荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的价值

搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。收集患者痰标本,每份标本量均不少于2ml。经菌种鉴定,最终纳入531例(株)为研究对象。每例患者采用同一标本进行BACTEC MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称“MGIT 960药敏试验”)和熔解曲线法耐药基因检测,对MGIT 960药敏试验和熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性结果不一致者采用基因芯片法耐药基因检测对熔解曲线法结果进行验证。以MGIT 960药敏试验检测结果为参考标准,熔解曲线法检测肺结核患者痰标本MTB对链霉素耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为86.67% (39/45)、99.38% (483/486)、98.31% (522/531)和0.887;检测肺结核患者痰标本MTB对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为69.23% (54/78)、98.68% (447/453)、94.35% (501/531)和0.751;检测肺结核患者痰标本MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为87.50% (42/48)、96.89% (468/483)、96.05% (510/531)和0.778;检测肺结核患者痰标本MTB对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为50.00% (9/18)、98.83% (507/513)、97.18% (516/531)和0.531。在熔解曲线法检测结果为耐药而MGIT 960药敏试验为敏感的30例患者中,熔解曲线法检测结果显示:对异烟肼耐药的6例均为katG 315位密码子突变;对利福平耐药的15例中,ropB 507-512、ropB 521-528、 ropB 529-533位密码子突变分别为3例、3例、9例;对链霉素耐药的3例均为rrs 513-517位点突变;对乙胺丁醇耐药的6例均为embB 306位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果显示:对异烟肼耐药的6例中katG 315 (AGC→ACC)突变和katG 315 (AGC→AAC)突变各3例;对利福平耐药的15例中,ropB基因511位CTG→CCG突变、526位CAC→TAC突变和531位TCG→TGG突变各3例、3例、9例,与熔解曲线法检测结果一致。可见,荧光PCR探针熔解曲线法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇耐药性突变位点检测具有较好的检测效能,可用于临床上对一线抗结核药品耐药情况的快速筛查。     

基因芯片与线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB耐药性的价值

目的 评价基因芯片技术与线性探针技术(GenoType MTBDRplus)快速检测MTB耐药性的临床应用价值。方法 选取西安市胸科医院2017年4月至2018年8月住院治疗的493例涂阳肺结核患者作为研究对象,收集其痰标本,痰标本量均不少于2ml。每例患者用同一份痰标本分别进行基因芯片检测、线性探针检测和BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960液体培养”),同时对培养阳性且鉴定为MTB的临床分离株进行MGIT 960液体药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,分析基因芯片技术及线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性的效能。结果 454例研究对象同时具有3种药敏试验检测结果。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,基因芯片法和线性探针法检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.0%(65/73)、96.1%(366/381)、0.82和90.4%(66/73)、96.1%(366/381)、0.83;检测涂阳肺结核患者痰标本MTB异烟肼耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为80.2%(93/116)、96.7%(327/338)、0.80和81.9%(95/116)、97.0%(328/338)、0.82。454例涂阳肺结核患者痰标本中,453例应用2种分子生物学检测方法检测MTB利福平耐药性结果相同,符合率为99.8%;445例应用2种分子生物学方法检测MTB异烟肼耐药性结果相同,符合率为98.0%。结论 基因芯片技术和线性探针技术(GenoType MTBDRplus)检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性与MGIT 960液体药敏试验具有较高的一致性,二者均可为临床提供快速、特异的耐药检测结果。     

应用CT与RI确定原发灶体积的局限性

立体定向放射治疗由于其肿瘤组织得到大剂量的破坏性照射而周边重要脏器得到严格保护的 剂量学特点而应用于临床,特别适用于外照射后肿瘤未控或局部复发患者.由于现代影像学 设备的局限性,无法精确提供肿瘤与正常组织分界(脑组织肿瘤尚可),放射治疗医生在确 定大体肿瘤体积(GTV)过程中常常感到非常棘手;靶区定义的不确定性,有时甚至是毫米 间的差异而导致治疗的失败(有并发症的治疗或无并发症的复发).笔者旨在通过2个组医 生确定的GTV之间的差异,说明现有影像学设备的局限性及严格掌握立体定向放射治疗适应证的重要性.     

