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目的 克隆小鼠疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因,构建其重组腺相关病毒载体,鉴定目的 基因在真核细胞中表达.方法 用RT-PCR法从小鼠脾脏淋巴细胞克隆出全长HVEM基因,构建携带HVEM基因的穿梭质粒pAAV-IRES-HVEM-hrGFP和辅助质粒pAAV-RC及pAAV-Helper,利用磷酸钙共沉淀法将穿梭质粒共转染入AAV-293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-HVEM.用氯仿-PEG8000法纯化病毒,实时荧光定量PCR测病毒滴度.RT-PCR检测rAAV-HVEM在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达情况.结果 成功构建组装重组小鼠HVEM腺相关病毒,纯化后病毒滴度为5×1010 v·g/mL,且在CHO 转导细胞中能有效表达目的 基因.结论 构建的重组腺相关病毒载体rAAV-HVEM 为组织工程相关细胞转基因构建及临床应用提供先进的载体系统,为今后进一步研究HVEM的功能及其在部分疾病基因免疫治疗中的应用奠定基础. 相似文献
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