虚拟实验在功能学实验教学中的应用

虚拟实验已成为现代实验教学的重要方式,已经在物理化学计算机领域的教学中广泛应用。但在基础医学领域尤其是功能学实验教学中,虚拟实验的应用还处于起步阶段。复旦大学上海医学院和上海交通大学医学院合作开发了功能学虚拟实验软件,并探索性的应用于医学本科生的实验教学中,取得了良好的效果。     

医学功能学科基于问题的探索型设计性实验课程构建和应用

复旦大学医学功能学科实验课程教学团队建设了“基于问题的探索型设计性实验”为核心的课程,通过分析本课程的现状与所存在的问题对该课程进行改革。以医学功能学科实验课程为试点,舍弃了“传帮带”式传统教学,针对每个实验或由临床案例引入,引导学生自主学习,掌握所需理论和技能;实验课堂则让学生结合理论深入讨论,自主提出实验目的和方案,并用科学的方法验证假设,得出结论;将PBL、翻转课堂、实验设计、统计分析等教学手段融为一体,实现了实验课程混合式教学。以期为我国高等医学院校功能学实验课程的发展提供借鉴。     

人PD-L1胞外区基因的克隆、原核表达及抗体制备

目的 克隆人PD-L1胞外区基因并进行原核表达及相应蛋白的抗体制备,为进一步研究PD-1/PD-L1通路及针对该通路进行疾病治疗和药物筛选奠定基础.方法 用PCR方法扩增编码人PD-L1胞外区的基因序列,克隆到原核表达载体pET28a(+)中并进行表达,用His抗体为一抗进行Western blotting鉴定并验证结合活性.用纯化的hPD-L1胞外区蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达质粒pET28a(+)-hPD-L1成功构建,并可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导高效表达,得到的hPD-L1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确.用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度可达105.结论 鉴定和纯化了原核表达的hPD-L1蛋白,制备的相应多克隆抗体能够检测真核细胞表达的hPD-L1蛋白,为进一步研究PD-1/PD-L1生物学活性奠定了实验基础.     

电针三阴交穴对缩宫素诱导的大鼠痛经模型的影响

目的观察电针三阴交穴对缩宫素诱导的大鼠痛经模型的影响,为临床上应用针刺治疗痛经提供实验依据。方法Wister雌性大鼠随机分成3组,痛经模型组(M组,n=12),阿司匹林阳性对照组(Asp组,n=10)和电针三阴交组(EA组,n=10)。各组连续10 d皮下注射苯甲酸雌二醇0.8 mg/只,从造模第3天至第10天,M组和EA组大鼠给予1 ml/100g蒸馏水灌胃;Asp组大鼠给予200 mg/100g肠溶阿司匹林混悬液灌胃。造模第7,8,9天,EA组大鼠电针双侧三阴交40 min,以大鼠后肢轻微抖动为度;M组和Asp组大鼠以同样的方法抓取和固定40 min,但不给于电针刺激。造模第10天,即末次给药后40min,腹腔注射缩宫素复制原发性大鼠痛经模型,观察扭体反应或在体记录子宫平滑肌收缩曲线。结果与M组相比,Asp组能明显降低20min内扭体反应的次数(P<0.01),并且能显著降低扭体反应的行为学评分(P<0.05)。EA组和M相比,20min内的扭体次数以及扭体反应的行为学评分均明显降低(P<0.01)。但EA组与Asp组之间无明显区别。Asp组,EA组与M相比,子宫平滑肌收缩频率抑制百分比和子宫平滑肌张力均值提高百分比均无明显差别(P<0.05),但可以明显影响子宫平滑肌收缩幅度变化百分比(P<0.05)。结论电针不能降低催产素引起的子宫平滑肌的收缩频率,但通过降低收缩幅度,使得其收缩低于痉挛的阈值,从而缓解了子宫痉挛所引起的疼痛,减少扭体反应。     

PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖药物筛选模型的建立及应用

目的通过构建重组的小鼠pcDNA3.1(+)-PD-L1质粒,并在真核细胞中进行高表达,建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖药物筛选模型用于免疫调节药物的筛选。方法以RT-PCR方法扩增得到小鼠的PD-L1全长片段;以pcDNA3.1(+)真核表达质粒为载体,构建得到重组质粒pcDNA3.1(+)-PD-L1;脂质体转染到小鼠成纤维细胞(L929),通过G418筛选得到高表达PD-L1的稳定细胞株并经免疫荧光鉴定;用丝裂霉素处理过的PD-L1高表达细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养;成功建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的模型之后向其中加入不同种类、不同浓度的天然产物提取物,并设复孔。结果通过Eco RI/Xho I双酶切及测序证实构建的重组质粒pcDNA3.1(+)-PD-L1正确。RT-PCR和免疫荧光方法鉴定重组质粒在L929细胞中高效表达,应用流式细胞术成功建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的模型,并筛选出阻断PD-L1活性的有效药物。结论获得了稳定高表达PD-L1的细胞,并且用于免疫调节的药物筛选,为免疫调节药物的筛选奠定了实验基础。