三叉神经脊束间质核内一氧化氮参与内脏伤害性信息传递的实验观察

背景：一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)广泛分布于中枢神经系统并调节神经活动，但鲜见在中枢神经脊上水平有关NOS参与内脏神经传入信息传递的报道。目的：探查三叉神经脊束间质核(interstitial nucleus of trigeminal tract，INV)内内脏传入终末与向臂旁核(parabrachial nucleus，PBN)投射的NOS阳性神经元之间的联系。设计：以实验动物为研究对象，验证性对比观察。一单位：一所军医大学解剖学教研室。材料：选择成年SD雄性大鼠10只进行动物试验。干预：分别给PBN及舌咽和迷走神经内注射四甲基罗丹明(tetramethyl rhodamine-dextran，TMR)，生物素化葡聚糖胺(biotinylated dextran-amine，BDA)并进行NOS免疫组织化学反应，结合激光扫描共聚焦显微镜观察。主要观察指标：观察逆行TMR标记细胞，NOS阳性细胞以及跨神经节BDA标记的传入终末在1NV内的重叠分布和三者的相互关系。结果：逆行标记细胞主要位于注射侧的1NV，大多属20μm以下的中、小型细胞。NOS阳性细胞与TMR逆行标记细胞分布区域重叠。计数显示：NOS／TMR双标记细胞分别占NOS阳性细胞总数的55％(17／31)和TMR逆行标记细胞总数的34％(17／49)。跨神经节注射BDA标记的内脏神经初级传入终末点状膨体贴近双标记细胞胞体，呈紧密接触状。结论：存在经1NV向PBN投射的内脏信息传导通路，作为神经递质和神绎信息分子的一氧化氮可能参与其内脏伤害性信息的传递和调控。     

大鼠三联单叉神经中脑核内囊泡膜谷氨酸转运体样和GAD样阳性末梢与GABAA受体α1亚单位样阳性神经元的联系

最近已在哺乳类动物脑内克隆出两种新的脑内特殊的Na+依赖的无机磷酸转运体,它们均属于囊泡膜谷氨酸转运体,被分别命名为VGluTl(Vesicular glutamate transporter of type1)和DNPI(differentiation-associatedNa+-dependent inorganicphosphate eotransporter).本研究应用免疫荧光组织化学三重染色技术,在激光共聚焦显微镜下观察了大鼠三叉神经中脑核(Vine)内VGIuT1样和DNPI样以及谷氨酸脱羧酶(GAD)样阳性末梢与GABAA受体α1亚单位(GABAARa1)样阳性神经元之间的联系.结果显示:①几乎所有的Vme神经元均呈GABAA受体α1亚单位样免疫阳性,吻尾方向在其全长出现,这些神经元绝大多数为大的假单极神经元(直径为25～50um),但也有小部分为直径小于25um的神经元.②大量的VGluT1样和DNPI样免疫阳性的神经纤维和末梢广泛分布于Vine内,其中DNPI样阳性纤维和末梢的分布密度高于VGIuT1;同时还观察到GAD样阳性纤维和末梢也密集分布于Vme内.③VGluT1样、DNPI样和GAD样免疫阳性终扣分别包绕在GABAA受体α1亚单位样阳性Vine神经元胞体周围,并与之形成密切接触.以上结果提示:Vme神经元在介导面口部本体感觉信息的传递中,可能同时接受中枢其他来源的谷氨酸能和GABA能末梢的调控,其中GABA能的投射末梢可能通过位于Vine神经元内的GABAA受体对面口部本体感觉信息的传递发挥抑制性调控作用.     

大鼠三叉神经脊束间质核内内脏神经初级传入终末与NOS阳性投射神经元的联系

目的　探查间质核 (INV)内内脏传入终末与向臂旁核 (PBN)投射的NOS阳性神经元之间的联系。　方法　逆行、跨神经节追踪以及免疫荧光组织化学方法 ,结合激光共聚焦扫描显微镜观察。　结果　PBN内注射四甲基罗丹明 (TMR)后 ,逆行标记细胞主要位于注射侧的INV ,大多属 2 0 μm以下的中、小型细胞。NOS阳性细胞与TMR逆行标记细胞分布区域重叠。NOS TMR双标记细胞分别占NOS阳性细胞总数的 5 4 8% (17 31)和TMR逆行标记细胞总数的 34% (17 4 9)。舌咽和迷走神经内注射生物素化葡聚糖胺 (BDA)跨神经节标记的内脏神经初级传入终末点状膨体贴近双标记细胞胞体 ,呈紧密接触状。　结论　可能存在经INV向PBN投射的内脏伤害性信息传导通路 ,作为神经递质和神经信息分子的NO可能参与其内脏伤害性信息的传递和调控     

谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核内GFP阳性神经元的分布及与小白蛋白的共存

目的观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核（Vc）浅层内，表达GFP的GABA能神经元的分布及其与小白蛋白（PV）的共存。方法分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合；GFP与神经元标记物——神经元核蛋白（NeuN）或PV免疫荧光染色相结合的双重标记方法，在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下进行观察。结果1．Vc浅层内90％以上的GFP阳性神经元同时表达GAD67 mRNA，而几乎所有表达GAD67 mRNA的阳性神经元都呈GFP阳性；2．GFP阳性神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层内，细胞较小，尤其在Ⅱ层内可见大量密集分布的GFP阳性细胞和突起。GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ层内NeuN阳性神经元总数的19．4％和24．3％；3．GFP／PV双标神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层，这些双标神经元大约占PV阳性神经元的62．4％，占GFP阳性神经元的12．8％。结论在Ｖc表达GFP的GABA能神经元主要密集分布于与外周伤害性信息传递关系密切的板层内，且大部分PV样阳性神经元属于GABA能神经元。     

还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH－d）组化方法操作步骤中各种参数的选择

为了提高还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组化方法的效果、稳定性和敏感性，本研究选用合适的操作条件，观察和比较了该方法操作步骤中各种参数改变对反应结果的影响。注意到操作过程中的各个环节和因素的变化均会不同程度地影响实验结果。对此法的固定、切片、反应和反应后处理过程等操作步骤的最佳条件提出了建议。     

睫状,下颌下,蝶腭和耳神经节内的一氧化氮合酶神经元

观察大鼠睫状、下颌下、蝶腭和耳神经节内一氧化氮合酶阳性神经元的分布。ＮＡＤＰＨ－ｄ组化反应法。颅部各副交感神经节内都含有丰富的ＮＯＳ阳性神经元，均匀地分布于节内各处。但阳性神经元所占比例在各神经节不同。比例最高的是蝶腭神经节，其内９０％－９５％的神经元都含ＮＯＳ，细胞排列密集，在３０μｍ厚的切片，４ｍｍ＾２的面积内多达４６个。     

单侧坐骨神经完全结扎对大鼠腰段背根神经节内VGluT1阳性神经元的影响

本实验将大鼠分为两组(正常对照组和单侧坐骨神经完全结扎组),采用免疫细胞化学和中性红复染的方法分别观察了正常大鼠和单侧坐骨神经完全结扎后存活不同时间组大鼠腰4(L4)节段的背根神经节(DRG)内I型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样阳性神经元的分布及其数量的变化。结果如下:(1)正常大鼠L4节段的DRG内可观察到VGluT1样阳性产物呈点状或斑状分布于胞浆内,有大约71.5%的DRG细胞表达VGluT1样免疫阳性,其中以大型(>40μm)和中等大小(20~40μm)的神经元为主(分别占整个VGluT1样阳性细胞总数的30.7%和65.9%);(2)坐骨神经结扎后第1、2d,在结扎同侧L4节段的DRG内未检测到VGluT1样阳性神经元数量的明显变化;但自术后第4d开始,VGluT1样阳性神经元的数量随术后存活时间的延长逐渐减少。结扎1~4周大鼠DRG内VGluT1样阳性神经元数量在同一个动物的手术侧与对照侧相比有明显减少(P<0.01);而结扎1~4周大鼠的手术侧DRG内VGluT1样阳性神经元的数量也明显低于结扎1~3d大鼠的手术侧(P<0.05或P<0.01)。以上结果表明,DRG内合成VGluT1样阳性物质的神经元主要是大、中型细胞,DRG细胞可通过轴浆流将VGLluT1向周围突运输,故外周神经的损伤很易影响到DRG神经元内VGluT1的合成。     

大鼠脑干内的calbindin D-28K可能参与内脏伤害性信息传递或调控的形态学研究

为研究calbindin D-28K(CB)是否与内脏伤害性信息的传递或调控有关,应用免疫组织化学双重标记技术,对给予内脏伤害性刺激后大鼠脑干内表达Fos蛋白的CB免疫阳性神经元分布进行了观察.结果显示:在孤束核(NTS)、延髓腹外侧区(VLM)、蓝斑(LC)、臂旁外侧核(LPB)、中脑导水管周围灰质腹外侧区(vlPAG)等核团内均可见Fos/CB双标记神经元.双标记神经元分别占上述核团内Fos蛋白免疫阳性神经元数量的比例为12.8%,42.7%,48.1%,14.0%和13.9%;占CB免疫标记阳性神经元数量的比例为14.3%,24.3%,38.4%,6.8%和8.9%.研究结果提示,CB可能参与脑干内内脏伤害性信息的传递或调控.     

维生素D依赖性钙结合蛋白-D25K样阳性神经元在人胎儿和新生儿脊髓和背根神经节内的表达和分布

目的：观察24～27w人胎儿和新生儿的脊髓和背根神经节(DRG)内维生素D依赖性钙结合蛋白-D28K(CB)样阳性神经元的表达和分布。方法：采用免疫细胞化学ABC法对24～27w人胎儿和新生儿进行观察。结果：(1)CB样阳性产物的表达在胎儿DRG和脊髓灰质的神经元胞体及树突内可观察到。在脊髓各段有不同分布；(2)新生儿脊髓和DRG内CB样阳性胞体的数量、大小及染色强度均有所增加，但在空间分布上无大的变化。结论：人胎儿的脊髓和DRG在发育的24～27w至出生时，CB样阳性神经元的表达在定位分布上无差异，但随年龄增长，CB样阳性神经元的数量、大小和染色强度均有所增加。