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目的预测并分析人白细胞介素-36α蛋白的二级结构及其潜在的B细胞抗原表位。方法以人IL-36α蛋白的氨基酸序列为基础,采用生物信息软件和互联网服务器预测人IL-36α蛋白的二级结构及其亲水性、可及性和柔韧性,根据预测结果综合分析IL-36α蛋白可能的B细胞抗原表位。结果IL-36α蛋白潜在的B细胞抗原表位位于N端8~12、33~38、111~116和143~149氨基酸区段。结论预测了IL-36α蛋白的二级结构和B细胞抗原表位,为进一步研究IL-36α的生物学活性部位及利用合成肽制备抗IL-36α的多克隆抗体提供了理论依据。 相似文献
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MTT显色反应实验条件分析 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 :检验分析MTT实验方法本底高、灵敏度低、稳定性差的影响因素 ,改进实验条件提高灵敏度和稳定性 ,降低本底。方法 :用MTT比色方法 ,细胞毒试验及细胞增殖实验 ,分析比较不同条件下MTT显色反应的性能特点。结果 :比较了 13种溶剂对Formazan的溶解性能。分析检验了琥珀酸脱氢酶在细胞上的分布特点、pH值对MTT反应体系的影响、酚红和牛血清对检验结果的影响 ,提出相应对策。检测了MTT反应时间曲线和细胞活力曲线。分析了改进后的MTT实验方法的灵敏度和稳定性。结论 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面。MTT反应体系的pH值为 6 7,比较好的Formazan溶剂是正丙醇、异丙醇和乙二醇乙醚。去掉细胞培养上清 ,检测细胞上的酶 ,用溶剂使蛋白质变性 ,经沉淀去掉蛋白质影响 ,能使MTT实验方法的本底降低 ,灵敏度提高。通常情况下该方法检测K 5 62细胞和人淋巴细胞的灵敏度分别为 10 0 0和 10 0 0 0个细胞左右。 相似文献
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目的:探讨刀豆蛋白A (Concanavalin A,ConA)对CRL2480细胞(人脐静脉内皮细胞系)细胞外调节蛋白激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2磷酸化的影响。方法采用MTT法检测ConA对CRL2480细胞活化的影响;采用Western印迹法检测CRL2480细胞磷酸化(p)-ERK1/2的表达;采用细胞免疫荧光技术检测p-ERK1/2在细胞内的分布。结果在5~20μg/ml范围,ConA刺激CRL2480细胞8 h的活化指数具有剂量依赖性;20μg/ml ConA显著增加CRL2480细胞的活化(P〈0.05)。ConA能够增加CRL2480细胞的p-ERK1/2表达水平(P〈0.05),ERK途径抑制剂PD98059和U0126明显抑制p-ERK1/2表达。免疫荧光染色结果显示ConA刺激细胞的荧光信号明显高于对照细胞,荧光分布于细胞浆、细胞核周围和细胞核内。结论 ConA能够激活CRL2480细胞表达p-ERK1/2。 相似文献
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白细胞介素—2抗癌原理与临床使用方法 总被引:8,自引:0,他引:8
随着生物工程技术的发展与白细胞介素-2(IL-2)制剂的产业化,IL-2的基础研究和临床应用有了长足的进步,但由于很多临床医生不太了解IL-2的作用原理,使用方法失当,影响了临床效果。本文概要介绍IL-2的作用原理,并推荐一些使用方法。1IL-2的抗... 相似文献
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人脐静脉内皮细胞体外培养与鉴定新方法探索 总被引:6,自引:1,他引:6
目的:探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养与鉴定新方法。方法:Ⅰ型胶原酶消化、分离HUVEC,含内皮细胞生长添加物(12.5mg/L)、肝素(100mg/L)的体积分数20%胎牛血清-M199培养系统培养HUVEC。流式细胞术和免疫荧光法检测其endoglin(CD105)、血小板源内皮细胞黏附分子-1(CD31)表达。结果:HUVEC均表达CD105和CD31;HUVEC CD105^ 百分率为96.56%,CD31^ 90.42%。结论:该培养系统简便、可行,CD105和CD31有助于鉴定HUVEC的分离纯度。 相似文献
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[目的与方法]采用51Cr释放法对MTT比色法及NAG释放法测定恶性肿瘤患者NK细胞介导的细胞毒活性的价值进行初步探讨.结果(1)两种非同位素方法所测外周血NK细胞活性与51Cr释放法之间均无相关性(P均>0.05);(2)正常对照组效应细胞51Cr释放水平低于靶细胞(P<0.01),肿瘤化疗组效应细胞51Cr释放水平则高于靶细胞(P<0.01),且靶细胞与效应细胞的结果无相关性(P>0.05).[结论]我们认为酶反应比色法不宜用于NK细胞介导的细胞毒活性测定. 相似文献