内皮素-1在兔骨髓间质干细胞体外诱导为心肌样细胞中的作用

目的　探讨外源性内皮素 - 1(ET - 1)在 5 -氮胞苷 (5 -aza)诱导兔骨髓间质干细胞 (BMSCs)向心肌样细胞转化过程中的生物学作用。方法　获取日本大耳白兔股骨干BMSCs进行培养及传代。实验分组 :①对照组 ;②ET - 1组 (ET - 1,30nmol/L) ;③ 5 -aza诱导组 (5 -aza ,10 μmol/L) ;④ 5 -aza +ET - 1联合诱导组 (5 -aza 10μmol/L +ET - 130nmol/L)。诱导期间 ,观察BMSCs生长状态 ,诱导 4周后 ,计算心肌样细胞转化率 ;心肌特异性肌钙蛋白 -Ⅰ免疫细胞化学染色 ,测定心肌样细胞直径 ;透射电镜观察心肌样细胞形态学特征。结果　 5 -aza +ET - 1联合诱导组分化细胞的体积明显增大 ,细胞直径显著大于 5 -aza诱导组 (P <0 .0 0 1) ,诱导 4周后 ,心肌样细胞出现自发收缩 ,肌钙蛋白 -Ⅰ免疫细胞化学染色阳性 ,对照组及ET - 1组极少见染色阳性细胞。 5 -aza诱导组与 5 -aza +ET - 1联合诱导组的心肌样细胞转化率无显著差别 (P >0 .0 5 )。超微结构观察显示 ,5 -aza +ET -1联合诱导组心肌样细胞原始肌节形成明显增多。结论　在诱导兔BMSCs向心肌样细胞分化的过程中 ,ET - 1发挥了促心肌样细胞肥大及成熟的生物学效应。     

低氧反应元件对缺血心肌转染人血管内皮生长因子165基因表达的调控作用

目的 观察低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞及缺血心肌转染人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因表达的调控作用.方法 分离新生SD大鼠心肌细胞,采用不同氧条件进行培养;建立猪心肌缺血一复灌动物模型,将在HEK293T细胞包装后获得的rAW-9HRE.hVEGF165病毒分别转染心肌细胞及动物缺血心肌.取培养心肌细胞及培养液,另取缺血区心肌组织,采用细胞免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot方法 分别测定hVEGF165蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定hVEGF165 mRNA表达;Ⅷ因子染色,计数缺血心肌新生血管变化.结果 病毒转染率为87%;心肌细胞A、B及E组培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高(P＜0.01),细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性;RT-PCR检测显示,心肌细胞A、B及E组可见484 bp目的 条带;在动物整体水平,与转基因缺血组比较,转基因复灌组hVEGF165 mRNA及蛋白表达显著减弱(P＜0.01),心肌毛细血管密度亦减少.结论 HRE作为氧敏感基因调控开关能有效地调控缺血心肌转染hVEGF165基因的表达.     

大鼠胃前壁的感觉神经元与肥大细胞关系的形态学观察──经内脏神经的传入纤维

目的观察大鼠近胃小弯处胃前壁经内脏神经传入的感觉神经元与肥大细胞的形态学关系以及大鼠脊神经节肥大细胞的形态和分布。方法逆行荧光标记和肥大细胞染色相结合的方法。结果脊神经节的肥大细胞有卵圆形、椭圆形和不规则形３种形态，分布于被膜、近被膜下区和节内３种部位，主要为藏红Ｏ阳性细胞。近被膜下区一些不规则肥大细胞有突起伸向邻近节细胞，这些细胞不是荧光标记细胞。结论结果为研究肥大细胞与节细胞之间的功能关系提供了形态学基础。     

心肌急性梗死对骨髓及外周血心肌转录因子Nkx2-5的影响

目的观察小鼠心肌梗死后，骨髓及外周血单核细胞心肌特异性转录因子Nkx2-5的变化。方法用大剂量异丙肾上腺素（10mg／kg）连续注射3天造成小鼠心肌急性缺血性梗死模型，第3天注射后30min，通过眼球摘除法取外周血，分离双后肢股骨、胫骨，冲洗骨髓腔得骨髓液，经密度梯度离心分离出骨髓及外周血单核细胞，正常组同心肌缺血梗死组。通过细胞Western blotting分析，比较正常组和心肌梗死组骨髓及外周血单核细胞中心肌特异性转录因子Nkx2-5的变化。结果正常骨髓单核细胞中存在Nkx2-5的表达，正常外周血单核细胞中Nkx2-5无表达；心肌梗死后骨髓及外周血Nkx2-5表达均明显增加，同正常组比较有统计学意义，P〈0．05。结论正常骨髓中无需培养或诱导即存在表达Nkx2-5的单核细胞，在心肌急性梗死后向外周血动员增加。     

