美国FDA HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引主要推荐及其启示

正病毒核酸检测(nucleic acid test,NAT)技术应用在血液筛查中是输血安全技术的巨大进步。为了规范血液病毒NAT操作、血液和献血者管理,美国FDA于2010年5月发布了《HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引》(简称2010年版指引)[1],其时正恰逢我国着手开展血液病毒NAT的试点工作,我们认识到该文对我国血液病毒NAT技术规范化操作和管理具有重要的参考借鉴价     

四川地区供血浆人群经血传播病毒残余风险评估

目的收集本公司所属四川省内供血浆人群流行病学数据,评估传播HBV,HCV,HIV的残余风险。方法用ELISA对2013年1月-2013年12月本公司所属四川省内单采血浆公司467388人份血浆标本进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV筛查,对筛查HBsAg阳性标本采用中和试验法确证,对筛查抗-HCV及抗-HIV阳性标本采用免疫印迹法确证。采用发病率-窗口期模型计算供血浆者HBV,HCV,HIV残余风险。结果首次供血浆者人群中HBV,HCV,HIV的感染率分别为1.890%,0.280%,0.037%,重复供血浆者人群HBV,HCV,HIV感染率分别为0.028%,0.008%,0.008%。调查的重复供血浆人群HBV,HCV,HIV的残余风险分别为1∶20097,1∶65876,1∶197628。结论调查的供血浆人群HBV,HCV和HIV的感染率及残余风险均在1个较低的、可接受的水平,重复供血浆人群的安全性明显高于首次供血浆人群。     

无偿献血者HIV初筛检测策略探讨

目的探讨无偿献血人群HIV初筛检测策略,为采供血单位制定合理的HIV筛查方案提供试验数据支持,以供参考。方法收集2011年2月~2013年5月合肥市无偿献血者的血液标本214 807份。每份血液标本分别用1种进口试剂(伯乐)和1种国产试剂新创/万泰)同时进行EIA检测,对至少1种试剂呈反应性的标本用WB(蛋白免疫印迹)法进行确认检测。并对所搜集到的214 807份标本检测结果进行ROC分析。结果 1)EIA检测结果:用EIA法检测标本214 807份,其中119 127份标本用伯乐和新创试剂联合检测,95 680份标本用伯乐和万泰联合检测;2种试剂检测的S/CO值都在0~0.5组段的标本有214 436例,直接判为真阴性;呈反应性标本共371例,其中伯乐试剂和新创试剂检测均呈反应性的有24例,伯乐试剂和万泰试剂检测均呈反应性的有18例;伯乐、新创和万泰试剂检测单独呈反应性的分别是232、66、31例,反应率分别为0.11%、0.06%、0.03%。2)WB检测结果:371例初筛呈反应性标本,经WB确证检测,阳性28例,不确定32例,阴性311例;初筛检测S/CO值在0.5~1.0组段的所有标本,经WB检测,没有阳性结果。伯乐、新创、万泰试剂检测呈反应性的标本中,经WB检测后真阳性率分别为10.22%、17.78%、24.49%。3)全部标本检测资料的ROC分析:对3种试剂检测结果分别进行ROC分析,3种试剂的ROC之AUC均大至极限状态,近似为1.000;3种检测结果经z检验,两两比较的P>0.05,无统计学显著性差异;当S/CO值为1.0时,3种试剂的灵敏度近似为1.000;特异度在0.999~1.000。4)伯乐试剂初筛呈反应性标本资料的仿ROC分析:ROC-AUC为0.907,S/CO值在3.8以上并靠近6.0时的灵敏度较高,特异度为0.75以上。结论伯乐、新创和万泰试剂检测标本的反应率差异无统计学意义;进行初筛检测时,使用3种试剂任意之一进行检测即可,反应性判断阈值以1.0起为好;伯乐试剂检测的S/CO值高于6.0的标本,可以考虑判为阳性标本,无需做重复检测。     

中国献血人群感染乙型肝炎病毒PreC/BCP区的新变异

目的 了解中国献血人群感染乙型肝炎病毒(HBV)基因组的PreC/BCP区变异特征.方法 从参加REDS-Ⅱ中国项目的5家血液中心(或中心血站)收集的HBsAg阳性标本中选取245份,提取HBV DNA,根据HBVDNA PreC/BCP区保守序列设计引物,采用巢式PCR法扩增HBV DNA的PreC/BCP区,双向测序后用Clustal X软件将其序列与标准株序列比对,分析其变异特征,用SPSS 11.0统计软件分析其变异与献血者人口地理特征和血清学特征的关系.结果 245份献血者标本中有228份成功扩增了HBV PreC/BCP区,其中16例(7.02％)发现了1825～1 826位核苷酸之间的片段缺失或插入,突变标本中仅1例HBeAg阳性,其余均为阴性,突变标本的病毒载量明显高于未突变标本.结论 在中国献血人群中发现感染HBVPreC/BCP区的1种新交异,它可能与抑制HBeAg的表达和促进病毒复制有关.     

