组织工程化表皮膜片修复裸鼠创面的实验研究

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面.方法体外分离、培养、扩增人类表皮细胞,与壳聚糖-明胶膜构建表皮细胞膜片,用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面,以单纯壳聚糖/明胶膜作为对照;术后行大体、组织学观察及免疫组织化学检测.结果表皮细胞可以壳聚糖-明胶膜作为载体在体外培养,达到60%～70%亚融合状态时,移植人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜到裸鼠全层皮肤缺损创面,人表皮细胞可以在创面存活并继续增殖分化,形成连续的表皮覆盖创面.结论人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜是一种理想的组织工程表皮替代物.     

培养在壳聚糖-明胶膜片材料上人黑色素细胞的生物学特性初步研究

目的 研究培养在壳聚糖-明胶膜片材料上黑色素细胞的生物学特性.方法 取幼儿包皮,酶消化成单细胞悬液,接种后在黑色素细胞条件培养液中静置培养.黑色素细胞纯化、扩增后接种于壳聚糖-明胶膜片上.定期观察细胞形态变化及生长增殖情况,应用MTT测定、黑色素瘤抗体(Melan-A)免疫荧光染色、DOPA反应以判断黑色素细胞在壳聚糖-明胶膜片上的增殖及分化情况.结果 分离、纯化的黑色素细胞接种于壳聚糖-明胶膜片上生长良好,Melan-A免疫荧光染色及DOPA反应为阳性.结论 壳聚糖-明胶膜片是支持人黑色素细胞生长的良好材料,这一体系为色素脱失症的治疗提供了新的途径.     

Y染色体ZFY基因检测在组织工程中的应用

目的 探讨人的Y染色体ZFY基因诊断在组织工程中的应用.方法 对两种人的组织工程皮肤"替代物"进行RT-PCR检测,从mRNA水平检测Y染色体ZFY基因表达.用三条引物同时扩增,Y染色体可产生两个片断,X染色体产生一个片断.结果 取男性细胞构建的表皮膜片修复女性皮肤缺损区的少量组织,可以检测到494bp和294bp两个条带;女性则494bp一个条带.检出率达100%(16/16).用男性包皮角质干细胞构建的复合皮肤修复雌鼠全层皮肤缺损,取植入处少量组织检测到人的Y染色体494bp和294bp两个条带,且维持创面修复时间长达8个月.结论 Y染色体ZFY基因诊断可作为组织工程皮肤替代物性别标记,且可以跟踪检测,具有特异、准确之优点.     

氨对人表皮角质细胞生长和代谢的影响

 目的 了解人表皮角质细胞培养过程中，氨对细胞生长和代谢的影响。方法 收集3～6岁健康幼儿包皮，以Dispase Ⅱ分离、收集原代细胞，角质化细胞专用无血清培养基（Keratinocyte- SFM）培养。待细胞培养至第4代，更换含不同氨浓度的培养基，考察细胞生长和代谢的变化。结果 氨抑制了细胞的生长，当氨的浓度为9.23 mmol/L时，脉冲培养结束时的活细胞密度（0.84×105个/ml）进一步下降，细胞存活率下降至54.5%；氨对细胞生长的抑制作用遵循二级抑制模型, 其模型常数Ka为4.46（mmol/L）2，即当氨的浓度为2.11 mmol/L时，细胞的比生长速率下降到最大比生长速率的50%。当氨浓度从1.23 mmol/L增加到1.73 mmol/L，细胞对葡萄糖的得率系数下降了48.0%，葡萄糖的比消耗速率上升了14.8%；与氨浓度为1.23 mmol/L相比，9.23 mmol/L的氨使乳酸对葡萄糖的得率系数增加了12.0%，乳酸的比生成速率增加了53.3%。氨浓度的增加明显改变了细胞的代谢，促进了细胞对葡萄糖的利用，消耗的葡萄糖更倾向于乳酸的生成。当氨浓度为9.23 mmol/L，谷氨酰胺的比消耗速率和氨的比生成速率分别是氨浓度为1.23 mmol/L的20.2%和6.2%。氨抑制了谷氨酰胺的消耗，谷氨酰胺在生成谷氨酸后经过脱氢途径的流量减少，更多地向转氨途径，即低效率的产能途径偏移。结论 在人表皮角质细胞的培养过程中，应尽量减少氨的积累。     

含黑色素细胞的表皮替代物构建及对色素脱失的疗效

目的 联合应用黑色素细胞和表皮细胞构建组织工程化表皮替代物,并应用于色素脱失治疗.方法 利用幼儿包皮分离、培养和扩增出表皮细胞和黑色素细胞,接种于壳聚糖明胶膜,构建成含黑色素细胞的表皮膜片.建立裸鼠动物模型,将含黑色素细胞的表皮膜片移植于治疗组的受区,同时设立表皮细胞膜片为对照组.术后定期行大体观察、组织切片HE染色、抗S-100蛋白免疫组化染色,以检测黑色素细胞在创面的成活情况.结果 联合应用人黑色素细胞和表皮细胞接种于壳聚糖/明胶膜能够构建出含黑色素细胞的表皮替代物,并应用于动物实验,检测出黑色素细胞成活良好.结论 联合应用人黑色素细胞和表皮细胞接种于壳聚糖/明胶膜的表皮替代物能使色素脱失的动物模型恢复色素功能,对色素脱失具有良好的治疗效果.     

