利用 RNAi阻抑 hTERT 和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究

目的：利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶（hTERT）和Bax inhibitor‐1（Bi‐1）基因设计并构建的质粒载体转染至CNE‐2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT 和Bi‐1基因表达的效果。方法收集CNE‐2Z细胞,设未处理组、pEGFP‐N1组、pEGFP‐N1／Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE‐2Z细胞的转染能力,RT‐PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi‐1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE‐2Z细胞的质粒和Lip最佳组合：质粒为2．5μg ,Lip为6．25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi‐1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi‐1基因的表达。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖诱导的AD模型小鼠Aβ生成作用的研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠β淀粉样肽(Amyloid-βpeptide,Aβ)生成作用的影响。方法:将60只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、VE阳性组、EGCG低剂量组、EGCG中剂量组、EGCG高剂量组,每组10只。注射D-半乳糖建立AD小鼠模型后,对照组和模型组灌胃等量双蒸水;VE阳性组每天灌胃5.6%VE 1次;EGCG低、中、高剂量组分别按每天2 mg/kg灌胃0.04%EGCG、4 mg/kg灌胃0.08%EGCG和6 mg/kg灌胃0.12%EGCG 1次;持续给药28天后通过避暗试验和Morris水迷宫试验观察小鼠动物行为学变化;ELISA法检测小鼠脑匀浆中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和Aβ水平;苏木精-伊红(HE)染色观察海马内神经元的变化。结果:EGCG能明显延长AD模型小鼠跳台潜伏期、减少跳台错误次数、缩短通过迷宫的时间和减少进入盲端的错误次数;且能显著减轻D-半乳糖诱导的AD模型小鼠海马神经元的损伤及降低其脑内IL-6、TNF-α和Aβ表达水平,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:EGCG可能通过降低D-半乳糖诱导的AD模型小鼠脑内Aβ的含量,来抑制神经细胞凋亡,从而改善学习记忆障碍。     

强生干化学分析仪开放通道检测血清淀粉样蛋白A的性能验证

目的 强生干化学分析仪开放通道搭载国产普瑞柏血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)试剂盒的分析性能验证。方法 根据美国临床和实验室标准化协会(NCCLS)的检测仪器评价标准,并参照卫生部关于分析仪器的性能验证指南,对Vitros 5.1 FS检测SAA的精密度、准确度、线性范围、最大稀释度和生物参考区间进行验证。结果 2个水平SAA批内及总精密度分别为S_批内低=0.3,S_总低=0.45和S_批内高=0.6,S_总高=1.01,均小于厂家声明的精密度。比对实验决定系数r²=0.991 2,线性方程Y=0.962 9X+0.204 6,其线性范围可以验证至5.99～92.59 mg/L,最大稀释倍数可验证至10倍。23例健康个体中95.7%的个体SAA检测值处于厂家声明的参考区间之内。结论 Vitros 5.1 FS搭载该SAA试剂盒的分析性能验证通过,该检测系统可以用于临床常规标本检测。     

HE4和CA125联合检测在卵巢癌诊断及预后评估中的价值研究

目的:探讨人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)与CA125联合检测在卵巢癌的鉴别诊断以及预后评估中的研究价值。方法:189例女性分为卵巢癌患者50例(卵巢癌组),盆腔良性疾病患者99例(良性疾病组),健康女性40例(健康组),计算卵巢恶性肿瘤风险模型值(ROMA),比较3组HE4、CA125水平,比较HE4、CA125、ROMA 3种指标的灵敏度、特异性及比较15例卵巢癌患者术前术后的HE4、CA125的水平。结果:卵巢癌病变组的HE4与CA125水平明显高于良性病变组和健康对照组(P<0.05);良性疾病组与健康对照组之间CA125水平差异有统计学意义(P<0.05),HE4水平差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌组术前术后CA125与HE4水平差异有统计学意义(P<0.05)。HE4、CA125和ROMA诊断卵巢癌的特异性分别为86.90%、87.90%、90.90%;阳性似然比分别为8.10、4.54、10.33;诊断符合率分别为53.69%、83.89%、87.25%。结论:单项HE4对于卵巢癌的早期诊断以及与盆腔良性疾病的鉴别诊断优于CA125,且术后评估价值高于CA125,HE4与CA125联合检测ROMA值可提高对卵巢癌诊断符合率。     

缺失型α-地中海贫血基因携带者红细胞参数特征研究

目的：探讨缺失型α-地中海贫血基因携带者红细胞参数变化特点。方法经 gap-PCR 技术确定的389例缺失型α-地中海贫血基因携带者分为3组：（1）静止型：-α/αα型;（2）标准型：--SEA/αα型;（3）中间型或 HbH 型：-α/--SEA 型。选取同期188名健康体检者（男性97名、女性91名）做为对照组（NC 组）。采用方差分析及多重比较研究各组红细胞参数,包括RBC、Hb、MCV、MCH 和 RDW 等变化特点。结果缺失型α-地贫表现为不同程度的小红细胞低色素症;各基因型和表现型红细胞参数间差异均有统计学意义（P ＜0．05）,且 Hb、MCV、MCH 值低于对照组,并随着ɑ珠蛋白基因缺陷数目的增加,有减小的趋势;而 RDW 值高于对照组,有增大的趋势,差异有统计学意义（P ＜0．05）。389例缺失型α-地贫基因携带者中,其中静止型占19．55％,标准型占68．12％,中间型占12．33％。结论随着ɑ珠蛋白基因缺陷数目增加,小细胞低色素特征越来越显著;RBC 总体增高,Hb、MCV 和 MCH 呈下降趋势,红细胞体积大小异质性增加。MCV、MCH 降低时应高度疑似地贫,但 MCV、MCH 正常时不能除外静止型、标准型地贫。     