新型国产改良Middlebrook液体培养试剂对结核分枝杆菌培养效果的评价

目的: 评价新型国产改良Middlebrook液体培养试剂用于临床样本中结核分枝杆菌培养的效果。方法: 采集2021年3—4月西安市胸科医院诊治的疑似肺结核患者痰液和肺泡灌洗液标本,对其中质量合格的89份痰液标本和61份肺泡灌洗液标本进行分枝杆菌改良试剂培养(改良试剂法)和BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养。比较两种方法检测分枝杆菌的阳性率、报阳时间和污染率差异,并以MGIT 960培养结果为参照标准,评价改良试剂法的检测效能。结果: 改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总阳性率[44.7%(67/150)]和报阳时间[中位数(四分位数):13.0(8.5,17.0)d]与MGIT 960培养结果[分别为42.7%(63/150)和13.0(8.0,17.5)d]相比,差异均无统计学意义(χ²=0.571,P=0.453;Z=-1.344,P=0.179)。两种方法检测肺泡灌洗液标本均未出现污染,但改良试剂法检测痰液标本的污染率[12.4%(11/89)]明显高于MGIT 960培养[4.5%(4/89)],差异有统计学意义(χ²=4.000,P=0.039)。 改良培养试剂的成本[(49.6±10.5)元/份]仅约为MGIT 960培养试剂[(75.4±15.8)元/份]的60%。以MGIT 960培养结果为参照标准,改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总敏感度为96.9%(62/64)、总特异度为94.2%(81/86),Kappa值为0.905,一致性好。结论: 分枝杆菌改良Middlebrook液体培养试剂检测痰液和肺泡灌洗液标本与MGIT 960培养诊断结核病的一致性好,但应注意痰液标本检测污染率较高的问题。     

微孔板法在一线抗结核药物敏感性试验中的应用价值

目的 分析微孔板法在一线抗结核药物药物敏感性试验(简称“药敏试验”)中的应用价值。方法 收集2019年1—6月西安市胸科医院经BACTEC MGIT 960液体培养(简称MGIT 960法)培养阳性的1086份标本,选择其中经菌种鉴定为结核分枝杆菌且同时对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇行MGIT 960 法和微孔板法药敏试验的331份菌液,分析两种试验方法的检测情况;并以MGIT 960法为标准,评估微孔板法药敏试验的检测效能,对结果不一致的菌液以熔解曲线法检测耐药基因予以核实。结果 以MGIT 960法为标准,微孔板法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇等4种药品的敏感度、特异度、Kappa值分别为88.7%(63/71)、100.0%(260/260)、0.93,93.9%(77/82)、98.8%(246/249)、0.94,93.8%(45/48)、99.6%(282/283)、0.95,66.7%(14/21)、99.0%(307/310)、0.72。微孔板法与MGIT 960法检测4种药品耐药性结果不一致者分别为链霉素10份、异烟肼8份、利福平6份、乙胺丁醇16份。经熔解曲线耐药基因分析后,结果显示微孔板法为中敏、MGIT 960法为耐药者10份(3.0%,10/331),耐药基因检测结果均为突变,分别为链霉素2份、利福平2份、乙胺丁醇6份;而微孔板法为中敏、MGIT 960法为敏感仅乙胺丁醇1份(0.3%,1/331),耐药基因检测结果为突变;微孔板法为敏感、MGIT 960法为耐药者23份(6.9%,23/331),耐药基因检测结果为野生型10份(分别为链霉素6份、异烟肼4份)、突变型13份(分别为链霉素2份、异烟肼1份、利福平3份、乙胺丁醇7份);微孔板法为耐药、MGIT 960法为敏感者6份(1.8%,6/331),耐药基因检测结果为野生型3份(分别为异烟肼、利福平、乙胺丁醇各1份)、突变型3份(分别为异烟肼2份、乙胺丁醇1份)。结论 微孔板法对一线抗结核药物的耐药性检测操作简便,与MGIT 960法一致性高,且可检测出低浓度耐药情况,可作为临床选择药物及使用剂量时的参考。     

高低氧放疗对小鼠肿瘤及正常组织的效应初探

目的探讨高低氧放疗时间标准的确立及单次照射肿瘤组织和正常组织的效应。材料与方法实验肿瘤为Ｔ７３９纯系小鼠ＬＡ７９５自发性肺腺癌，以生长延缓为观察指标，正常组织用评分法对昆明鼠右后肢的皮肤反应程度作观察指标。实验分为单纯空气组、单纯高氧（碳合氧，９５％Ｏ２＋５％ＣＯ２）组、高低氧组（低氧气体为１０％Ｏ２＋８５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）。结果（１）在吸入５分钟高氧后立即改吸低氧，同时照射，直至照射结束后停止吸气，肿瘤效应无明显下降，证明其为高低氧照射的时间标准。（２）单次照射肿瘤效应高低氧组与单纯高氧组接近，增敏比（ＳＥＲ）为１．７９和１．８０。（３）单次照射皮肤反应高低氧组明显低于单纯高氧组，其ＳＥＲ分别为１．３０及２．２０。（４）对皮肤反应来说，高低氧照射的治疗获得系数（ＴＧＦ）为１．３８，而单纯高氧组为０．８２。结论高低氧放疗可明显提高肿瘤组织效应，而对正常组织的损伤较低，可显著提高ＴＧＦ。     