17β-雌二醇对6-OH多巴胺损伤的多巴胺能神经细胞的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致的黑质多巴胺(DA)能神经细胞损伤的影响,探讨17β-E2是否具有神经保护作用.方法 新生2～3 d的雄性SD大鼠行常规中脑脑片培养,6-OHDA(200 μmol/L)诱导损伤后分为实验对照组和17β-E2组,实验对照组继续常规培养,17β-E2组又分为1.0× 10-8 mol/L、1.0×10-9 mol/L和1.0×1 0-10 mol/L 3个亚组,分别按上述浓度添加17β-E2进行干预.Western blotting方法 检测每组细胞干预15min、30 min、60 min后酪氨酸羟化酶(TH)的表达.结果 1.0×10-9 mol/L 173-E2组TH的表达最高,与实验对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);增加或减少17β-E2的浓度均不能上调TH的表达;3个不同时间点中,17β-E2作用15min时,TH的表达最高,延长作用时间并不能增加TH的表达量.结论 适当浓度(1.0× 10-9 mol/L)17β-E2作用一定时间(15 min)可以对受损的DA能神经细胞起到保护作用.     

新生儿溶血症心肌细胞超微结构特征及线粒体内元素分析

应用电镜及电镜X射线显微分析技术,对一例新生儿溶血症心肌细胞进行了超微结构形态观察并对其线粒体作了元素分析。结果表明,该例心肌细胞病理形态改变明显。线粒体内可见绒球样电子致密体,X射线元素分析证明,该结构中含有大量的氯,而仅含极少量的钙。作者对该异常结构的形成机理及氯沉积的原因进行了讨论。     

碱性成纤维细胞生长因子对脑室下层神经元前体细胞的影响

探讨碱性纤维细胞生长因子对离体培养的生后大鼠前脑脑室下层ＳＶＺ）社会元前体细胞增殖、分化的影响。方法取体重１００－１５０ｇ雄性ＳＤ大鼠ＳＶＺ细胞进行离体培养,培养分别为ＮｅｕｒｏｂａｓａｌＭｅｄｉｕｍ／ｂ２７和Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ／ｂ２７＋ｂＦＧＦ。倒置显微镜下观察其生长变化的形态学特征,并作细胞计数;免疫细胞化学染色观察其神经化学性质。结果①培养液中添加ｂＦＧＦ者,其ＳＶＺ源神经细     

低氧诱导因子在兔慢性缺血心肌中的表达趋势

目的探讨低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）在兔缺血心肌的表达趋势。方法建立兔缺血心肌动物模型,于冠状动脉结扎前及术后第2、4、6、8、10、12周取各组动物缺血区心肌组织,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Q-RT-PCR）法测定心梗区HIF-1αmRNΑ的表达;应用免疫组化及West-ern Blot法测定HIF-1α蛋白表达。结果与非缺血组相比,兔心肌缺血早期HIF-1α表达水平显著增高（P〈0.01）,HIF-1αmRNA及蛋白分别于第2及第4周达到高峰,持续约24周后,于第8周再次升高,并随之开始持续缓慢降低,但在缺血后第12周仍高于正常心肌表达量。结论HIF-1α的表达与心肌梗死区氧供关系密切,在心肌缺血早期,高表达HIF-1α参与了维持氧稳态及对低氧代谢的适应,在慢性缺氧期,随着HIF-1α调控多种下游靶基因表达,增加组织氧供使其表达渐显著降低。     

低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对新生血管的影响

目的探讨动物整体水平下低氧反应元件（HRE）调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对促生血管的影响。方法建立兔心肌缺血动物模型,实验分为转基因组、缺血对照组、载体对照组和假手术组。取缺血区心肌组织,检测心肌组织HIF-1α和hVEGF165表达,应用CD31及α-SMA免疫组化染色测定缺血心肌新生血管密度变化。结果心肌缺血早期,伴随内源性HIF-1α表达增加,hVEGF165mRNA及蛋白表达相继升高,缺血4～6周至高峰（P〈0.01）,缺血12周,hVEGF165表达下调至缺血前水平。缺血12周,转基因组CD31（＋）血管密度显著高于缺血对照组（P〈0.01）;但是,与缺血前相比,缺血12周,转基因组α-SMA（＋）血管密度显著低于缺血前水平（P〈0.01）。结论HIF-1α-HRE对缺血心肌转染hVEGF165表达发挥了有效的正相调控作用,有效地促进缺血心肌毛细血管生成。但hVEGF165作为促血管生成早期调节因子,其促生血管的结构尚不完整。     

电镜半薄切片制备方法的改进

透射电子显微镜生物标本制备中，半薄切片(厚度0．6～0．8μm)的制备是一种常用制样手段。半薄切片图像的清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野大于超薄切片，有利于获得高质量的光镜图像，同时也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。半薄切片制备中的一些关键技术如切片、捞片、脱脂、