另一类型内皮祖细胞移植在损伤血管内膜修复中的作用

目的：观察体外培养的兔外周血另一种内皮祖细胞(EOCs）自体移植修复内膜球囊损伤血管的效果。方法：实验动物随机分为EOCs移植组（n＝8）和对照组(n＝8)。密度梯度离心法分离兔外周血单核细胞（MNCs）,在EGM-2培养基的诱导分化下获得EOCs。将第二次传代的EOCs重悬于100 μL生理盐水中移植至兔颈总动脉内膜球囊损伤血管局部(移植组),仅注入100 μL生理盐水者作为对照组。同时用CM-DiI标记EOCs移植,进行细胞示踪。术后4周,荧光显微镜下观察标记细胞的分布,并测量内膜损伤血管段再生内皮覆盖率(RA/TA)和新生内膜增生程度（IA/MA）。结果：术后4周,荧光显微镜下,在血管中膜、新生内膜层和内膜表面均可见荧光标记的细胞。伊文思蓝染色显示,EOCs移植组的再生内皮覆盖率(89.1%±6.3%)显著高于对照组(62.1%±7.5%,P<0.01）;与对照组比较,EOCs移植组的新生内膜形成明显减少,两者的IA/MA比值分别为0.88±0.14和0.44±0.06（P<0.01）。结论：EOCs移植可显著加速内膜损伤血管的再内皮化,并减少新生内膜的形成。     

ADMA对内皮生长晕细胞凋亡及其相关p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的:探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对内皮生长晕细胞(EOCs)凋亡和黏附能力的影响以及凋亡相关p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的变化。方法:分离脐血中单个核细胞并原代培养扩增内皮生长晕细胞,免疫细胞化学染色和荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。将浓度为0、1、5、10、30μmol/L ADMA与内皮生长晕细胞作用48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率,DAPI染色及AnnexinV/PI双染观察凋亡细胞核形态变化。在倒置显微镜下观察计数重黏附细胞数来测定细胞黏附能力。用特异性的phospho-p38MAPK抗体的W esternb lotting检测p38MAPK的活性。结果:采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性。ADMA(1-30μmol/L)诱导内皮生长晕细胞的凋亡(P0.01),同时ADMA(5-30μmol/L)使phospho-p38MAPK蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性。ADMA作用组和对照组相比,激光共聚焦显微镜下可见更显著的细胞凋亡形态学改变。除1μmol/L ADMA外,5、10、30μmol/L ADMA均可抑制内皮生长晕细胞的黏附能力。结论:ADMA能诱导内皮生长晕细胞发生凋亡并抑制其黏附能力,ADMA诱导内皮生长晕细胞发生凋亡可能与p38 MAPK磷酸化水平上升有关。     

姜黄素对实验性动脉粥样硬化家兔的影响

目的 观察姜黄素对实验性动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)家兔血浆内皮素(ET)、血浆一氧化氮(NO)水平和结构型一氧化氮合酶(constitutive NOS.cNOS)活性的影响.探讨其影响动脉粥样硬化的机制.方法 将28只雄性日本大耳白兔随机分为3组.即对照组(喂食普通饲料)、模型组(喂食高脂饲料)和姜黄素组(喂食高脂饲料 100mg·kg-1·d-1姜黄素).喂食12周后,取耳缘动脉血测定血总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、NO和ET水平;处死家兔取主动脉,测cNOS活力及主动脉内膜脂质斑块面积;取主动脉弓作病理切片.结果 姜黄素组和模型组TC、LDL-C及ET水平均明显高于对照组(P<0.05),而血浆NO及cNOS均明显低于对照组(P<0.01或<0.05),姜黄素组TC、LDL-C、ET水平均显著低于模型组(均P<0.01),而血浆NO及cNOS活力均显著高于模型组(均P<0.01);姜黄素组主动脉内膜脂质斑块相对面积[(33.23%±10.59)%]明显小于模型组[(52.69%±12.20)%](P＜0.05).结论 姜黄素可以降低血脂和血浆ET水平,并能提高血浆NO及动脉壁组织cNOS活性,减少内膜斑块形成,具有抗动脉粥样硬化作用.     

