高效液相色谱法测定金玉软坚片中栀子苷含量

目的 建立金玉软坚片的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法.色谱柱为Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(12:88),流速1.0 mL/min,检测波长238 am,柱温40℃.结果 栀子苷质量浓度在14.96～74.80 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r＝0.999 9);平均加样回收率为99.53%,RSD=1.50%(n=6).结论 该方法简便易行,结果准确可靠,可适用于金玉软坚片的质量控制.     

基于斑马鱼毒/效同步评价的壮骨关节丸促骨骼发育作用与初步安全性研究

目的 用斑马鱼毒/效同步法评价壮骨关节丸的促骨骼发育作用及初步安全性。方法 将受精后3 d（3 day post fertilization,3 dpf）的斑马鱼幼鱼暴露于25 μmol·L^-1泼尼松龙（prednisolone,PN）,壮骨关节丸溶液及含PN的壮骨关节丸溶液（12.5,25,50,100,200,300和400 μg·mL^-1）中,0.5% DMSO胚胎培养基为空白对照,于28℃培养至8 dpf,隔天换一半药液。采用茜素红对8 dpf的斑马鱼幼鱼头部骨骼染色,定量分析骨骼染色区域;给药期间每天同步观察鱼死亡及脏器中毒情况。结果 在8 dpf时,100 μg·mL^-1及以上浓度的壮骨关节丸健康鱼组和含PN的壮骨关节丸模型鱼组斑马鱼死亡率>80%,未进行骨骼染色。壮骨关节丸健康鱼组（12.5,25,50 μg·mL^-1）的斑马鱼头骨矿化面积和累积光密度值IOD与PN组比较显著增加（P<0.01或<0.05）,而含PN的壮骨关节丸模型鱼组（12.5,25,50 μg·mL^-1）斑马鱼的头骨矿化面积或IOD结果显示阻止PN致骨丢失的趋势,但均低于健康鱼组。给予壮骨关节丸后,PN模型鱼的死亡速度和死亡率较健康鱼高,鱼死亡率与给药浓度和时间呈依赖性;PN模型鱼的6 dpf和8 dpf半数致死浓度值（63.92,63.92 μg·mL^-1）均低于健康鱼（94.66,87.84 μg·mL^-1）。结论 斑马鱼毒/效同步法快速评价了壮骨关节丸对健康鱼和模型鱼的骨骼发育作用及初步安全性。壮骨关节丸对健康鱼和模型鱼的作用及毒性有差别。     

肝细胞生长因子和血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制

目的: 探讨肝细胞生长因子(HGF)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响,并阐明其作用机制。方法: 体外培养人近曲小管上皮HK-2细胞,取Ⅳ期细胞分为对照组、AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)组、HGF(8 μg·L^-1)组和AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)+HGF(8 μg·L^-1)组。采用CCK8法检测HK-2细胞增殖情况,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平,Western blotting法检测α-SMA的蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,AngⅡ组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.01),HGF组HK-2细胞增殖活性升高(P<0.05),AngⅡ+HGF组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组 HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),HGF组HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01), AngⅡ+HGF组HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05); 与AngⅡ 组比较,AngⅡ+HGF组细胞增殖活性升高(P<0.05),α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论: AngⅡ抑制肾小管上皮细胞增生而促进TEMT, HGF促进肾小管上皮细胞增生而抑制TEMT,HGF可能介导AngⅡ抑制HK-2细胞增生及促进TEMT的作用。     

HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定柴胡和春柴胡中2个皂苷类活性成分(柴胡皂苷a和柴胡皂苷d)、4个黄酮类活性成分(芦丁、槲皮素、山柰素和异鼠李素)的含量。方法:采用Agilent Zorbax C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.1%磷酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1 mL.min-1,检测波长203 nm(测定皂苷类成分)和360 nm(测定黄酮类成分),柱温35℃。结果:6个活性成分的峰面积与浓度的线性关系良好(r≥0.9994),线性范围宽;精密度试验的RSD为0.67%~1.9%;加样回收率为95.1%~104.3%。10批市售柴胡和春柴胡的黄酮类和皂苷类成分含量具显著差异:春柴胡中4个黄酮类成分平均含量约为柴胡中的7.5~72倍;春柴胡中柴胡皂苷a的平均含量为柴胡的1/10,而柴胡皂苷d的平均含量约为柴胡的3倍;柴胡与春柴胡中6个成分含量的相关系数为0.10~0.62。结论:本方法具良好的精密度、重复性和可靠性,可同时测定柴胡和春柴胡中皂苷类和黄酮类成分的含量并有效表征其差别。     

