短发夹状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢上皮性癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

RNA干扰（RNAi）技术是运用双链RNA引发的转录后水平基因沉默机制,特异性抑制靶基因转录,进而下调相应蛋白表达水平及功能.新近的RNAi技术,是利用DNA载体直接在体内表达短发夹状RNA（shRNA）,特异性封闭相应的靶基因mRNA,抑制mRNA的翻译.与早期的RNA干扰技术相比,该方法的特异性和干扰效率均有较大提高,已广泛应用于多种研究领域.利用RANi技术特异地抑制癌基因、癌相关基因或突变基因的过度表达,使这些基因保持在沉默或休眠状态,从而使肿瘤细胞增殖速度减慢,凋亡加快,显示了RNAi技术用于肿瘤基因治疗的可行性和有效性.     

短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

目的：构建AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体，观察RNA干扰（RNAi）技术，对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用，并探讨其促进细胞凋亡的机制。方法：运用基因工程技术，设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA，构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞，荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达，计算转染效率，半定量RT—PCR（Semi-quantitative RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）检测AKT2的表达及干扰效率，流式细胞学检测法（FACS）检测细胞凋亡率，比较抑制AKT2基因前后卵巢癌细胞抵抗凋亡能力。结果：成功构建了PAKT2-ShRNA载体。A2780和SKOV3细胞转染pAKT2-shRNA后，荧光显微镜下观察转染效率约40％；Semi-quantitative RT-PCR和Western blot检测结果示，转染后AKT2 mRNA和蛋白表达均显著降低。FACS检测结果显示，转染pAKT2-shRNA后，紫杉醇25nmol／L处理细胞12h，与空白对照组和阴性对照组相比，细胞凋亡率显著增加，P〈0．05。结论：构建的pAKT2-shRNA真核表达载体能有效抑制AKT2基因表达；运用RNAi技术，降低卵巢癌细胞中AKT2基因表达水平，能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，促进肿瘤细胞凋亡。     

五味消毒饮合小蓟饮子加减治疗小儿急性肾小球肾炎(湿热内侵证)的疗效观察

目的 探讨五味消毒饮合小蓟饮子加减治疗小儿急性肾小球肾炎(湿热内侵证)的疗效.方法 选取急性肾小球肾炎患儿102例,按随机数字表法分为两组各51例.对照组给予西医常规干预措施;观察组在对照组治疗基础上给予五味消毒饮合小蓟饮子加减内服,每日1剂.两组连续治疗2周.比较两组蛋白尿、血尿转阴及浮肿消退时间、肾功能指标24h尿...     

ApoA-1和ApoB-100/ApoA-1比值对子痫前期孕妇的预测诊断价值探讨

目的:检测并比较子痫前期(PE)孕妇和正常健康孕妇血清中载脂蛋白A-1(ApoA-1)、载脂蛋白B-100(ApoB-100)的浓度及ApoB-100/ApoA-1比值,探讨其在预测PE中的诊断价值。方法:收集武汉中心医院2015年6月至2016年6月收治的48例PE孕妇为PE组,另选择同期健康孕妇48例为对照组。ELISA法检测ApoA-1、ApoB-100浓度,比较两组血清ApoA-1、ApoB-100浓度及ApoB-100/ApoA-1比值,ROC工作曲线检测其诊断PE的诊断效能。结果:PE组ApoA-1浓度显著低于对照组(167. 07±14. 61 mg/dl vs 244. 37±20. 84 mg/dl,P0. 001)。PE组ApoB-100浓度与对照组差异无统计学意义(104. 84±7. 05 mg/dl vs 102. 39±8. 08 mg/dl,P=0. 118)。PE组ApoB-100/ApoA-1比值显著高于对照组(0. 63±0. 07 vs 0. 42±0. 05,P0. 001)。血清ApoA-1、ApoB-100浓度和ApoB-100/ApoA-1比值在是否重度PE、HELLP综合征、胎儿生长受限及是否需要降压治疗的PE孕妇中差异无统计学意义(P0. 05)。ROC曲线示ApoA-1截断值为210 mg/dl时,预测诊断PE的敏感性为98%,特异性为92%,AUC=0. 971;当ApoB-100/ApoA-1截断值为0. 49时,预测诊断PE的敏感性为92%,特异性为93%,AUC=0. 931。结论:ApoA-1浓度和ApoB-100/ApoA-1比值是PE患者有价值的预测诊断指标,值得临床进一步研究。     