姜黄素对动脉粥样硬化家兔血管内皮功能的影响

目的: 观察姜黄素对实验性动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)家兔血浆一氧化氮(NO)水平,结构型一氧化氮合酶(constitutive NOS, cNOS)活性和非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)的影响,探讨姜黄素抗AS作用及与ADMA的相关性. 方法: 38只雄性日本大耳白兔随机分为4组,即对照组(8只,喂食普通饲料)、模型组(10只,喂食高脂饲料)、低剂量姜黄素组(10只,喂食高脂饲料+100 mg·kg^-1·d^-1姜黄素)和高剂量姜黄素组(10只,喂食高脂饲料+200 mg·kg^-1·d^-1姜黄素).于实验的第12周末测定血浆TC,LDL-C,NO,内皮素(endothelin,ET),ADMA水平,主动脉组织cNOS活力,同时留取主动脉组织行病理检查. 结果: 喂食高脂饲料的3组较对照组家兔血浆ADMA和ET水平浓度均有升高(P<0.01),血浆NO浓度、动脉组织cNOS活性降低(P<0.01).姜黄素组家兔血浆ADMA和ET水平较模型组低(P<0.05),血浆NO浓度、动脉组织cNOS活性则要高出于模型组(P<0.01),2个姜黄素组之间未见显著性差异. 结论: 姜黄素有可能通过降低血浆ADMA水平,在AS进程中发挥重要的内皮保护作用.     

雷帕霉素对血管内皮细胞凋亡及增殖、迁移、成血管能力的影响

目的:探讨雷帕霉素(rapamicin)对内皮细胞凋亡及增殖、迁移、成血管能力的影响.方法:培养脐静脉内皮细胞并分组,将浓度为0、1、10、100 ng/mL的rapamycin与内皮细胞作用24 h,DAPI染色观察凋亡细胞核形态变化.CCK8法检测内皮细胞的增殖能力,transwell小室检测迁移能力,并在倒置显微镜下检测细胞的成血管能力.结果:10、100 ng/mL rapamycin能明显抑制内皮细胞增殖能力(P<0.01).同时rapamycin (1 ～100 ng/mL)能抑制内皮细胞的迁移能力(P<0.01).rapamycin处理组和对照组相比,DAPI染色可见更显著的细胞凋亡形态学改变.100 ng/mL rapamycin作用组与对照组相比,能明显降低细胞成血管能力(P<0.01).结论:rapamycin可以诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖、迁移和成血管能力.     

雷帕霉素及基质细胞衍生因子1α对内皮生长晕细胞生物学功能的影响

目的观察基质细胞衍生因子1α对内皮生长晕细胞生物学功能的作用,以及探讨雷帕霉素对这种作用的影响。方法分离脐血中单个核细胞,采用贴壁法培养内皮生长晕细胞。免疫细胞化学染色鉴定第二代细胞的内皮前体细胞特性。取第3代细胞分为四组,分别用10μg/L基质细胞衍生因子1α、10μg/L基质细胞衍生因子1α+1μg/L雷帕霉素、1μg/L雷帕霉素、普通培养液(空白对照)孵育内皮生长晕细胞24 h。采用CCK-8法检测内皮生长晕细胞的增殖能力,划痕试验检测内皮生长晕细胞的迁移能力。结果采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性。与10μg/L基质细胞衍生因子1α共同孵育的内皮生长晕细胞其增殖能力和迁移能力均得到活化(P<0.01),但1μg/L雷帕霉素抑制了这种活化作用(P<0.01)。并且1μg/L雷帕霉素能够明显抑制内皮生长晕细胞的生物学功能(P<0.05)。结论基质细胞衍生因子1α能够活化内皮生长晕细胞的增殖能力及迁移能力,雷帕霉素不但抑制内皮生长晕细胞本身的迁移能力,而且能够抑制内皮生长晕细胞的增殖能力并抵消基质细胞衍生因子1α对内皮生长晕细胞生物学功能的活化作用。     

