VEGFR-3小干扰RNA对结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究血管内皮生长因子受体3(vascularendothelial growth factor receptor 3,VEGFR-3)小干扰RNA对结肠癌细胞移植瘤模型生长的影响.方法:构建VEGFR-3小干扰RNA表达载体.将结肠癌LoVo细胞注射入裸鼠皮下建造裸鼠移植瘤模型.将15只裸鼠结肠癌模型随机分成3组:实验组(pG-siRNA/VEGFR-3重组质粒)、阴性对照组(pG-HK重组质粒)与空白对照组.分别瘤体内注射相应的siRNA混合物或转染剂混合液,每3 d注射1次,共注射3次,观察肿瘤体积的变化;6 wk后处死裸鼠,肿瘤称取质量,并进行qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化,通过免疫组织化学进行微淋巴管计数.结果:实验组移植瘤体积和质量明显小于阴性对照组和空白对照组,有显著的统计学意义(P<0.001).实验组抑制率为52.75%,与对照组相比,差异有显著(P<0.001).qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化比较,实验组有明显降低(P<0.001).实验组淋巴管计数较对照组差异显著(P<0.05).结论:VEGFR-3 siRNA可以抑制裸鼠结肠癌细胞移植瘤的生长,并减少裸鼠移植瘤淋巴管生成,能有效抑制结肠癌细胞的生长.     

靶向血管内皮细胞因子受体3小干扰RNA腺病毒表达载体的构建

目的构建靶向血管内皮细胞因子受体3(VEGFR-3)的小干扰RNA重组腺病毒表达载体。方法将构建的靶向VEGFR-3特异性小干扰RNA真核表达载体pGenesil-siRNA的启动子及siRNA序列克隆入穿梭质粒pAdTrack,将质粒线性化处理后转化入pAdEasy。重组腺病毒载体线性化处理后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒,并进行PCR鉴定、病毒滴度测定;扩增后感染结肠癌LoVo细胞并进行Western blotting检测VEGFR-3蛋白的表达。结果双酶切鉴定及测序证实pAdTrack-pG-siRNA及pAd-VEGFR3-siRNA质粒构建正确,扩增纯化测定重组病毒pAd-VEGFR3-siRNA的滴度为5.6×109pfu/mL。病毒感染结肠癌LoVo细胞后测定VEGFR-3蛋白表达明显降低。结论靶向VEGFR-3小干扰RNA的腺病毒载体构建成功。     

乳腺癌髓系来源抑制细胞中吲哚胺2,3-双加氧酶表达与Tregs分布关系及临床意义

目的:研究乳腺癌CD33+髓系来源的抑制细胞(MDSCs)中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达情况及与Foxp3+调节性T细胞(Tregs)分布关系和临床意义。方法:运用免疫组化单染技术检测CD33+MDSCs细胞、Foxp3+Tregs,采用免疫组化双染检测CD33+MDSCs细胞中IDO的表达情况。结果:癌组织中CD33+MDSCs细胞、Foxp3+Tregs分布无序,呈散在分布;Foxp3+Tregs高比例组中,CD33+MDSCs细胞中IDO呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05);CD33+MDSCs中IDO的表达与患者年龄、肿瘤直径和组织学分级无明显关系,但与是否有淋巴结转移有密切关系(P<0.05)。结论:乳腺癌中CD33+MDSCs中IDO高表达参与肿瘤细胞免疫耐受的形成,可能与乳腺癌淋巴转移存在密切联系。     

全胃切除术后连续性空肠间置代胃术消化道重建的临床应用

目的探讨全胃切除术后消化道重建的合理术式。方法回顾186例全胃切除术患者术后完整资料及随访12个月的结果,以功能性连续性空肠间置代胃术组(FJI组,92例)为研究组,以"ρ"形Roux-en-Y空肠代胃术组(RYρ组,94例)为对照组,观察手术时间、术后并发症、消化道症状、营养状况等指标。结果与RYρ组相比,术后12个月时,FJI组胃潴留综合征发生率、体重减轻分别为8.70%和(4.1±1.5)kg,明显低于RYρ组[分别为22.34%和(6.5±2.0)kg,P<0.05];术后12个月VisickⅠ/Ⅱ级、血清白蛋白、血红蛋白水平分别为78.26%、(4.3±1.1)g/L、(149±6.1)g/L,均明显高于RYρ组[分别为62.77%、(3.6±1.0)g/L、(130±5.8)g/L,P<0.05],营养指数明显优于RYρ组。FJI组在饮食量与饮食次数、反流性食管炎、腹泻等方面与RYρ组无明显差异,所有患者在随访期间均无肿瘤复发和转移,无死亡病例,并发症发生率为2.69%。结论 FJI是一种操作不太复杂、并发症少、安全、易于推广的全胃切除术后消化道重建术。