蛋白质组学技术探寻宫颈癌相关抗原

目的:应用蛋白质组学技术探寻宫颈癌相关抗原。方法:先用双向电泳(2-DE)分离宫颈癌患者的癌组织和癌旁正常组织中抽提的蛋白质混合物,再以免疫印迹将凝胶上的蛋白质转移到尼龙膜,继而与患者血清杂交显色后通过比较两者的反应性来筛选目的蛋白,最后运用质谱技术鉴定目的蛋白。结果:组织蛋白经2-DE分离、转膜后与患者血清杂交、显色,癌组织来源的蛋白质呈阳性反应。对应的癌旁正常组织来源的蛋白质呈阴性反应的蛋白质点有4个,切取其中1个经质谱鉴定为β微管蛋白Ⅳb(Beta tubulin Ⅳb)。β微管蛋白Ⅳb在宫颈癌患者体内发生体液免疫产生了抗体。结论:β微管蛋白Ⅳb可能是宫颈癌的相关抗原;蛋白质组学技术与血清学相结合是探寻肿瘤相关抗原的新方法。     

RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用

目的:探讨RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用。方法:构建RhoA真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV3,用RT-PCR和Westernblot检测SKOV3RhoAmRNA及蛋白表达水平;Boyden小室体外侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA的实验组与转染空载体的对照组比较,RhoAmRNA的表达丰度(RhoA/GAPDH)为12.01±1.72,明显高于对照组的6.81±1.24;RhoA蛋白的表达水平(RhoA/β-actin)为4.81±0.56,亦明显高于对照组的3.02±0.32,两者差异都有统计学意义(P<0.05)。Boyden小室体外侵袭实验中实验组与对照组平均侵袭百分数分别为(47.60±1.47)%和(22.60±2.40)%(P<0.05),比较划痕后0h与24h的宽度差,实验组和对照组愈合百分比分别为(65±6.4)%和(54±5.5)%(P<0.05);表明转染RhoA后,细胞侵袭和迁移能力明显增强。结论:RhoA增强了卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移能力。     

中药天花粉和氨甲喋呤治疗输卵管妊娠的对比分析

目的：通过对中药天花粉和氨甲喋呤治疗输卵管妊娠回顾性分析、探讨其疗效差别。方法：中药天花粉和氨甲喋吟分别治疗输卵管妊娠48例和32例，采用放射免疫法测定血hCG和B超监测输卵管妊娠直径大小。结果：中药天花粉治疗成功率(83．3％)，高于氨甲喋呤(62．5％)(P<0．05)；中药天花粉治疗成功时间14．5±38天，明显短于氨甲喋呤21．3±4．6天(P<0．05)。结论：中药天花粉治疗输卵管妊娠，其疗效优于氨甲喋呤。     

RhoC 过表达对人脐静脉内皮细胞体外迁移 及血管生成能力的影响

 目的　探讨RhoC 基因过量表达对内皮细胞体外迁移及血管生成过程的影响。方法　构建 RhoC 真核表达载体,以脂质体转染人脐静脉内皮细胞( HUVE) ,采用RT2PCR 和Western blot 检测 RhoC 的mRNA 及蛋白表达水平; 划痕实验检测细胞迁移能力; 胶原基质胶三维培养检测内皮细胞体 外血管生成能力。结果　转染RhoC 实验组与空载体对照组比较,RhoC mRNA 和蛋白表达明显增高; 细胞迁移能力和血管样结构生成能力明显增强。结论　RhoC 高表达能促进人脐静脉内皮细胞体外迁 移及血管生成。     

纤维粘附素介导的卵巢癌细胞粘附耐药的实验研究

目的:探讨纤维粘附素(FN)介导的卵巢癌细胞与胞外基质粘附对耐药的影响,并检测细胞粘附耐药时凋亡抑制基因Survivin的表达。方法:建立FN介导的细胞粘附模型,设定为粘附耐药(FN)组,以未铺纤维粘附素接种细胞为对照(NOFN)组。经细胞增殖实验(MTT)检测不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)紫杉醇(Taxol)对粘附耐药组和对照组细胞(A2780、SW626)生存率的影响,用流式细胞仪(FACS)检测2组细胞50μmol/L紫杉醇作用24h后的细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Westernblot)和流式细胞仪(FACS)检测细胞粘附耐药形成前后Survivin蛋白的表达。结果:MTT检测结果显示细胞株A2780和SW626经不同浓度的紫杉醇作用后FN组细胞生存率均明显高于NOFN组(P均<0.05)。FACS检测结果显示两株细胞FN组细胞凋亡率均明显低于N0FN组(P均<0.05)。Westernblot和FACS法检测结果显示,两株细胞FN组Survivin蛋白表达均明显高于N0FN组(P<0.05)。结论:纤维粘附素(FN)可能通过上调Survivin的表达介导卵巢癌细胞粘附耐药。