四川地区供血浆人群经血传播病毒残余风险评估

目的收集本公司所属四川省内供血浆人群流行病学数据,评估传播HBV,HCV,HIV的残余风险。方法用ELISA对2013年1月-2013年12月本公司所属四川省内单采血浆公司467388人份血浆标本进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV筛查,对筛查HBsAg阳性标本采用中和试验法确证,对筛查抗-HCV及抗-HIV阳性标本采用免疫印迹法确证。采用发病率-窗口期模型计算供血浆者HBV,HCV,HIV残余风险。结果首次供血浆者人群中HBV,HCV,HIV的感染率分别为1.890%,0.280%,0.037%,重复供血浆者人群HBV,HCV,HIV感染率分别为0.028%,0.008%,0.008%。调查的重复供血浆人群HBV,HCV,HIV的残余风险分别为1∶20097,1∶65876,1∶197628。结论调查的供血浆人群HBV,HCV和HIV的感染率及残余风险均在1个较低的、可接受的水平,重复供血浆人群的安全性明显高于首次供血浆人群。     

中国人细小病毒B19系统发育关系研究

目的探讨在中国分布的人细小病毒B19的系统发育。方法对B19病毒阳性的23份来自中国献血者和5份B19/HIV共感染者标本,采用病毒基因组NS1-VP1-u区测序后,与Genbank下载的参考序列比对,用软件MRBAYES 3.1.2作贝叶斯推断,用在线软件RaxML作最大似然法运算,绘制进化树并分析。结果 28份来自中国的标本均属于B19-1A亚型,且呈现复系,其中来自新疆乌鲁木齐来自四川的各1例标本与非中国序列聚在一起,其他中国26份标本与来自美国的病毒株Au聚在一枝并有着很好的支持率,来自西安的2条参考序列出现在B19-1A亚型的基部。结论中国的B19病毒是多起源的,其在中国中西部地区进化速率较慢;应该积极开展不同地区B19病毒多样性的研究。     

美国FDA HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引主要推荐及其启示

正病毒核酸检测(nucleic acid test,NAT)技术应用在血液筛查中是输血安全技术的巨大进步。为了规范血液病毒NAT操作、血液和献血者管理,美国FDA于2010年5月发布了《HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引》(简称2010年版指引)[1],其时正恰逢我国着手开展血液病毒NAT的试点工作,我们认识到该文对我国血液病毒NAT技术规范化操作和管理具有重要的参考借鉴价     

中国献血人群感染乙型肝炎病毒PreC/BCP区的新变异

目的 了解中国献血人群感染乙型肝炎病毒(HBV)基因组的PreC/BCP区变异特征.方法 从参加REDS-Ⅱ中国项目的5家血液中心(或中心血站)收集的HBsAg阳性标本中选取245份,提取HBV DNA,根据HBVDNA PreC/BCP区保守序列设计引物,采用巢式PCR法扩增HBV DNA的PreC/BCP区,双向测序后用Clustal X软件将其序列与标准株序列比对,分析其变异特征,用SPSS 11.0统计软件分析其变异与献血者人口地理特征和血清学特征的关系.结果 245份献血者标本中有228份成功扩增了HBV PreC/BCP区,其中16例(7.02％)发现了1825～1 826位核苷酸之间的片段缺失或插入,突变标本中仅1例HBeAg阳性,其余均为阴性,突变标本的病毒载量明显高于未突变标本.结论 在中国献血人群中发现感染HBVPreC/BCP区的1种新交异,它可能与抑制HBeAg的表达和促进病毒复制有关.     

