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酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:应用酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白质,通过对相互作用蛋白质的筛选及研究,探讨CLN8的功能,为NCL8和NCLs疾病群的发病机制研究提供线索,并为疾病的蛋白质相互作用网络提供资料。方法 应用酵母双杂交技术,以pLexA-CLN8为诱饵质粒筛选人胎脑cDNA文库,得到Leu+LacZ+阳性克隆,进一步进行验证,并对验证后的阳性克隆的外源性片断进行测序及同源性分析。结果 从人胎脑cDNA文库中筛选得到60个Leu+LacZ+阳性克隆;将获得的具有外源性片段的文库质粒与诱饵质粒一对一重新转入酵母体内对相互作用进行验证,共获得阳性克隆22个;对验证后阳性克隆测序并进行同源性分析,共获得不同的候选基因序列10个。结论 应用酵母双杂交系统,共筛选得到10个不同的基因,其编码蛋白与CLN8P有相互作用,可能与NCLs 发病机制相关。 相似文献
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目的:探讨槲皮素对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖抑制和凋亡的影响,为卵巢癌临床治疗提供依据。方法:不同浓度槲皮素处理卵巢癌SKOV-3细胞后,采用MTT实验检测细胞增殖抑制作用并计算抑制率,细胞免疫化学染色法鉴定细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果:槲皮素能够抑制SKOV-3细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,免疫荧光显示槲皮素对SKOV-3细胞具有诱导凋亡作用,流式细胞术显示SKOV-3细胞被阻滞在S期, G2/M期细胞比例降低,凋亡率上升。结论:槲皮素在体外能够抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,阻止细胞由S期向G2期移行,促进其凋亡。 相似文献
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目的构建FXR2酵母双杂交系统的“饵”质粒,并转化酵母菌,为筛选FXR2P互作蛋白作基础。方法提取pMD18-T—FXR2,酶切后将FXR2基因连接到MATCHMAKER LexA Two—Hybrid System中的plexA质粒上,得到“诱饵”(Bait)-plexA—FXR2,导入大肠杆菌扩增,筛选阳性克隆并提取重组Bait质粒,再转入酵母菌EGY48(p8op—lacZ)。结果通过遗传学方法筛选得到构建成功的plexA—FXR2;通过营养缺陷筛选,证明Bait重组质粒转入酵母菌中。结论成功构建Bait质粒并使酵母菌转化。 相似文献
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目的验证CLN8P与线粒体NADH脱氢酶亚基1(NADH dehydrogenase subunit1,ND1)蛋白质相互作用。方法将用酵母双杂交技术筛选出的阳性克隆提取质粒后测序,与CLN8基因表达载体重新共转入酵母细胞,用β-半乳糖苷酶滤膜分析检测,通过滤膜上菌落颜色的改变来确认是否有相互作用。结果滤膜上菌落印迹变蓝色,CLN8P与ND1有相互作用。结论本试验将筛选得到的阳性克隆质粒:ND1与CLN8P一对一重新转入酵母细胞,进一步确认了其相互作用,为下一步的CLN8功能研究奠定基础。 相似文献
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摘要:目的:探讨食管癌相关基因2(esophageal cancer-related gene 2,ECRG2)蛋白联合顺铂(cisplatin, DDP)化疗对人食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法分别检测单用ECRG2蛋白和ECRG2蛋白联合顺铂对EC9706细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法检测二者对EC9706细胞凋亡的影响;Western blotting检测二者对EC9706细胞中p53蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示,ECRG2蛋白可抑制EC9706细胞增殖,ECRG2蛋白和DDP联用后抑制细胞增殖作用增强,且在一定浓度范围内呈时间、剂量依赖关系。Hoechst 33258染色显示,ECRG2蛋白和DDP联合作用24 h后EC9706细胞凋亡数目多于单用ECRG2蛋白。Western blotting结果提示ECRG2蛋白和DDP联合用药较单用ECRG2蛋白明显上调p53蛋白的表达。结论: DDP 可增强ECRG2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,其增强诱导EC9706细胞凋亡的机制可能与上调p53蛋白的表达有关。 相似文献