噬菌体法检测住院肺结核患者中的结核分枝杆菌的临床应用研究

目的:评价噬菌体法检测结核分枝杆菌在住院肺结核患者中临床应用研究,评价结核病患者临床治疗疗效。方法:采用噬菌体法和涂片法对269例住院治疗的肺结核患者每份痰标本同时检测结核杆菌。结果:269例结核住院患者采用噬菌体法检测结核分枝杆菌阳性57例,阴性212例;涂片法阳性60例,阴性209例。结论:噬菌体法可检测活的结核分枝杆菌,可评价临床治疗疗效,能弥补涂片法不能区分死菌活菌的不足,具有很好的临床应用价值。     

三种实验方法检测胸腔积液对结核性胸膜炎的诊断价值分析

目的 探讨GeneXpert MTB/RIF实验、结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)以及结核分枝杆菌液体培养在结核性胸膜炎诊断中的价值。方法 选取临床已经确诊结核性胸膜炎的患者142例和非结核性胸膜炎患者51例,对其胸腔积液样本分别进行GeneXpert MTB/RIF检测、T-SPOT.TB以及结核分枝杆菌培养,分析比较三种方法并联和串联对结核性胸膜炎的诊断价值。结果 结核性胸膜炎患者T-SPOT.TB的阳性率显著高于其他两种方法。GeneXpert MTB/RIF检测、T-SPOT.TB以及结核分枝杆菌培养的敏感度分别为16.9%,81.0%和24.6%,特异度分别为98.0%,33.3%和86.3%,其中T-SPOT.TB试验的敏感度最高,特异度最小。三种方法串联后形成的四种不同方案的敏感度均低于19%,特异度均高于90%。三种方法并联后形成的四种不同方案的敏感度存在差异,其中GeneXpert MTB/RIF检测与结核培养试验并联方案的敏感度为29.6%,显著低于其他三种方案,其特异度为86.3%,显著高于其他三种方案。结论 在结核性胸膜炎诊断中,T-SPOT.TB试验具有较高的敏感度,而GeneXpert MTB/RIF检测以及结核分枝杆菌培养具有较高的特异度; 三者不同串联方案均具有很高的特异度; 并联方案中,GeneXpert MTB/RIF检测与结核培养试验并联的诊断特异度最高,对通过胸腔积液诊断结核性胸膜炎提供重要参考价值。     

常用实验室技术诊断结核性脑膜炎效能的比较研究

目的 对常用实验室技术诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的效能进行比较研究,以提高临床早期诊断TBM的水平。方法 采用BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)、改良抗酸染色(简称“MZN法”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)、荧光探针法聚合酶链式反应(简称“PCR-荧光探针法”)和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)等5种实验室检测技术对西安市胸科医院2017年1月至2018年4月期间收治的244例成年疑似结核性脑膜炎患者脑脊液进行检测。包括71例TBM组患者(确诊组36例,很有可能组23例,可能组12例)及33例非TBM组患者。评价上述5种实验室技术诊断TBM的效能,并探讨细菌学方法组(MGIT 960和MZN法)、分子生物学方法组(GeneXpert和PCR-荧光探针法)、免疫学方法组(T-SPOT.TB),以及上述5种技术联合诊断组(简称“联合诊断组”)在TBM早期诊断中的价值,并比较5种实验室技术之间、4种方法组之间诊断TBM敏感度的差异。结果 以临床诊断为标准,5种检测技术诊断TBM的特异度和阳性预测值均为100.0%;MGIT 960法、MZN法、GeneXpert 法、PCR-荧光探针法和T-SPOT.TB检测技术诊断TBM的敏感度分别为19.7%(14/71)、26.8%(19/71)、42.3%(30/71)、35.2%(25/71)、29.6%(21/71);GeneXpert法和PCR-荧光探针法的敏感度均高于MGIT 960法,差异均有统计学意义(χ ²=8.43,P=0.004;χ ²=4.28,P=0.039)。细菌学方法组、分子生物学方法组、免疫学方法组及联合诊断组的敏感度分别为31.0%(22/71)、50.7%(36/71)、29.6%(21/71)、73.2%(52/71);分子生物学方法组和联合诊断组的敏感度高于细菌学方法组,差异均有统计学意义(χ ²=5.71,P=0.017;χ ²=73.20,P=0.000)。 结论 在TBM的早期诊断中,GeneXpert法与PCR-荧光探针法的敏感度高于MGIT 960法;各实验方法联合检测有助于提高诊断TBM的敏感度,并且与细菌学方法组相比,分子生物学方法组以及联合诊断组的敏感度更高。     

原发性气管癌6例

我院自1978年11月至1990年4月共行气管镜检查5069例中,确诊为原发性气管癌6例。 本组男性2例。女性4例。年龄32～67岁,40岁以上5例,占83％。病史1月～12个月,平均5个月。 主要临床症状 咳嗽、血痰、咯血、气短、呼吸困难及发烧等。 X线检查 常规胸片检查,4例阴性、2例见到气管内肿物。1例胸片阴性但气管断层片见到气管内肿物、1例胸片及断层片均见到肿物、1例胸片阴性但CT显示气管内有肿物。