基于斑马鱼M-Act/Tox一体化评价的抗骨质疏松中药高效筛选思路与方法

日益显现的壮骨中药肝损伤问题为临床应用带来挑战,抗骨质疏松中药筛选有必要兼顾有效性与安全性,而代谢转化至关效应与毒性,故全面考虑代谢-效/毒一体的筛选具有意义。评价模型和化合物(含代谢物)数量严重制约早期在体、高效筛选。参考课题组前期相关研究及国内外文献,提出斑马鱼代谢模型、骨质疏松模型及毒性评价法有机整合可建立M-Act/Tox(metabolism-action/toxicity)一体化的抗骨质疏松中药高效筛选法。突破量微成分无法在体、高效及一体化评价的难点和盲点,实现基于体内过程且兼顾有效性与安全性的全方位抗骨质疏松中药高效筛选,对加速发现安全有效的抗骨质疏松创新中药具有意义。     

基于斑马鱼模型筛选壮骨关节丸毒性药味高效筛选

目的：采用斑马鱼模型高效筛选壮骨关节丸中有毒性的药味。方法：将受精后1天（1 day post fertilization,1dpf）的斑马鱼胚胎暴露于壮骨关节丸及方中12种药味不同浓度水煎液和醇提液中,观察记录给药后2-6 dpf或2-8 dpf的死亡数量,于3 dpf显微检视斑马鱼幼鱼状态,SPSS软件计算6 dpf的斑马鱼半数致死浓度LC₅₀。结果：斑马鱼暴露于壮骨关节丸及补骨脂、续断、乳香没药、独活和木香的水、醇提取液,以及鸡血藤和狗脊的醇提液毒性较大,致鱼卵黄囊肿大、变形或变黑,提示与肝毒相关,6 dpf鱼的LC₅₀为33.2-392.7μg·mL^-1（已折算为生药量,下同）;淫羊藿水、醇提取液均在1500μg·mL^-1致鱼卵黄囊肿大、变黑,LC₅₀为1100-1350μg·mL^-1,有一定毒性;鸡血藤和狗脊的水煎液,以及骨碎补、桑寄生和熟地黄的水、醇提取液未致鱼脏器明显改变,LC₅₀大于1500μg·mL^-1,故安全性较好。结论：斑马鱼模型高效辨识了壮骨关节丸不同药味毒性差异,可实现复杂中药中潜在毒性物质的在体、实时、动态、规模化的高效筛选。     

斑马鱼毒性-代谢关联分析法评价补骨脂香豆素及其糖苷成分安全性

目的 用斑马鱼毒性-代谢关联分析法评价补骨脂香豆素及其糖苷成分安全性。方法 将受精后1 d(1 dpf)的健康斑马鱼胚胎置于不同浓度补骨脂素(PS)、异补骨脂素(IPS)、补骨脂苷(PSS)和异补骨脂苷(IPSS)的供试液中,观察记录给药后1～5 d(2~6 dpf)的鱼脏器形态和死亡情况,显微检视3~6 dpf斑马幼鱼形态,用SPSS16.0计算不同化合物6 dpf鱼的半数致死浓度(LC₅₀);此外,各化合物分别选择一个浓度,同法给药,每天取药液,分析各成分的动态代谢变化。结果 PS和IPS以原型成分致3 dpf斑马鱼中毒;PSS和IPSS在鱼3 dpf时以原型成分为主,未见致鱼脏器形态明显变化,但经4~6 dpf斑马鱼分别动态转化成PS和IPS后致鱼中毒。结论 PSS和IPSS对斑马鱼的毒性与体内转化紧密相关。PS和IPS既是药材中的原型成分,也是其糖苷在体内转化的代谢成分,是补骨脂致毒的相关成分。斑马鱼毒性-代谢关联分析法可高效辩识微量成分的在体毒性及其与代谢转化的相关性。     

TCT和HPV-DNA在绝经女性宫颈癌筛查中的应用价值

目的 探讨薄层液基细胞学(TCT)检测和人乳头瘤病毒(HPV-DNA)分型检测对于绝经女性宫颈癌前病变筛查中的应用价值，为体检中心开展筛查、随访及健康教育工作提供依据。方法 以2018年8～10月体检中心参加宫颈癌筛查、年龄≤65岁的绝经女性200例作为研究对象，研究对象均参加TCT检测和HPV-DNA分型检测，排除TCT和HPV双阴性的绝经女性，对有任一阳性的绝经女性均进行阴道镜下病理活检，比较TCT和HPV的阳性检出率及灵敏度；TCT阴性组和TCT阳性组的病理学阳性检出率及HPV的阳性检出率；进一步分析HPV-DNA不同分型病理学阳性检出率及TCT阳性组和HPV-DNA阳性组、联合阳性组的病理学阳性检出率。结果 TCT和HPV双阴性的检出人数82例，TCT和HPV任一阳性检出人数118例，其中，TCT阳性的68例；HPV阳性的98例，双阳性48例，病理学阳性人数65例。TCT阳性检出率低于HPV,差异有统计学意义(P<0.01);65例病理学阳性患者中，TCT和HPV阳性人数为41例、58例，灵敏度为63.1%、89.2%,差异有统计学意义(P<0.01);TCT阴性组...