藻酸盐凝胶三维培养体系在TMJ骨关节病髁突软骨细胞体外培养中的应用

目的 将藻酸盐凝胶三维培养体系应用于颞下颌关节骨关节病（osteoarthritis of temporomandibular joint,TMJOA)髁突软骨细胞的体外培养。方法 利用机械与酶消化的方法从TMJOA患者手术切除患疾髁突软骨中获得髁突软骨细胞，部分细胞在二维贴壁培养条件下体外培养1周；部分细胞在高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质，进行三维培养4周；分别对贴壁条件下培养细胞和藻酸盐细胞凝胶微球右蜡包埋切片进行Ⅱ型胶原和软骨特异性蛋白多糖的免疫组化鉴定。结果 从骨关节病髁突软骨组织中收获并行体外培养成活的细菌，鉴定为软骨细胞；体外培养的藻酸盐凝胶三维培养体系中的髁突软骨细胞生长状态良好；培养4周后细胞保持了良好的分化表型。结论 成功地体外培养成活了人TMJOA髁突软骨细胞；成功地将藻酸盐凝胶三维培养体系应用于人TMJOA髁突软骨细胞体外培养，在该体系中，软骨细胞生长状态与功能蛋白分泌能力良好。     

斑马鱼胚胎发育毒性评价方法的建立

目的以致胚胎毒性阳性药物全反式维甲酸（ATRA）及丙戊酸钠进行斑马鱼胚胎发育毒性试验,建立有效的斑马鱼胚胎发育毒性评价方法。方法采用水浴染毒法,将受精后2h（2hpf）的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度梯度的阳性约物。分别在24、48、72和144hpf观察并记录畸形及死亡的胚胎数目。统计阳性药物的EC50和LG50,计算致畸指数（TI=LC50／EG50）。结果两种阳性药物所致斑马鱼胚胎发育早期（24～48hpf）与发育后期（72～144hpf）的畸形表现不同。在72hpf,两种阳性药物对胚胎孵化率均有明显抑制作甩144hpf可见ATRA（≥1．6×10^-3mg／L）和丙戊酸钠（≥1．25×10^2mg／L）严晕致畸作用,T1分别为10.35和5．72。两种阳性药物胚胎敛畸率及死亡率均呈明显的浓度依赖关系,且与已有动物试验及体外试验结果相符。结论以两种阳性药物建立有效的斑马鱼胚胎发育毒性评价方法,可进行进一步的验证。     

颞下颌关节髁突软骨细胞体外培养中去分化现象研究

目的　研究去分化髁状突软骨细胞的细胞生物学特性。方法　连续在体外贴壁条件下培养传代正常乳兔髁突软骨细胞至第 2 0代 ,观察培养细胞的形态变化 ,免疫组化法和RT -PCR法对传代过程中的数代细胞对II型胶原与蛋白多糖聚糖体的表达情况进行连续检测 ,观察细胞软骨基质蛋白表达分泌的变化以及发生明显去分化软骨细胞的超微结构特点。结果　在贴壁培养条件下 ,髁状突软骨细胞去分化现象于细胞传代第 3代后逐渐显著 ,第 6代后培养的软骨细胞几乎完全去分化。去分化细胞胞体拉长 ,呈“成纤维细胞”样外观。去分化过程中 ,细胞对软骨基质蛋白的表达水平逐渐降低 ,细胞增殖速度增强。透射电镜观察显示 ,去分化软骨细胞细胞核明显呈分叶状 ,表现出异型核。结论　髁突软骨细胞在体外贴壁培养传代过程中会发生去分化现象 ,丧失软骨细胞特征性细胞表型。     

枸杞提取物对小鼠抗疲劳作用的实验研究

目的：观察枸杞提取物的抗疲劳作用,为临床用药提供实验依据。方法：1.以不同浓度的枸杞提取物（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）对小鼠进行灌胃饲养,采用游泳法观察药物的抗疲劳作用;2.进行小鼠的爬杆实验,记录3次跌落时间并相加作为该鼠的总时间,观察小鼠的抗疲劳性;3.称量小鼠的肝脏,间接显示枸杞提取物提高肝糖原的含量从而提高能量的贮备达到抗疲劳的作用。结果：小鼠在30℃的温水浴中负重游泳,实验组小鼠的游泳时间明显长于对照组小鼠;小鼠爬杆实验中,实验组小鼠的爬杆时间明显长于对照组的爬杆时间;并且称量小鼠肝重,实验组与对照组有明显增加;实验结果无明显剂量关系,以中剂量组（10mg/kg）抗疲劳作用更为显著。结论：枸杞提取物具有显著的抗疲劳作用。     

树立正确的社会主义义利观是养成良好职业道德的关键

党的十四六中全会《决议》强调指出：建立和完善社会主义市场经济体制，必须紧密结合改革和发展的实践，加强精神文明建设，"形成把国家和人民利益放在首位而又充分尊重公民个人合法利益的社会主义义利观"。这说明树立正确的社会主义义利观对加强精神文明建设，加强职业道德建设具有重要现实意义。1社会主义义利观是义和利的统一观义利观是人们关于义与利及其相互关系的观点和总体看法，体现和反映人的价值观的基本取向，决定着人们在处理各种利益关系时应遵循的指导原则。在传统的商品经济条件下，义利观基本趋向是"重义轻利"；而资本主义…     

