势,至GTN 12 h时分别为(0.42±0.07)(0.19±0.02),较对照组(1.00±0.07)(0.36±0.02)有显著降低(P<0.05),但到24 h时基因与蛋白表达量分别为(3.09±0.21)(0.45±0.05),又明显回升(P<0.05);Akt与PTEN呈相反变化趋势,基因与蛋白表达在GTN 4 h(1.38±0.07)(0.23±0.03)和12 h(1.42±0.03)(0.25±0.02)时显著增加(P<0.05),24 h(0.88±0.15)(0.15±0.06)表达又降至正常水平(P＞0.05);而GTN各组的CREB的基因与蛋白表达均较对照组(1.00±0.07)(0.43±0.03)有显著降低(P<0.05),24 h(0.42±0.14)(0.27±0.05)表达量降到最低(P<0.05).PTEN与Akt、CREB的基因表达呈显著负相关,r分别为-0.671,-0.484(P<0.05),蛋白表达也呈显著负相关,r分别为-0.563,-0.430(P<0.05),而Akt与CREB的基因及蛋白表达相关性不显著,r分别为0.272,-0.041(P＞0.05).结论 偏头痛大鼠三叉神经节中PTEN、Akt及CREB在GTN不同时间点表达发生改变,且PTEN调控了Akt与CREB的表达,可能通过影响神经突触可塑性,参与偏头痛的发生发展过程.     

早年慢性应激对青春期病理性攻击大鼠空间学习记忆及海马脑源性神经营养因子、5-羟色胺的影响

目的 探索早年慢性应激对青春期病理性攻击大鼠空间学习记忆能力,及对海马脑源性神经营养因子(BDNF)、5-羟色胺(5-HT)水平的影响。方法 将20只雄性、出生后21 d 的Sprague-Dawley大鼠分为实验组、对照组,每组各10只。实验组大鼠采用孤养、昼夜颠倒、非奖赏性挫败、预激惹刺激、居住-入侵攻击等多种早年持续性应激方法持续到青春期。然后采用居住-入侵攻击实验检测两组青春期大鼠的攻击性,水迷宫实验观察其空间学习记忆能力,运用免疫组化方法检测大鼠海马内BDNF和5-HT水平。结果 (1)水迷宫实验:实验组大鼠在总路程、穿越目标区域次数、逃避潜伏期3项指标上与对照组差异有统计学意义(P<0.05),而中心区域路程/总路程比值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)免疫组化结果显示:与对照组比较,实验组大鼠海马内BDNF和5-HT免疫阳性神经元数量均减少(P<0.05),BDNF和5-HT表达降低。结论 BDNF和5-HT可能参与了青春期病理性攻击大鼠海马空间学习记忆能力的调控,并在空间学习记忆方面起着重要调控作用。     

早年慢性应激对青春期大鼠攻击行为及下丘脑腹内侧核和前额皮质脑源性神经营养因子表达的影响

目的 探讨早年慢性应激对青春期大鼠攻击行为以及大脑下丘脑腹内侧核和前额皮质脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响.方法 将20只SD大鼠分为实验组和对照组.实验组大鼠出生后21 d开始进行社会孤养、日夜颠倒、社会刺激性实验和居住-入侵实验等多种早年应激3周.免疫组化检测下丘脑腹内侧核和前额皮质BDNF的表达.结果 实验组在居住-入侵实验和中性环境实验中攻击/威胁比[分别为(12.45±9.27)、(10.84±4.93)]和攻击持续时间[分别为(333.10±76.34)、(322.20±57.67)s]均显著高于对照组(P＜0.01),而攻击潜伏期[分别为(15.20±11.07)、(18.30±11.32)s]显著低于对照组(P＜0.01),并且表现出暴力攻击行为.免疫组化检测结果显示,实验组下丘脑腹内侧核BDNF表达(0.20±0.09)高于对照组(P＜0.05),前额皮质BDNF(0.19±0.08)表达水平低于对照组(P＜0.05).结论 早年慢性应激引起青春期大鼠暴力攻击行为以及下丘脑腹内侧核和前额皮质BDNF表达改变,提示青春期暴力攻击行为可能与早年慢性应激所致BDNF表达改变有关.     

慢性偏头痛研究进展

慢性偏头痛严重影响人类的生活质量,目前国内还未见慢性偏头痛的相关综述,本文就慢性偏头痛的流行病学特征、诱发因素、预防和治疗、动物模型建立等方面的研究进行综述.     

下调PTEN基因对慢性偏头痛大鼠NR2B亚基酪氨酸磷酸化和一氧化氮的影响

目的 利用RNAi重组腺病毒下调第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)的表达,探讨PTEN基因对慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)内N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基酪氨酸磷酸化(NR2B-pTyr)蛋白表达水平和一氧化氮(NO)含量的影响.方法 将SD雄性大鼠分为对照组、对照干预组、模型组和模型干预组.硬脑膜滴注炎性汤(IS)建立慢性偏头痛大鼠模型,TNC注射AdR-siPTEN,7d后观察大鼠行为学改变,检测大鼠TNC内PTEN、NR2B-pTyr和NO含量.结果 AdR-siPTEN可下调慢性偏头痛大鼠模型TNC中PTEN的表达;与模型组比较,IS干预慢性偏头痛大鼠的行为学症状明显缓解,大鼠的TNC内NR2B-pTyr表达水平及NO水平明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PTEN参与调节慢性偏头痛的病理过程,下调PTEN基因可缓解IS谤导的慢性偏头痛大鼠的疼痛行为学,其机制可能与下调PTEN引起NR2B-pTyr表达量及NO水平降低有关.     

粉防己碱对硝酸甘油致三叉神经节卫星胶质细胞激活的影响

目的:探讨粉防己碱(Tet)对硝酸甘油(GTN)激活的三叉神经节卫星胶质细胞释放的炎性因子的影响及其机制.方法:体外纯化培养新生大鼠三叉神经节卫星胶质细胞;实验分正常对照组、GTN组和Tet治疗组;GTN组和Tet治疗组利用0.55 mmol·L-1 GTN诱导卫星胶质细胞激活,Tet治疗组同时给予1×10-7 mol·L-1 Tet进行干预.应用AlamarBlue检测细胞存活情况;利用Fluo-3/AM探针负载后,激光共聚焦显微镜观测各实验组细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化;FQ-PCR检测NF-κB,IL-1β mRNA的表达情况;利用双重免疫荧光技术同时对卫星胶质细胞进行鉴定和NF-κB表达的检测.结果:AlamarBlue实验表明,GTN刺激后细胞活力明显下降(P＜0.05),而不同浓度的Tet对GTN刺激的胶质细胞活力影响不同,最终筛选出最适宜的Tet治疗浓度为1×10-7 mol·L-1.与GTN组相比,Tet可以抑制GTN诱导的卫星胶质细胞内[Ca2+];增高(P＜0.05);FQ-PCR和免疫荧光双标实验发现,Tet可降低胶质细胞内NF-κB mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);同时,Tet治疗后IL-1β mRNA的表达降低(P＜0.05).结论:Tet可以通过阻断卫星胶质细胞内钙离子内流调控NF-κB的表达,从而减少炎症因子IL-1β的释放,为Tet用于偏头痛的防治提供了实验依据.