γ-球蛋白及胆碱酯酶与肝组织病理损害的关系

目的研究血清γ球蛋白（γG）及胆碱酯酶与肝组织病理损害的关系．方法采用醋酸纤维薄膜法测定135例经病理证实的慢性肝炎，肝炎肝硬变及重型肝炎的血清γG；同时采用酶速率法测定他们的血清胆碱酯酶（SChE）活力结果随着肝组织纤维化程度和（或）炎症程度的加重，血清γG逐渐升高，而SChE活力则逐渐下降，差异非常显著（P＜0．01）；γG与ChE活力的相关系数为-0．612．结论血清γG的水平能准确地反映肝脏的病理损害；SChE活力能很好地反映肝脏的合成功能，肝脏的储备功能，亦能准确地反映肝脏的病理损害．     

突变型HBV前C-C基因疫苗的构建及真核细胞表达

目的采用点突变技术对HBV前C—C基因中的蛋白酶切位点进行4处点突变,构建突变型HBV前C—C／ENHⅡ重组基因疫苗,转染HepG2细胞,研究其存真核细胞内的表达情况。方法采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151＋154（VE2）、151＋154＋164＋167点突变（VE4）2种突变型疫苗,转染HepG2细胞,通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹等方法检测其在HepG2细胞内的表达情况及表达产物的分子量。结果VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞均胞浆表达目的蛋白,产物分子量分别为18、20、22kD,细胞裂解液的HBeAg含量VE4、VE2高于VEC,上清中则反之。结诊安蛮刭HRV前C—C基因疫苗VE2、VE4构建成功并表达预期病毒前C蛋白前体。     

苦参碱类生物碱联合恩替卡韦抗耐药HBV的作用效果及机制分析

目的:研究苦参碱类生物碱联合恩替卡韦抗耐药乙型肝炎病毒(HBV)的作用效果以及对p38 MAPK,钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)表达的影响。方法:以解放军第302医院自行构建的恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒复制细胞株Hep G2.A64为模型,采用CPE,CCK-8分别考察苦参碱类生物碱氧化苦参碱、苦参碱、槐果碱、槐定碱和核苷类药物恩替卡韦单独用药及两者联合用药的细胞毒性;采用酶联免疫法(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别观察联合用药对Hep G2.A64细胞HBs Ag分泌,HBV DNA复制,p38和NTPC mRNA表达,细胞中p38和p-p38蛋白表达水平的影响。结果:与单独用药比较,氧化苦参碱和恩替卡韦联合用药72 h后能显著抑制HBs Ag分泌,HBV DNA复制(P0.05),同时能显著降低NTCP基因和蛋白的表达水平以及磷酸化p38蛋白水平。结论:氧化苦参碱联合恩替卡韦可能通过下调NTCP的表达同时抑制p38蛋白磷酸化达到抗病毒的效果。氧化苦参碱联合恩替卡韦能显著增强抗耐药HBV病毒的效果。     

甲型H1N1流感患者血清流感病毒血凝抑制抗体滴度变化分析

目的 了解甲型H1N1流感患者发病后体内流感病毒特异性血凝抑制抗体滴度变化.方法 采集28例甲型H1N1流感患者发病后不同时间的血清,采用血凝抑制试验测定其抗体滴度并分析.结果 患者距发病1、5、15、22、37、49天和58天的血凝抑制抗体滴度分别为5.36、9.39、39.02、57.99、137.92、55.19和57.99,患者的最高抗体滴度几何均数为148.55,其中96.4％( 27/28)的患者在病程中产生保护性抗体和发生抗体血清转换.结论 甲型H1N1流感患者能有效产生保护性水平的抗体,有较好的免疫反应.     

新型肠道病毒89型结构蛋白VP1的构建表达及序列分析

目的研究克隆表达新型肠道病毒89型VP1结构蛋白．并进行活性鉴定和序列分析。方法分离肠道病毒89型VP1结构蛋白全基因,克隆入原核表达载体PET-28构建重组质粒pH—VP1,在大肠埃希菌BL21中进行表达,检测表达产物的特异性及活性。将EV89VP1核酸序列与Genbank数据库中的序列进行比对并建立系统进化树。结果重组质粒在1mmol／L的IPTG37℃诱导7h后可诱导表达得到约33kD的蛋白。经WesternBlot实验检测证明表达的融合蛋白具有EV89抗原的活性。分离的EV89病毒其VP1区核酸序列与Genbank数据库中仅有的3株EV89序列同源性分别为86．4％、85．9％、85．6％。结论成功构建EV89重组蛋白．其表达产物具有良好的特异性及活性,可进-步用于VP1检测方法的研制。进化分析表明,分离的EV89VP1区与Genbank数据库中其他分离株亲源性较远。     