无偿献血者HIV初筛检测策略探讨

目的探讨无偿献血人群HIV初筛检测策略,为采供血单位制定合理的HIV筛查方案提供试验数据支持,以供参考。方法收集2011年2月~2013年5月合肥市无偿献血者的血液标本214 807份。每份血液标本分别用1种进口试剂(伯乐)和1种国产试剂新创/万泰)同时进行EIA检测,对至少1种试剂呈反应性的标本用WB(蛋白免疫印迹)法进行确认检测。并对所搜集到的214 807份标本检测结果进行ROC分析。结果 1)EIA检测结果:用EIA法检测标本214 807份,其中119 127份标本用伯乐和新创试剂联合检测,95 680份标本用伯乐和万泰联合检测;2种试剂检测的S/CO值都在0~0.5组段的标本有214 436例,直接判为真阴性;呈反应性标本共371例,其中伯乐试剂和新创试剂检测均呈反应性的有24例,伯乐试剂和万泰试剂检测均呈反应性的有18例;伯乐、新创和万泰试剂检测单独呈反应性的分别是232、66、31例,反应率分别为0.11%、0.06%、0.03%。2)WB检测结果:371例初筛呈反应性标本,经WB确证检测,阳性28例,不确定32例,阴性311例;初筛检测S/CO值在0.5~1.0组段的所有标本,经WB检测,没有阳性结果。伯乐、新创、万泰试剂检测呈反应性的标本中,经WB检测后真阳性率分别为10.22%、17.78%、24.49%。3)全部标本检测资料的ROC分析:对3种试剂检测结果分别进行ROC分析,3种试剂的ROC之AUC均大至极限状态,近似为1.000;3种检测结果经z检验,两两比较的P>0.05,无统计学显著性差异;当S/CO值为1.0时,3种试剂的灵敏度近似为1.000;特异度在0.999~1.000。4)伯乐试剂初筛呈反应性标本资料的仿ROC分析:ROC-AUC为0.907,S/CO值在3.8以上并靠近6.0时的灵敏度较高,特异度为0.75以上。结论伯乐、新创和万泰试剂检测标本的反应率差异无统计学意义;进行初筛检测时,使用3种试剂任意之一进行检测即可,反应性判断阈值以1.0起为好;伯乐试剂检测的S/CO值高于6.0的标本,可以考虑判为阳性标本,无需做重复检测。     

血小板lncRNA在肺腺癌早期筛查中的生物标志物初步研究

目的 探究血小板长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)早期筛查中作为生物标志物的诊断价值。方法 对包含LUAD患者和健康对照者血小板RNA数据的GSE183635和GSE89843数据集做差异分析,将两数据集的差异表达lncRNA(differentially expressed lncRNA,DElncRNA)取交集。通过GEPIA2分析DElncRNA在LUAD组织与正常对照组织中的表达水平。用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测LINC01088在51名健康对照者血小板和54名LUAD患者血小板中的表达水平,并通过受试者工作(receiver operator characteristic, ROC)曲线评价诊断能力。结果 GSE183635数据集差异分析得到8个DElncRNAs, GSE89843数据集差异分析得到1 265个DElncRNAs,取交集后获得关键DElncRNA LINC01088。GEPIA2分析显示,LI...     

HEV感染血小板模型的建立及其机制的初步研究

目的研究戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是否感染血小板并进一步在其内复制,以及血小板与HEV的相互作用情况。方法将纯化的血小板与病毒共培养1 h后在PBS中洗涤2次,22℃下继续震荡培养5 d,每天观察病毒的复制情况。使用荧光定量PCR方法检测HEV核酸浓度的变化;免疫荧光染色观察HEV是否感染血小板;流式细胞术分析HEV是否促进血小板活化。结果随着HEV感染量的增加,血小板感染病毒量逐渐增加并趋于平稳,并且感染率最高约为1.22%,免疫荧光结果可同时观察到HEV结合或进入血小板;培养上清中的病毒浓度与d0相比,d4、d5有明显的增长(P0.01),且沉淀中的病毒浓度在d2有明显的增加(P0.01);HEV导致CD62P,CD41双阳性血小板比例增加约8%(P0.01)。结论 HEV在体外实验中可以感染血小板并促进血小板活化,HEV在血小板内的复制特征需进一步研究验证。     