罗格列酮对ADMA氧化应激损伤内皮生长晕细胞的影响

目的：观察过氧化物体增殖剂激活的受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对非对称性二甲基精氨酸氧化应激损伤内皮生长晕细胞的影响。方法: 分离脐血中单个核细胞，采用贴壁培养法培养扩增内皮生长晕细胞（EOCs）。以10 μmol/L 非对称性二甲基精氨酸（ADMA）和不同浓度的罗格列酮（0、1、5、10 μmol/L）与第2代细胞孵育72 h，检测细胞的凋亡率、增殖能力、成血管能力，RT-PCR法检测内皮一氧化氮合酶（eNOS）mRNA的表达。结果: 采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性。ADMA能抑制细胞功能并增加细胞的凋亡率，1、5 μmol/L罗格列酮能够对抗这种损伤（P<0.01）并能够促进细胞的增殖（P<0.01）。但10 μmol/L罗格列酮的保护作用减弱或丧失，甚至可以抑制细胞的成血管能力(P<0.01)。5 μmol/L罗格列酮浓度组eNOS基因表达增强（P<0.01），10 μmol/L组eNOS基因表达减弱（P<0.01）。结论: 低浓度的罗格列酮（<10 μmol/L）能够减轻和保护由ADMA所致的内皮生长晕细胞的氧化应激损伤，并能够促进内皮生长晕细胞增殖，这种作用部分是通过活化eNOS基因实现的。     

非对称性二甲基精氨酸对内皮生长晕细胞凋亡和功能的影响

目的:探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对内皮生长晕细胞(EOCs)凋亡和功能的影响.方法:密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,培养并扩增EOCs,免疫组化法、荧光染色法鉴定其内皮细胞特性.将浓度为0、1、5、10、30μmol/L的ADMA与EOCs作用48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率,DAPI染色观察凋亡细胞核形态变化,并在倒置显微镜下检测细胞的黏附能力和成血管能力.结果:ADMA(1～30μmol/L)呈浓度依赖性的诱导EOCs的凋亡(P<0.01).ADMA处理组于DAPI染色下可见更显著的细胞凋亡形态学改变.除1μmol/L ADMA外,5、10、30 μmol/L ADMA均可抑制EOCs的黏附能力.10 μmol/L ADMA作用组与对照组相比,明显降低细胞成血管能力(P<0.01).结论:ADMA可以诱导体外培养的EOCs发生凋亡并抑制其黏附能力和成血管能力.     

川芎嗪对冻存内皮生长晕细胞的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对冻存复苏后内皮生长晕细胞(EOC)复苏率及其增殖、黏附、成血管能力的影响。方法:密度梯度离心法分离脐带血中单个核细胞,体外扩增培养EOC,免疫组化法、荧光染色法鉴定内皮细胞特性。采用不含TMP(对照组),和含10、25、50 ng/mL TMP的冻存液对EOC进行冻存,24 h后复苏并观察各组细胞在不同时间点的复苏率及增殖、黏附、成血管能力。结果:TMP 10 ng/mL组细胞与对照组细胞间复苏率、增殖、黏附及成血管能力差异无统计学意义,而25 ng/mL及50 ng/mL组的复苏率、增殖、黏附及成血管能力均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),与正常的未冻存组细胞接近。结论:TMP可以提高冻存后EOC的复苏率,并一定程度地保护复苏后细胞的增殖、黏附及成血管能力。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体参与雷帕霉素诱导血管内皮细胞功能损伤的体外研究

目的: 探讨雷帕霉素对内皮细胞凋亡和增殖、迁移能力的影响,以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的变化。方法: 用浓度为0、1、10、100 μg/L 的雷帕霉素孵育内皮细胞24 h,应用CCK8法检测血管内皮细胞的增殖能力,Transwell小室和划痕试验检测细胞迁移能力,DAPI染色观察凋亡细胞核形态改变,Western blotting法检测caspase-3活性以显示血管内皮细胞的凋亡,并用 Western blotting检测TRAIL在凋亡的内皮细胞中的表达。结果: 雷帕霉素(1-100 μg/L)能诱导血管内皮细胞凋亡并抑制其迁移能力(P<0.01)。除雷帕霉素1 μg/L外, 10 μg/L和100 μg/L雷帕霉素均能抑制内皮细胞增殖能力(P<0.01),同时雷帕霉素(10-100 μg/L)使TRAIL蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性(P<0.01)。结论: 雷帕霉素能诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖和迁移能力。TRAIL表达上调与雷帕霉素诱导血管内皮细胞损伤有一定的相关性。