循环增强荧光分析仪及配套降钙素原定量检测试剂盒的分析性能评价

目的:对一款新近研发的循环增强荧光分析仪及配套降钙素原(PCT)试剂盒进行系统性的性能评价,并对新版美国临床实验室标准协会(CLSI)文件的适用性进行验证。方法:依据目前最新版CLSI文件(EP5-A3、C28-A3和EP9-A3),对国产的循环增强荧光分析仪及配套PCT定量检测试剂盒与进口Roche公司COBASe411电化学发光免疫分析仪及其配套PCT试剂分别检测人血标本中的PCT含量进行对比评价,验证循环增强荧光分析仪及配套PCT试剂盒的低值血清质控品批内变异系数(CV)、检测偏差、整体符合率以及批间偏差等分析性能。结果:循环增强荧光分析仪低值血清质控品批内CV为6.5%,实验室内总CV为8.7%,高值血清质控品批内CV为5.3%,实验室内总CV为8.0%;血清临床可报告范围为0.032~827 ng/ml;健康人群血清PCT第95百分位为0.047 ng/ml,全血PCT第95百分位为0.066 ng/ml;血红蛋白(500 mg/dl)、胆红素(10 mg/ml)和甘油三酯(500 mg/dl)对血清检测结果的偏差均<15%;检测全血、血浆及血清PCT与Roche检测血浆PCT整体符合率分别为91.1%、95.5%及93.3%;3个批号的循环增强荧光分析仪试剂批间偏差均<15%。结论:循环增强荧光分析仪检测系统的各项分析性能良好,可用于医学实验室进行常规PCT标本检测。     

SAA、CRP、WBC、NEUT％检测在肺炎诊断中的价值

目的探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(NEUT%)检测在细菌性与病毒性肺炎诊断中的价值。方法将该院176例肺炎确诊患者纳入研究,其中细菌性肺炎患者67例(细菌组),病毒性肺炎患者109例(病毒组);另外,选取90例健康体检者作为对照组。检测上述人群SAA、CRP、WBC、NEUT%水平;对各组检测数据进行分析。结果细菌组与对照组SAA、CRP、SAA/CRP、WBC及NEUT%水平比较差异均有统计学意义(P0.05);病毒组与对照组SAA、CRP、SAA/CRP水平比较差异均有统计学意义(P0.05);细菌组和病毒组WBC、SAA、CRP、SAA/CRP比较差异有统计学意义(P0.05)。5项指标单独用于细菌性肺炎诊断的受试者工作特征(ROC)曲线显示,曲线下面积(AUC)由大到小依次为SAA、CRP、WBC、NEUT%、SAA/CRP;进一步采用logistic回归分析:SAA、CRP的偏回归系数最大,表明SAA、CRP对细菌性肺炎的诊断效能较大;5项指标联合检测的AUC为0.999。各项指标单独用于病毒性肺炎诊断的ROC曲线显示,AUC由大到小依次为SAA、SAA/CRP、CRP、NEUT%、WBC;进一步采用logistic回归分析:SAA的偏回归系数最大,表明SAA对病毒性肺炎感染的诊断效能最大,5项指标联合检测的AUC为0.983。SAA/CRP比值用于鉴别细菌性与病毒性肺炎的ROC AUC为0.821,诊断阈值为6.8。结论 SAA、CRP可作为细菌性肺炎诊断的良好指标,SAA可作为病毒性肺炎诊断的良好指标;SAA/CRP比值可用于鉴别细菌性和病毒性肺炎。     

猫爪草多糖的理化性质及其对ANA-1细胞的免疫调节作用

目的探讨猫爪草多糖(PRT)对半贴壁巨噬细胞株ANA-1细胞免疫功能的影响。方法采用水提醇沉法提取和分离PRT;红外光谱法测定PRT分子结构;MTT法检测ANA-1细胞增殖能力;不同浓度的猫爪草多糖作用于脂多糖(LPS)诱导的ANA-1细胞,采用Griess法检测一氧化氮(NO)生成量;一氧化氮合酶(i NOS)测定试剂盒检测活性;RT-PCR法检测i NOS、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)m RNA水平的表达。结果得到灰白色粉末状猫爪草多糖,多糖含量98.17%;红外光谱显示PRT的糖苷键为α-构型,具有吡喃型糖环;PRT增强ANA-1细胞增殖能力,上调IL-6和TNF-αm RNA的表达,且浓度为200μg/m L时作用最强;PRT呈浓度依赖性抑制LPS诱导的ANA-1细胞分泌NO和i NOS活性,当多糖浓度为100μg/m L时,能够完全抑制i NOS m RNA的表达。结论 PRT能够增强ANA-1细胞增殖能力,上调IL-6和TNF-αm RNA水平的表达,抑制LPS诱导的ANA-1细胞分泌NO和i NOS的表达。     

3种肿瘤标志物检测在乳腺癌术后随访中的价值

目的探讨乳腺癌术后随访中糖链抗原(CA)153、CA125及癌胚抗原(CEA)的价值。方法选取2013年8月至2014年8月该院收治的98例乳腺癌复发转移患者,107例乳腺癌未复发转移患者作为研究对象,分别检测其血清CA153、CA125及CEA,并进行统计学分析。结果复发转移组CA153、CA125及CEA水平均明显高于未复发转移组,差异有统计学意义(P0.01)。CA153曲线下面积(AUC)大于CA125和CEA,当cut off值为21.79ng/mL时,Youden指数最大,敏感度为80.8%,特异性为91.6%。logistic回归分析表明,CA153对乳腺癌复发转移有较高的预测效能。结论 CA153、CA125及CEA可为临床早期、准确诊断乳腺癌复发转移提供参考依据,且CA153的诊断价值优于CA125及CEA。