基因芯片技术在检测临床致病菌中的应用

细菌感染性疾病严重威胁人类健康.以培养为基础的传统致病菌检测方法存在耗时长、检测敏感性受培养条件限制等缺点,越来越不能满足临床的需要.因此,发展快速、准确检测病原菌的方法一直是人们追求的目标.近年来发展的基因芯片技术,具有高通量、集成化、微型化及自动化等特点,已广泛用于检测基因位点差异和分析基因表达水平等领域.在临床致病菌和耐药性的检测方面,基因芯片技术因其快速高效而逐渐受到人们的关注.     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

血吸虫重组卡介苗--Sj26GST疫苗的有关毒性研究

由于BCG免疫效果不够理想 ,以及结核分枝杆菌耐药性的产生 ,促使人们开始研制新的结核病疫苗。利用BCG独特的安全性和免疫佐剂作用和日本血吸虫中相对分子量为 2 6× 10 3 的谷光甘肽S转移酶 (Sj2 6GST)的良好免疫原性 ,已经构建出了一种重组卡介苗———Sj2 6GST(rBG Sj2 6GST)。我们就这种疫苗对小鼠的毒性进行了研究 ,从而为疫苗的安全性提供实验依据。将rBG Sj2 6GST疫苗及BCG、含质作者单位 :华中科技大学同济医学院病原生物学系 (蔡昌学 ,叶嗣颖 ,常燕子 ) ;湖北药检专科学校检验系微生物学及免疫学教研室 (胡佳杰 )通讯…     

社区与医院获得性感染金黄色葡萄球菌毒力因子对比分析

目的了解社区与医院获得性感染金黄色葡萄球菌的毒力因子PVL和TSST-1的携带情况。方法收集社区和医院获得性感染金黄色葡萄球菌菌株184株和262株,PCR检测毒力因子基因pvl和tst,统计分析检出率的差异。结果pvl在社区感染菌株中的检出率(11.96%)高于医院感染(0.76%),在MSSA中的检出率(7.50%)高于MRSA(2.91%);与pvl相反,tst在社区感染菌株的检出率(6.52%)低于医院感染(17.56%),在MSSA中的检出率(5.83%)低于MRSA(21.36%)。对不同感染部位菌株pvl和tst检出率进行两两比较后发现,社区皮肤/软组织感染菌株pvl的检出率最高,而医院感染菌血症菌株中tst的检出率最高。结论 PVL和TSST-1作为金黄色葡萄球菌的2种重要毒素,与感染部位、社区/医院获得性、细菌耐药性、疾病的严重性及转归都可能存在密切关系。     

基因芯片技术检测常见革兰阴性杆菌耐药基因的研究

目的设计一种耐药基因检测芯片,可并行检测临床常见的革兰阴性杆菌中较常见耐药基因。方法收集临床分离的70株革兰阴性杆菌:肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌,根据已知耐药基因序列设计并合成引物及探针,制备耐药基因检测芯片,进行杂交及扫描。结果耐药基因检测芯片除未检到IMP耐药基因外,其他耐药基因检测结果均与PCR检测结果一致。结论该研究设计的革兰阴性杆菌耐药基因检测芯片有较好的应用价值。     

脑血管病住院患者呼吸道感染病原菌分布及耐药性分析

目的了解2012年-2016年本院脑血管病住院患者呼吸道感染病原菌特点及耐药分析,为临床治疗提供指导。方法对2012年-2016年脑血管病住院536例患者痰培养检出的733株病原菌进行统计分析。结果共分离出的733株病原菌中革兰阴性杆菌638株(87.2%),革兰阳性球菌94株(12.8%)。肺炎克雷伯杆菌(26.7%)、鲍曼不动杆菌(11.2%)、铜绿假单胞菌(11.1%)、大肠埃希菌(8.9%)、金黄色葡萄球菌(11.1%)为主要致病菌。革兰阴性菌对氨苄西林、头孢唑林、头孢曲松等耐药率较高,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南等敏感性较高。金黄色葡萄球菌对青霉素G、克林霉素、红霉素等耐药率高,对利奈唑胺、万古霉素、利福平等敏感性较高。耐碳青霉烯类抗生素的大肠埃希菌检出率从2014年起开始逐年增高至10%以上。结论全面系统监测脑血管病住院患者呼吸道感染及其细菌耐药动态,对临床合理使用抗菌药物有重要的参考意义。     

