基于细胞膜色谱法的新疆准噶尔乌头中抗EGFR活性成分筛选

摘 要 目的：从准噶尔乌头中筛选抗EGFR作用的活性成分,并考察筛选成分对HEK293细胞和EGFR/HEK293高表达细胞株的抑制活性。方法: 用高表达表皮生长因子受体细胞膜色谱（EGFR/CMC）通过十通切换阀与高效液相色谱（HPLC）构成二维在线联用色谱系统,将CMC上保留的组分进行接液,用离线MS来鉴定准噶尔乌头中抗EGFR活性成分;利用分子模拟对接实验分析活性成分与受体的相互作用方式;体外用MTT实验证实活性组分对 HEK293细胞和EGFR/HEK293高表达细胞株的抑制作用。结果:乌头碱、12 表 欧乌碱、准噶尔乌头碱为作用于EGFR的有效成分,并具有与对照药物吉非替尼类似的色谱保留特性;分子模拟对接实验表明这些成分与EGFR的相互作用方式与阳性药吉非替尼相似;MTT实验证实在浓度为0.4～50 μmol·L-1范围内乌头碱,12 表 欧乌碱,准噶尔乌头碱对HEK293细胞增殖与EGFR高表达的体外抑制作用具有剂量依赖性。结论:筛选的结果与生物效应相一致;在线EGFR/CMC HPLC MS二维色谱系统在中药复杂体系中快速筛选发现活性物和药物先导物方面具有良好的应用前景,同时充分展现了细胞膜色谱法操作简便,快速,高效灵敏的优势。     

非标记小分子药物靶点发现技术及其在中药研究中的应用

药物靶点的发现在药物研发中发挥着至关重要的作用,非标记的药物靶点发现技术因其无需改造药物小分子结构,能更真实反映小分子药物与靶点互作,成为药物靶点发现的新途径。中药(traditional Chinese medicines,TCMs)具有多成分、多靶点的特性,其作用靶点及机制的研究备受制约,鉴于非标记的药物靶点发现技术在TCMs化学成分靶点发现研究中的应用潜力,本文综述了非标记的药物靶点发现新技术及其在TCMs研究中的应用,为TCMs化学成分靶点的发现提供参考,为促进TCMs现代化的发展提供新思路。     

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

覆膜支架治疗食管扩张术致食管纵隔瘘1例

1病例介绍1.1临床资料患者,男,65岁,2年前因进食梗阻就诊,诊断为食管中段鳞状细胞癌,行食管癌根治术并术后化疗.术后8个月再现进食梗阻,CT示食管癌颈段下部及吻合口上部占位,考虑复发,予行放疗并巩固化疗.7个月后,进食困难加重,入院.查体:右胸壁和腹壁正中见两处陈旧性手术切口,余无特殊.X线吞钡示(图1):食管上段癌术后右侧胸腔胃,食管上段局限性狭窄,下段通畅.     

对比晚期大肠癌三种不同化疗途径的疗效

目的对比三种不同化疗途径在治疗晚期大肠癌中的疗效。方法将我院120例晚期大肠癌患者随机分为3组,A组行全身静脉化疗;B组行口服希罗达化疗;C组行5-FU化疗粒子植入术。分别观察1、2年生存率、并发症发生率及有效率。结果A、B、C3组1、2年生存率分别为77．50％、60．00％;70．00％、50．50％;75．00％、57．50％,A、C组生存率高于B组,差异有统计学意义（X^2=6．11;P〈0．05）;3组并发症发生率分别为72．50％、70．00％、15．00％,C组并发症发生率低于A、B组,差异有统计学意义（X^2=6．83;P〈0．05）;3组治疗后有效率分别为85．00％、67．50％、92．50％,A、C组有效率高于B组,差异有统计学意义（X^2=6．29;P〈0．05）。结论5-FU化疗粒子植入治疗晚期大肠癌疗效优于全身静脉及口服化疗。     

重型乙型肝炎预后荟萃分析

目的荟萃分析重型乙型肝炎预后的影响因素。方法检索截至2009年11月公开发表的重型乙型肝炎相关的论文,提取其中反映预后相关的临床资料,包括总胆红素（TBil）、凝血酶原活动度（PTA）、甲胎蛋白（AFP）、肌酐水平、临床生化指标及肝性脑病情况。用随机模型分析以标准化均数差（SMD）和相对危险度（RR）为效应量进行异质性检验和统计量合并。结果 13项研究共包含重型乙型肝炎患者2429例。生存组和死亡组中,TBil、PTA、AFP、肌酐水平在荟萃分析中均存在明显差异（P〈0.001）。研究中除肌酐和肝性脑病异质性差异无统计学意义,其他预后变量存在较大异质性,且异质性不能通过荟萃回归和分层降低。结论在荟萃分析中TBil、PTA、AFP、肝性脑病及肌酐在重型乙型肝炎病程中具有良好的预后判断价值。肝性脑病和肌酐水平在各研究中对预后判断的结果一致。然而TBil、PTA、AFP对预后的判断仍然存在较大的异质性。异质性可能来源于研究样本排除标准的差异,对于重型乙型肝炎的诊断需要一个纳入标准（PTA≤40%,TBil〉10倍正常值上限）,同时也需要相关的排除标准。这将对预后判断的准确性和诊断模型的效能有重要价值。     