慢性重型肝炎122例的死因比较分析

目的分析慢性重型肝炎的死因从而寻找降低死亡率的方法.方法慢性重型肝炎患者272例,死亡122例,其中男98例,女24例,年龄21～72(平均46)岁;存活150例,其中男126例,女24例,年龄16～74(平均40)岁.应用SPASS和SDAS软件对两组患者病情最重时的实验室检查指标(凝血酶原活动度、总胆红素、总胆固醇、胆碱酯酶)和并发症、死因进行比较分析.结果在病情最重时,死亡组患者的凝血酶原活动度(12.5%)显著低于存活组(25.9%,P＜0.01),死亡组患者的总胆红素(474.1 μtmol·L-1)显著高于存活组(343.1tmol·L,P＜0.05),死亡组患者的总胆固醇(1.1 mmol·L-1)显著低于存活组(1.9 mmol·L,P＜0.05),死亡组患者的胆碱酯酶(27.5 μkat·L-1)显著低于存活组(34.8μkat·L-1,P＜0.05).除胸水外,死亡组患者各种并发症的发生率(腹水93.4%、电解质紊乱87.7%、原发性腹膜炎63.1%、肝性脑病80.3%、脑水肿54.1%、上消化道出血45.1%、原发性腹膜炎以外的感染44.3%、肝肾综合征42.6%、脑疝23.8%)都显著高于存活组(腹水75.3%、电解质紊乱53.3%、原发性腹膜炎45.3%、肝性脑病14.7%、脑水肿0、上消化道出血5.3%、原发性腹膜炎以外的感染20.0%、肝肾综合征1.3%、脑疝0,P＜0.01).死亡组患者多合并4到9种并发症而存活组则多合并1到3种.死以脑水肿、脑疝、肝肾综合征、肝性脑病和上消化道出血为主.结论要降低死亡率,关键在于早诊断,早治疗,动态监测总胆红素、凝血酶原活动度、总胆固醇和胆碱酯酶值等实验室指标,积极防治各类并发症尤其脑疝、脑水肿、上消化道出血和肝肾综合征的发生.     

慢性乙型重型肝炎的临床研究——附488例分析

进一步说明慢性重型肝炎分型存在的必要性 ,以及说明由慢性肝炎和肝硬化引起的慢性重型肝炎的异同。使用ＳＰＡＳＳ软件和ＳＤＡＳ软件对 1997～ 1999年收治的 4 88例慢性乙型重型病毒性肝炎患者的临床主要特点进行分析。结果表明 :( 1)慢性重型肝炎占重型肝炎的 92 .0 3% ( 52 0 /565) ,其中成年慢性乙型重型肝炎 4 88例 ,占 93.85% ,慢性重型肝炎发生于慢性肝炎的为 158例 ( 32 .4 % ) ,发生于肝硬化的为 330例 ( 67.6% )。 ( 2 )无论是慢性肝炎 ,还是肝硬化 ,入院时即变重型 ,ＰＴＡ及ＴＢ达到重型肝炎诊断标准者均在 60 %以上。 ( 3)无…     

HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定

目的　在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法　利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果　PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论　成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 ,其表达产物具有良好的特异性及活性     

用RACE技术对一株肠道病毒3''端进行扩增和序列分析

目的 应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增，并对其核苷酸序列进行比较分析。方法 提取病毒总RNA，以锚定oligdT（17）引物进行逆转录，用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增，将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结果 获得了该病毒的3′端核苷酸序列，同源性分析结果显示该肠道病毒的核苷酸序列与肠道病毒76、89、90、91型的同源性最高为90％左右，而与其他型别的肠道病毒的同源性均小于80％；推导的氨基酸同源性与肠道病毒76、89、90、91型均在90％以上。结论 用RACE技术对肠道病毒3′端进行扩增及序列分析，证明该病毒属新型肠道病毒类，为进一步研究该病毒的分子生物学特性奠定了基础。