带TRS基序突变的新型冠状病毒威胁更大

目的 研究冠状病毒转录调控序列（TRS）基序突变,为深入研究冠状病毒的爆发、传播规律以及开发减毒活疫苗等提供理论基础。方法 采用进化与分子功能联合分析法,对公开的全部套目病毒基因组数据进行分析。结果 冠状病毒基因组内的前导转录调控序列（TRS-L）通常由其5'端非编码区内的前60~70个核苷酸残基组成,长度不同的基因体转录调控序列（TRS-B）位于除ORF1a和1b外的其它基因紧邻的上游,每个冠状病毒基因组的TRS-L和TRS-B共有一段特定的一致性序列,即TRS基序,TRS基序中出现的碱基变化叫做TRS基序突变。TRS基序突变如果发生在TRS-L或多个TRS-B中,会形成超级减毒株。超级减毒株的扩散,可引起无症或轻症感染者增多,潜伏时间长,以及漏检率上升等问题,对SARS-CoV-2的防控提出新的挑战。超级减毒株还会增大与人类长期共存的概率,将长期威胁人类健康。Delta突变株与此前出现的突变株有显著不同,如果不高度重视,可能引起大规模传播。带TRS基序突变的Delta突变株已经在新加坡出现并有扩散趋势,因此新加坡,甚至东南亚可能形成下一波疫情的传播中心。结论 各种SARS-CoV-2突变株都将产生TRS基序突变,只有带TRS基序突变的超级减毒株,才能最终失去跨物种传播和大爆发的能力。     

颞下颌关节骨关节病动物模型的建立及组织病理学观察

目的 建立稳定的颞下颌关节骨关节病动物模型。方法 通过外科手术切除部分关节盘的方法，在成年兔上建立较为稳定的颞下颌关节骨关节病动物模型；分别于术后第15天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月和6个月将实验兔处死，取实验侧髁突组织进行组织病理学观察；1％甲苯胺蓝染色，观察病变髁突组织中蛋白多糖的分布范围与水平变化。结果 本研究中的颞下颌关节骨关节病模型从组织病理学上先后观察到了关节盘损伤后早期关节软骨的应激性修复增殖，中期软骨基质渐进性损耗，后期软骨基质损耗丧失、纤维组织修复覆盖及骨赘形成等软骨退行性变过程。甲苯胺蓝染色显示，病变早期肥大增厚的软骨组织中蛋白多糖含量降低，且分布不均匀；病变晚期的髁突较深层软骨组织中仍可见有蛋白多糖的合成与分布。结论 本研究所建立的颞下颌关节骨关节病动物模型能较好地模拟骨关节病的组织病理学变化过程，且具有结果稳定、可重复性好的优点。     

兔髁状突软骨细胞藻酸盐凝胶三维培养体系的建立

目的:建立兔髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系.方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔髁状突软骨细胞,在二维贴壁培养条件下增殖至P2代;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质,进行三维培养;分别对培养细胞凝胶微球行石蜡包埋与树脂包埋切片,对三维培养条件下的软骨细胞行组织化学、免疫组织化学检测和超微结构观察.藻酸盐凝胶三维体系培养6周后,以EDTA分解凝胶,收获培养的软骨细胞,免疫组化法检测三维体系中收获的软骨细胞的蛋白合成能力.结果:藻酸盐凝胶三维培养体系中的髁状突软骨细胞生长状态良好;培养6周后从凝胶体系中收获细胞的软骨特异性功能蛋白表达水平较转入三维体系前未见降低,培养细胞保持了良好的分化表型.结论:成功地建立了髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系,在该体系中,软骨细胞生长状态与功能蛋白分泌能力良好.     

颞下颌关节骨关节病髁突组织细胞凋亡的研究

目的研究颞下颌关节骨关节病骸突组织中软骨细胞凋亡发生的特点,探讨细胞凋亡在颞下颌关节骨关节病发病机制中的作用。方法通过手术切除部分关节盘的方法建立颞下颌关节骨关节病动物模型,15 d-6个月内采用TUNEL法标记裸突各相应时段的凋亡细胞,结合相应组织学变化,观察、分析颞下颌关节骨关节病裸突组织中细胞凋亡发生的特点。结果关节盘损伤后软骨产生明显应激性修复增殖反应时,凋亡细胞主要集中于关节表面的纤维层中;随着关节软骨和骨组织不断改建,软骨组织中逐渐出现大量的细胞凋亡现象,主要发生于表面纤维层与增殖层,尤其集中在软骨细胞簇中;在软骨组织消耗严重时,浅表区域内的细胞凋亡现象逐渐减少,肥大钙化层中出现了较多的凋亡细胞。结论颞下颌关节骨关节病骸突软骨组织中存在过量凋亡的现象,软骨细胞异常增殖与过度凋亡导致软骨基质自身调节机制的破坏可能是骨关节病发生的重要原因之一。     

颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞及基质合成代谢特性的研究

目的 探讨颞下颌关节骨关节病(TMJOA)软骨细胞的细胞生物学特性。方法 通过手术切除部分关节盘的方法,制造TMJOA的兔动物模型;从模型动物处于骨关节病病变增殖修复期的髁突软骨组织中获取细胞体外培养,并采用RT-PCR法比较病变软骨细胞与正常对照细胞对软骨基质蛋白、基质胶原酶和内源性生长因子的表达差异。结果 从TMJOA模型的髁突软骨组织中获得细胞经体外培养、鉴定,确认为软骨细胞;骨关节病髁突软骨细胞对软骨基质蛋白的表达不平衡,对内源性基质胶原酶的表达水平和内源性生长因子TGF-β1、IGF-1的表达明显增强。结论 本研究从细胞生物学角度证实了骨关节病早期关节软骨内出现合成代谢活跃的组织学特点,并发现该阶段组织细胞的修复代偿反应可致软骨基质成分合成的不平衡,最终可导致软骨基质环境改变。