乙型肝炎病毒核心蛋白c/el表位处TC标签的基因标记对S和e抗原表达的影响

目的 研究乙型肝炎病毒核心蛋白c/el表位处TC标签的基因标记对S和e抗原表达的影响,探索TC标签标记HBV病毒体的可行性.方法 以含有1.3倍HBV基因组的载体为模板,在HBV C基因中插入编码TC标签的碱基序列,得到重组的突变型HBV载体,其编码的核心蛋白的c/el表位处嵌入了TC标签.将野生型和突变型HBV载体分别瞬时转染HepG2细胞,Westernblot检测野生型和各种TC嵌合型核心蛋白的表达,酶联免疫吸附法分析病毒S和e抗原的表达.多组间比较用单因素方差分析.结果 Western blot显示各种嵌合型核心蛋白在细胞内成功表达,并且同野生型蛋白的表达水平无显著差别,酶联免疫吸附法检测表明各组细胞S和e抗原表达水平没有明显差别.结论 HBV核心蛋白c/el表位处TC标签的基因标记不会明显影响突变HBV载体表达病毒蛋白.     

蜂眠宁胶囊对肾虚型老年痴呆模型大鼠的改善作用

目的研究蜂眠宁胶囊对肾虚型老年痴呆动物模型的改善作用。方法将雄性Wistar鼠随机分为6组,即空白组、假手术组、模型组、六味地黄丸组和蜂眠宁胶囊大、小剂量组。每天灌胃给予氢化可的松(15mg/kg),两周后于侧脑室注射-淀粉样蛋白(25-35)10 g建立肾虚型老年痴呆动物模型。于手术第2天开始,六味地黄丸和蜂眠宁胶囊大、小剂量组灌胃给药。观察、检测各组大鼠的体重及一般状态、学习记忆能力、自主活动,行为学检测后测定各组大鼠血清皮质酮含量、免疫学指标及脑组织病理学变化。结果模型组大鼠体重增长缓慢,自主活动迟缓,水迷宫学习记忆能力减退,胸腺和脾指数降低,血清皮质酮值降低;假手术组各项指标比模型组轻,表明短时间肾虚对学习记忆有一定影响;蜂眠宁胶囊大、小剂量组动物体重增长、自主活动、水迷宫上台潜伏期、实台象限游程、穿越平台次数、胸腺和脾指数、血清皮质酮值等与模型组比较得到明显改善(0.05,0.01),效果具有显著性差异,并优于六味地黄丸组(0.05)。结论蜂眠宁胶囊对肾虚型老年痴呆症状具有显著改善作用。     

结直肠息肉伴高级别瘤变内镜下切除术后复发因素的分析

目的探讨结直肠息肉伴高级别瘤变内镜切除术后息肉复发的危险因素,为临床监测提供参考依据。方法收集2013年7月-2017年3月该院结直肠息肉伴高级别瘤变行内镜切除术且有术后随访资料的患者67例,统计术后复发情况,并进行回顾性分析。对患者特征和可能影响术后息肉复发的相关因素[性别、年龄、体重指数(BMI)、吸烟史、饮酒史、息肉部位、大小、形态及数目]进行单因素和多因素分析。结果结直肠息肉伴高级别瘤变内镜切除术后1、2和3年息肉复发率分别为7.5%、17.7%和23.5%。术后3年息肉累计复发率为41.8%,其中高级别瘤变累计复发率为7.5%。高龄、肥胖、直径 2.0 cm息肉和多发性息肉的患者术后复发率较高,多因素分析显示息肉数目是息肉复发的独立危险因素(OR=3.191,95%CI:1.056～9.641)。结论结直肠息肉伴高级别瘤变内镜切除术后息肉复发率较高,且随着随访时间的延长而升高。术前息肉数目是预测息肉复发的重要因素。     

正畸静压力通过p38MAPK调控牙周膜细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的:研究持续性正畸静压力对牙周膜细胞(PDLCs)表达MMP-2和MMP-9的调控及其有关的调控通路。方法:体外培养PDLCs,取4~7代的PDLCs,随机分成5组,分别施加0、2 g/cm²(24 h)、2 g/cm²(48 h)、4 g/cm²(24 h)、4 g/cm²(48 h)的持续静压力,对细胞形态及骨架F-actin进行检测,通过Western blot观察持续静压力对MMP-2、MMP-8、MMP-9的表达的影响。研究相关MAPK通路包括JNK、ERK、p38MAPK在静压力引起MMPs表达变化中的作用。分组添加p38MAPK阻断剂SB203580,分别通过Western blot和免疫荧光观察p38MAPK通路的作用。结果:在不同的持续静压力下,PDLCs形态未见明显变化,F-actin染色显示细胞骨架未有明显区别。Western blot显示静压力对MMP-8表达未见明显影响,MMP-2和MMP-9的表达明显上调。且这种上调作用与p38MAPK通路有关,与JNK和ERK通路无关。结论:持续静压力调控PDLCs MMP-2和MMP-9的表达,这种调控通过p38MAPK途径产生作用,与JNK和ERK通路无关。