人重组胱天蛋白酶原-3的表达和体外活化

目的:建立一个在短时间内获取大量活化胱天蛋白酶-3的方法.方法:将胱天蛋白酶-3酶原的基因从真核表达载体中克隆到原核表达载体pMTY4-His中,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达MS2-胱天蛋白酶原-3融合蛋白;将包涵体变性,经酸化和浓缩进行体外活化;对所得蛋白用Western blot和活性试验进行鉴定.结果:构建成pMTY4-His-胱天蛋白酶-3原核表达载体,在大肠杆菌中获得了较高水平表达的胱天蛋白酶原-3酶原-MS2融合蛋白.体外活化后每升诱导菌可获得约10 mg蛋白,用抗胱天蛋白酶-3单克隆抗体证实所得蛋白为胱天蛋白酶原-3,活性试验证实得到高活性的蛋白.结论: 成功地建立了大量获取高活性的胱天蛋白酶-3的方法,为深入研究胱天蛋白酶-3的功能和性质提供物质基础.     

单次趋化素样因子1导入所致小鼠肺病变的转归及其意义

目的 研究单次趋化素样因子1(CKLF1)导人所致小鼠肺病变的转归及其意义.方法 120只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组60只.实验组小鼠股四头肌内注入自行构建的pcDNA3.1-CKLF1-Myc-His表达质粒(CKLF1质粒)100 μg,对照组小鼠相同部位注入pcDNA3.1-Myc-His空质粒100μg,注入后均给予局部电脉冲刺激.质粒导人后第1、4、8周末每组各处死20只小鼠,观察并比较2组支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织的病理学变化.结果 导入质粒后1和4周,实验组小鼠BALF中中性粒细胞分别为(35.0±5.2)%和(22.9±2.2)%,淋巴细胞分别为(34.5±2.8)%和(22.0±2.0)%,均明显高于对照组[中性粒细胞(6.7±2.2)%、(7.0±2.4)%,淋巴细胞(5.9±1.6)%、(6.1±2.7)%,均P<0.01].肺组织病理学检查显示,CKLF1质粒导人后1周小鼠气道上皮细胞脱落,肺间质充血水肿、炎细胞渗出;4周可见肺泡间隔增厚,中性粒细胞、巨噬细胞及成纤维细胞明显增生,大量胶原纤维沉积于肺间质;8周可见肺组织病变明显减轻,肺泡结构渐趋恢复.结论 CKLF1可引起支气管肺组织的炎性损伤,单次CKLF1导入所致肺病变可自行逆转.     

感染异盘并殖吸虫大鼠的细胞免疫学研究(摘要)

感染异盘并殖吸虫大鼠的细胞免疫学研究（摘要）研究生李现亭导师马灿华夏代光（昆明医学院寄生虫学教研室，昆明６５００３１）关键词异盘并殖吸虫，嗜酸性粒细胞，Ｔ淋巴细胞，吡喹酮中图分类号Ｒ３８３．２以建立大鼠异盘并殖吸虫病病理模型为基础，进而观察吡喹酮治疗...     

异盘并殖吸虫膜抗原的生化及免疫学特性(摘要)

异盘并殖吸虫膜抗原的生化及免疫学特性（摘要）研究生李现亭导师马灿华夏代光（昆明医学院寄生虫教研室，昆明６５００３１）关键词异盘并殖吸虫，表皮膜蛋白，免疫印迹技术，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００中图分类号Ｒ３８３．２用０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００／ＰＢＳ溶液...     

消化道恶性肿瘤端粒酶检测及其临床意义研究

目的 :探讨端粒酶活性在消化道恶性肿瘤中的表达意义。方法 :采用改良TRAP -银染法 ,检测 10 0例消化道恶性肿瘤术前内镜活检标本及 2 0例正常消化道组织中端粒酶活性 ,并同时与病理检查结果对照分析。结果 :10 0例消化道恶性肿瘤活检标本有 87例端粒酶阳性 ,阳性率 87% ,其中食道癌端粒酶阳性率 86 1% ( 3 1/3 6) ,胃癌为 85 4% ( 3 5 /4 1) ,大肠癌为 91 3 % ( 2 1/2 3 ) ;2 0例正常消化道组织均为阴性。与病理结果比较有较好相关性 ,并能检出某些病理术前不能检出的活检标本 ( 5 /11) ,与病理活检有互补作用。端粒酶活性表达与肿瘤的组织学类型 ,分化程度及体积大小无显著相关性 ,与肿瘤的临床分期及有无转移显著相关。结论 :端粒酶活性检测对消化道恶性肿瘤的诊断及预后估计有重要价值 ,是一个敏感性和特异性较高应用前景较好的肿瘤标记物。     

大鼠趋化素样因子对成肌细胞促增殖作用的研究

目的 探讨大鼠趋化素样因子1和2（rCKLF1，2）对成肌细胞的增殖促进作用。方法 构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体，并瞬时转染293T细胞，收获培养上清，分别以^3H-TdR掺入和MTT比色法，分析rCKLF1和rCKLF2对小鼠肌母细胞系C2C12和原代肌卫星细胞增殖的促进作用，结果 成功地构建了rCKLF1和rCKLF2的真核表达质粒，并在SV40转化的293T细胞中瞬时表达rCKLF1和rCKLF2，瞬时转染上清能够使C2C12细胞的^3H-TdR的掺入值增加2倍或3倍，MTT比色法分析表明，rCKLF1和rCKLF2的转染上清，对Wistar大鼠乳鼠肌卫星细胞具有增殖促进作用。结论 rCKLF1和rCKLF2能够促进骨骼肌细胞的增殖，为进一步探讨CKLF家族分子在骨骼肌细胞增殖分化中的作用提供了实验依据。     

人趋化素样因子2对小鼠成纤维细胞BALB/c 3T3的促增殖和凋亡抑制作用

目的　探讨人趋化素样因子 2 (CKLF2 )对小鼠成纤维细胞BALB c 3T3增殖和凋亡的影响。方法　构建pcDI CKLF2真核表达载体 ;建立稳定表达人CKLF2的BALB c 3T3(3T3 CKLF2 )细胞系 ;以细胞计数和MTT法分析过表达人CKLF2后对 3T3细胞增殖的影响 ;以流式细胞术检测annexin Ⅴ阳性细胞为凋亡指标 ,分析 3T3 CKLF2细胞和 3T3 pcDI细胞对撤除血清诱导凋亡的反应情况。结果　成功地建立了稳定表达人CKLF2的BALB c 3T3细胞系 ,过量表达人CKLF2的 3T3细胞系增殖速度明显加快 ,同等接种量的细胞培养 40h以后 ,3T3 CKLF2细胞的数量 (1.0 7× 10 6 )比 3T3 pcDI细胞(2 .5 4× 10 5)及野生型 3T3细胞 (3 .0× 10 5)高 2～ 3倍 ;流式细胞术分析表明 ,撤除血清后 3T3 CKLF2的annexin Ⅴ阳性细胞数 (13.34% 48h、15 .44 % 96h)明显低于 3T3 pcDI细胞 (19.36 % 48h、39.2 % 96h)。结论　人CKLF2能够促进BALB c 3T3细胞的增殖和抵抗撤除血清诱导的细胞凋亡 ,这些研究为进一步探讨CKLF家族的生物学功能提供了实验依据。