多药耐药鲍氏不动杆菌耐药性研究

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRABA)的耐药性与抗菌制剂外排泵基因的存在情况。方法收集医院2009年6-9月住院患者中分离的MDRABA共20株,菌株耐药性采用纸片扩散法测定,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析3种抗菌制剂外排泵基因:adeB、mdf A、qacE△1。结果β-内酰胺类药物中头孢菌素类耐药率达100%,亚胺培南耐药率也达80%;20株MDRABA中adeB、mdf A、qacE△1均有检出,阳性率分别为85%、90%、65%;除6、9号菌株外,大多数菌株携带2~3种外排泵基因。结论该组20株MDRAB抗菌制剂外排泵基因高阳性率是这些菌株高耐药原因之一。     

多药耐药鲍氏不动杆菌可移动遗传元件研究

目的调查多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)转座子、整合子等可移动遗传元件的存在情况。方法收集宁波市李惠利医院2009年6-9月住院患者中分离的MDR-ABA共20株,采用聚合酶联反应(PCR)及序列分析的方法分析10种可移动遗传元件:tnpU、tnp513、IS26、ISEcp1、ISaba1、ISaba4、ISaba9、intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3。结果 20株MDR-ABA共检出5种基因:tnpU、tnp513、IS26、ISaba1、intⅠ1,其余5种基因未检出;各种基因阳性率以IS26和ISaba1最高16株(80%),intⅠ1次之13株(65%),tnp513为12株(60%),tnpU9株(45%);9株MDR-ABA同时检出5种基因,1株MDR-ABA同时检出4种基因,2株MDR-ABA同时检出3种基因,5株MDR-ABA同时检出2种基因,1株MDR-ABA仅检出1种基因,另有2株MDR-ABA未检出上述10种基因。结论同时检测MDR-ABA10种可移动遗传元件是国内首次报道,可移动遗传元件介导各种耐药基因使受体菌表现为多药耐药。     

耐亚胺培南革兰阴性杆菌的变迁与临床分布

目的 调查耐亚胺培南革兰阴性杆菌的分离情况和临床分布.方法 收集2008年1月-2010年12月住院患者各种标本中分离出的病原菌,采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2全自动微生物分析系统进行鉴定和药物敏感试验,结果用WHONET 5.4软件进行分析.结果 3年内共分离出耐亚胺培南革兰阴性杆菌株906株,其中2008年185株,分离率为15.7％,非发酵菌占93.0％;2009年361株,分离率为18.0％,非发酵菌占73.4％;2010年360株,分离率为18.1％,非发酵菌占81.9％,非发酵菌主要见于鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄杆菌属、嗜麦芽寡养单胞菌等;肠杆菌科主要见于变形菌属、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、肠杆菌属.结论 医院分离的耐亚胺培南菌株中非发酵菌一直占较大比例,且2009年出现的耐亚胺培南肠杆菌科比2008年明显上升,但2010年有所下降.     

重症监护室金黄色葡萄球菌感染干预效果观察

[目的]通过监测重症监护室金黄色葡萄球菌感染及耐药性变化,探讨重症监护室综合性干预对控制医院感染的作用。[方法]采用回顾性分析的方法,对某医院2011年和2012年重症监护室采取综合性干预措施前后,患者金黄色葡萄球菌的分离结果进行对比性分析。[结果]两年间金黄色葡萄球菌的分离率无明显差异(P0.05),但耐甲氧西林金黄色葡萄球菌构成比明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。金黄色葡萄球菌对苯唑西林、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率明显下降(P0.05)。两年间重症监护室金黄色葡萄球菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、呋喃妥因和喹奴普汀-达福普汀敏感率最高,均达100.00%。[结论]通过综合性干预,重症监护室金黄色葡萄球菌感染情况得到改善,耐药率总体有所下降。