自体双层大网膜移植重建结膜囊

目的:研究自体双层大网膜重建结膜囊恢复正常眼表解剖结构和生理功能的可行性。方法:用电凝器热烧伤的方法损伤实验家兔约1/2范围的球结膜、穹窿结膜和睑结膜。第2天,于腹上中线偏左剪开约3cm长的切口,暴露胃小弯部,剪取少许大网膜放入含生理盐水的培养皿中待用。将电凝损伤坏死区的结膜分离去除,大网膜呈双层折叠式覆盖于损伤区,10-0尼龙线褥式缝合大网膜和结膜的交接部分。结果:术后12d,全部大网膜与结膜缘融合生长,眼表的解剖结构和生理功能得以逐渐恢复,角膜无明显的新生血管形成。结论:自体双层大网膜重建结膜囊是治疗睑球黏连性疾病的理想方法。     

自体血管内皮细胞移植替代角膜内皮层的实验研究

目的 探讨自体血管内皮细胞(VECs)移植替代角膜内皮层的可行性.方法 40只家兔随机分为4组.A组,家兔VECs培养移植于去后弹力层的白体角膜植片内表面;B组,角膜植片去后弹力层后移植回原植床;C组,角膜植片取下后移植回原植床;D组,家兔不做处理.术后观察VECs生长状况及角膜植片透明度,A型超声测其厚度.结果 A组角膜植片混浊,1周内最明显,后混浊减轻,2周可见前房.细胞生长良好,部分细胞形状不规则.B组角膜植片混浊且不改善.C、D两组角膜无混浊.结论 VECs可替代自体角膜内皮层的屏障功能,维持角膜的透明状态.     

兔血管内皮细胞对角膜后弹力层代谢的影响

目的:检测移植后生长于角膜内皮面的自体血管内皮细胞对角膜后弹力层代谢的影响.方法:家兔26只随机分成3组:实验组10只,将培养的自体血管内皮细胞移植到无后弹力层的角膜内皮面;实验对照组10只,移植无角膜内皮层的自体植片;空白对照组6只,移植带角膜内皮细胞的自体植片,术后观察3组角膜植片的水肿变化.术后15d,取下各组角膜植片做病理切片HE染色观察各组植片的角膜后弹力层变化及其上的细胞分布情况.结果:实验组角膜植片的内皮面长满培养的自体血管内皮细胞.病理切片显示,生长的细胞呈单层分布,内皮面未见明显的后弹力膜样物质形成;实验对照组角膜植片高度增厚,内皮面无细胞生长和后弹力膜样物质形成;空白对照组角膜植片内皮面可见明显的后弹力层,其上可见单层细胞分布.结论:血管内皮细胞具有一定的角膜内皮细胞样功能,但不能产生角膜后弹力层样物质.     

翻转消化法和灌注消化法分离培养兔耳缘静脉内皮细胞的比较

目的 比较翻转消化法和灌注消化法对培养血管内皮细胞生长的影响,以探讨培养血管内皮细胞的最佳方法.方法 采用胰蛋白酶用翻转消化和灌注消化分别获取和培养兔耳缘静脉内皮细胞,并记录各组细胞生长情况,取第3代细胞用第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定所获得的细胞.结果 两种消化方法首次获得的血管内皮细胞数量差别不大,但培养5d、10d后,灌注法组的细胞生长情况要明显优于翻转法组的细胞(P＜0.01).免疫组织化学检测细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原呈阳性.结论 采用胰蛋白酶灌注法获取的内皮细胞生长情况要比翻转法获取的细胞好.     

兔颈静脉血管内皮细胞的培养

目的建立稳定的兔颈静脉血管内皮细胞的体外培养方法,为自体的细胞移植提供种子细胞.方法取单侧兔颈静脉,保留对侧;用0.25%胰蛋白酶液进行灌注消化;M199培养基进行培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化进行血管内皮细胞鉴定.结果培养后1-3 d可见细胞贴壁,3 d后细胞变形,7-10 d细胞融合成片,14 d后可进行传代培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化阳性,证实所培养的细胞为血管内皮细胞;取材后实验兔一直存活,未出现死亡.结论本实验方法可以稳定地获取体外培养的兔颈静脉血管内皮细胞,并保证了实验兔的存活,为后续自体细胞移植的开展创造了条件.     

羊膜作为载体培养血管内皮细胞替代自体角膜内皮细胞的研究

目的将羊膜作为血管内皮细胞的生长载体,探讨血管内皮细胞代替自体角膜内皮细胞生理功能的可行性,为大泡性角膜病变的治疗新方法提供实验依据.方法取实验家兔的一侧颈静脉(约3~4 cm),用0.25%胰蛋白酶 0.02?TA灌注法收集血管内皮细胞进行原代培养.取新鲜羊膜并去除其表皮细胞,剪成1.5 cm×1.5 cm大小,表皮面向上平铺于24孔培养板中,再将原代培养的血管内皮细胞传代于羊膜表面,当血管内皮细胞贴壁并长满整个羊膜表面后,我们将载体同血管内皮细胞一起移植到带有大泡性角膜病变的角膜内表面,1~2个月后观察其角膜透明度的变化.结果术后12 d左右,实验组和实验对照组(各10只)的角膜水肿及透明度有明显差别.实验组术后4~5 d时植片呈白色,高度水肿,通过植片看不见前房,10 d后,水肿开始减轻,角膜混浊开始好转,其中7只实验家兔的角膜透过植片能看见前房的组织结构.实验对照组的绝大部分角膜植片水肿加剧,部分角膜植片由于高度水肿而出现坏死溃疡,经统计学分析P<0.05,两者具有差异性.结论血管内皮细胞具有类似于角膜内皮细胞的生理功能,但其长期的功效有待于进一步的观察和探讨.