构建含黑色素细胞组织工程表皮的实验研究

目的将黑色素细胞和表皮角质形成细胞，接种于壳聚糖-明胶薄膜材料上，构建含黑色素细胞的组织工程表皮。方法从小儿包皮分离黑色素细胞和表皮角质形成细胞，分别对黑色素细胞和表皮角质形成细胞进行鉴定，并进行不同代次细胞生长动力学检测。将黑色素细胞和表皮角质形成细胞接种于壳聚糖-明胶薄膜上，进一步检测两种细胞在材料上的生长情况。结果分离培养黑色素细胞和表皮角质形成细胞，经鉴定两者分别表达S-100和角蛋白。接种于壳聚糖-明胶薄膜上的黑色素细胞和表皮角质形成细胞能成功构建组织工程化表皮替代物。两种细胞在材料上生长状态良好，分布均匀，并表达各自特异性标志物。结论以壳聚糖-明胶薄膜材料作为支架材料，成体黑色素细胞和表皮角质形成细胞为种子细胞，能有效地构建含黑色素细胞的组织工程表皮。     

组织工程化表皮膜片修复裸鼠创面的实验研究

目的 构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面。方法 体外分离、培养、扩增人类表皮细胞，与壳聚糖—明胶膜构建表皮细胞膜片，用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面，以单纯壳聚糖／明胶膜作为对照；术后行大体、组织学观察及免疫组织化学检测。结果 表皮细胞可以壳聚精—明胶膜作为载体在体外培养，达到60％～70％亚融合状态时，移植人表皮细胞／壳聚糖—明胶膜到裸鼠全层皮肤缺损创面，人表皮细胞可以在创面存活并继续增殖分化，形成连续的表皮覆盖创面。结论 人表皮细胞／壳聚糖—明胶膜是一种理想的组织工程表皮替代物。     

多参数复合分选表皮干细胞的初步实验研究

目的 探索多参数分选,以获得高纯度表皮干细胞(human epidermal stem cells,hESCs)方法的可行性.方法 收集3岁～6岁健康幼儿包皮,以DispaseⅡ和Tropsin分离、收集原代表皮细胞(5例),利用流式细胞仪(FACS)分别进行多种参数分选,即:CD49f+/CD71-表型的细胞分选;直径小于10微米的细胞分选.以及多参数复合分选,即:CD49f+/CD71-且细胞直径小于10微米细胞.对各组分选细胞及未分选细胞进行克隆形成率、细胞最大扩增能力、克隆形成面积的检测比较.计算各种分选方法所对应的细胞回收率.结果 单参数分选的两组细胞之间在克隆形成率、细胞最大扩增能力、克隆形成面积三方面无统计学差异(p＞0.05).多参数分选得到的细胞与通过单参数分选的两组细胞均存在统计学差异(p＜0.05).结论 利用多参数分选,能获得纯度更高的干细胞表型的表皮细胞.     

哈尔滨市初高中学生吸烟状况及控烟对策

为了解哈尔滨市青少年吸烟状况和吸烟行为影响因素 ,从而为在中学开展控烟工作制定干预措施提供依据。哈尔滨市教育局于 2 0 0 0年 1 1月开展了吸烟状况调查研究。现将结果报告如下。对象与方法1 对象　哈尔滨市吸烟与健康协会、哈尔滨市健康教育所及哈尔滨市教委于 2 0 0 1年1 1月 ,对哈尔滨市 1 8所中学 ,进行问卷调查 ,共发放问卷 1 940份 ,回收有效问卷 1 882份 ,应答率在 97%。 1 882名抽样人群中 ,男生为 980人 ,占总人数的 52 1 % ,女生为 90 2人 ,占 47 9% ,抽样人群来自初中生 6 3 0人 ,高生中 6 3 1人 ,职高生 6 2 1人。2 方法…     

含黑色素细胞的表皮替代物构建及对色素脱失的疗效

目的联合应用黑色素细胞和表皮细胞构建组织工程化表皮替代物,并应用于色素脱失治疗。方法利用幼儿包皮分离、培养和扩增出表皮细胞和黑色素细胞,接种于壳聚糖明胶膜,构建成含黑色素细胞的表皮膜片。建立裸鼠动物模型,将含黑色素细胞的表皮膜片移植于治疗组的受区,同时设立表皮细胞膜片为对照组。术后定期行大体观察、组织切片HE染色、抗S-100蛋白免疫组化染色,以检测黑色素细胞在创面的成活情况。结果联合应用人黑色素细胞和表皮细胞接种于壳聚糖/明胶膜能够构建出含黑色素细胞的表皮替代物,并应用于动物实验,检测出黑色素细胞成活良好。结论联合应用人黑色素细胞和表皮细胞接种于壳聚糖/明胶膜的表皮替代物能使色素脱失的动物模型恢复色素功能,对色素脱失具有良好的治疗效果。