巴贝西虫实时荧光PCR检测方法初步建立及牡丹江市无偿献血者中巴贝西虫流行情况调查

目的建立一种筛查多种可感染人巴贝西虫(包括Babesia.microti,B.divergens,B.venatorum,Babesia.sp EU1,Babesia_sp._XXB/Hangzhou等)的实时荧光PCR检测方法;用实时荧光PCR和间接免疫荧光检测(IFA)2种方法分别对牡丹江市无偿献血者血样进行核酸和血清学检测,评估其对当地输血安全的风险。方法从Gen Bank下载我国可感染人巴贝西虫的18S r RNA基因序列,并根据序列共同部分设计引物,用引物验标准质粒并优化实验条件,建立实时荧光PCR检测方法。将1 971份无偿献血者的血液标本离心,使其分离成红细胞和血浆2个部分:1971份红细胞标本混样(10份/pool),用已建立的实时荧光PCR进行核酸检测,阳性混样池再拆分检测;其中1 000份血浆标本用IFA法进行B.microti Ig G检测。结果经琼脂糖凝胶电泳和一代测序验证,标准质粒构建成功且实验条件已经优化,成功建立了实时荧光PCR检测方法,重复性良好,最低检测下限为9.69×102copies/m L;1 971份红细胞样本巴贝西虫核酸检测结果均为阴性;1 000份血浆样本B.microti Ig G血清学检测结果显示共13例阳性(阳性率1.3%),其中8例(0.8%)滴度为1∶64,5例(0.5%)滴度为1∶128。结论本研究成功建立了一种筛查多种感染人巴贝西虫的实时荧光PCR核酸检测方法;标本检测结果显示牡丹江地区有既往B.microti感染,提示巴贝西虫已经对该地区血液安全造成一定威胁,但风险大小有待进一步评估。     

人胚胎早期心脏流出道的发育

目的探讨人胚早期心脏流出道的发育机制。方法29例C10~C16期[Carnegie分期法,受精后(22±1~37)d]人胚心脏连续切片,经抗α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗α横纹肌肌动蛋白(α-SCA)、抗肌球蛋白重链(MHC)和抗活性Caspase-3抗体免疫组织化学染色,探讨心包腔背侧脏壁中胚层上皮、咽前间充质及动脉囊与心肌性流出道发生的关系。结果人胚发育C10~C15期,由于流出道由颈部向胸部移位及心包腔向胚胎背侧扩展,动脉囊逐渐突向心包腔内,其表面的心包腔背侧脏壁中胚层上皮不断分化为α-SCA和MHC阳性流出道心肌细胞。迁移至流出道动脉端前后壁的咽前间充质在C15期发生凋亡,流出道心肌细胞迁入间充质细胞团内取代凋亡的间充质细胞。C12期始,α-SMA阳性细胞在流出道心内膜垫聚集,参与形成螺旋状流出道嵴。C15~C16期,动脉囊后壁的α-SMA阳性细胞增生,形成主肺动脉隔,将动脉囊分隔为心包内升主动脉和肺动脉干。结论心包腔背侧脏壁中胚层是人胚心脏第二生心区,可不断分化为心肌细胞,使胚胎心肌性流出道长度增加。细胞凋亡染色提示,并非所有迁入流出道的咽前间充质细胞都可分化为心肌细胞。流出道嵴和主肺动脉隔的α-SMA阳性细胞可能来自神经嵴,经不同路线迁移至流出道嵴和主肺动脉隔。     

结核杆菌Rv0901基因真核表达质粒的构建及在细胞内的表达与鉴定

目的构建结核杆菌Rv0901基因的真核表达质粒并进行表达,为研究Rv0901基因的功能提供材料。方法以结核杆菌基因组DNA为模板PCR扩增Rv0901基因序列,将Rv0901基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1（＋）获得重组表达质粒,体外转染Cos7细胞,RT-PCR检测转染的情况,并提取转染细胞总蛋白和收集细胞培养液上清检测蛋白的表达,Western-blotting检测蛋白表达的特异性。结果成功扩增出Rv0901基因序列,成功构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-Rv0901,重组质粒转染细胞后的RT-PCR能扩增出Rv0901基因序列,转染细胞总蛋白和细胞培养液上清均能特异表达Rv0901基因蛋白。结论成功构建Rv0901基因真核表达质粒并在真核细胞内进行了良好表达,为研究该基因功能打下了坚实基础。