中国人细小病毒B19系统发育关系研究

目的探讨在中国分布的人细小病毒B19的系统发育。方法对B19病毒阳性的23份来自中国献血者和5份B19/HIV共感染者标本,采用病毒基因组NS1-VP1-u区测序后,与Genbank下载的参考序列比对,用软件MRBAYES 3.1.2作贝叶斯推断,用在线软件RaxML作最大似然法运算,绘制进化树并分析。结果 28份来自中国的标本均属于B19-1A亚型,且呈现复系,其中来自新疆乌鲁木齐来自四川的各1例标本与非中国序列聚在一起,其他中国26份标本与来自美国的病毒株Au聚在一枝并有着很好的支持率,来自西安的2条参考序列出现在B19-1A亚型的基部。结论中国的B19病毒是多起源的,其在中国中西部地区进化速率较慢;应该积极开展不同地区B19病毒多样性的研究。     

血小板lncRNA在肺腺癌早期筛查中的生物标志物初步研究

目的 探究血小板长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)早期筛查中作为生物标志物的诊断价值。方法 对包含LUAD患者和健康对照者血小板RNA数据的GSE183635和GSE89843数据集做差异分析,将两数据集的差异表达lncRNA(differentially expressed lncRNA,DElncRNA)取交集。通过GEPIA2分析DElncRNA在LUAD组织与正常对照组织中的表达水平。用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测LINC01088在51名健康对照者血小板和54名LUAD患者血小板中的表达水平,并通过受试者工作(receiver operator characteristic, ROC)曲线评价诊断能力。结果 GSE183635数据集差异分析得到8个DElncRNAs, GSE89843数据集差异分析得到1 265个DElncRNAs,取交集后获得关键DElncRNA LINC01088。GEPIA2分析显示,LI...     

HEV感染血小板模型的建立及其机制的初步研究

目的研究戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是否感染血小板并进一步在其内复制,以及血小板与HEV的相互作用情况。方法将纯化的血小板与病毒共培养1 h后在PBS中洗涤2次,22℃下继续震荡培养5 d,每天观察病毒的复制情况。使用荧光定量PCR方法检测HEV核酸浓度的变化;免疫荧光染色观察HEV是否感染血小板;流式细胞术分析HEV是否促进血小板活化。结果随着HEV感染量的增加,血小板感染病毒量逐渐增加并趋于平稳,并且感染率最高约为1.22%,免疫荧光结果可同时观察到HEV结合或进入血小板;培养上清中的病毒浓度与d0相比,d4、d5有明显的增长(P0.01),且沉淀中的病毒浓度在d2有明显的增加(P0.01);HEV导致CD62P,CD41双阳性血小板比例增加约8%(P0.01)。结论 HEV在体外实验中可以感染血小板并促进血小板活化,HEV在血小板内的复制特征需进一步研究验证。     

重组人脑髓鞘碱性蛋白及其抗体的制备与研究

背景:中枢神经系统髓鞘中蛋白部分的1/3为髓鞘碱性蛋白。作为一个蛋白质家族在人脑中有4种分子形式。目的:探讨重组人脑脊髓碱性蛋白表达及其免疫学的功能。设计:单一样本研究。单位:四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-08/2004-03在四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室完成。人脑hMBP相对分子质量为21500,T4DNALigase,小牛肠碱性磷酸酶,RNase,PEG8000等,硝酸纤维滤膜,抗人脑髓鞘碱性蛋白ELISA试剂盒。干预:①采用EcoR1和BamH1酶切人脑髓鞘碱性蛋白基因cDNA克隆片段。②重组表达载体p5TMP的构建及转化。③重组表达载体转化菌的生长及其诱导表达。④重组hMBP抗体制备主要观察指标:①蛋白表达产物的检测与鉴定。②人脑hMBP抗体检测与鉴定。结果:①分别有4999bppGEX-5TDNA和557bp人脑髓鞘碱性蛋白插入片段。②原对照质粒一条浓区带消失,而重组体有特异蛋白质区带出现。相对分子量为42000。③5次注射人脑髓鞘碱性蛋白后抗体效价达到1/16。并证实其hMBP抗原特异性。结论:本文构建了含相对分子质量为21500人脑髓鞘碱性蛋白外显子Ⅰ-Ⅶ编码序列的表达载体,还成功制备了重组人脑髓鞘碱性蛋白抗体。     

结核杆菌Rv0901基因真核表达质粒的构建及在细胞内的表达与鉴定

目的构建结核杆菌Rv0901基因的真核表达质粒并进行表达,为研究Rv0901基因的功能提供材料。方法以结核杆菌基因组DNA为模板PCR扩增Rv0901基因序列,将Rv0901基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1（＋）获得重组表达质粒,体外转染Cos7细胞,RT-PCR检测转染的情况,并提取转染细胞总蛋白和收集细胞培养液上清检测蛋白的表达,Western-blotting检测蛋白表达的特异性。结果成功扩增出Rv0901基因序列,成功构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-Rv0901,重组质粒转染细胞后的RT-PCR能扩增出Rv0901基因序列,转染细胞总蛋白和细胞培养液上清均能特异表达Rv0901基因蛋白。结论成功构建Rv0901基因真核表达质粒并在真核细胞内进行了良好表达,为研究该基因功能打下了坚实基础。     

美国FDA HIV-1和HCV核酸检测程序、血液处置和献血者屏蔽与归队指引主要推荐及其启示(下)

正4献血者归队的推荐意见需要注意,献血者归队准许符合献血者健康检查要求的归队献血者以后继续献血,但不影响该献血者之前所献血液(包括需要启动事后调查程序的血液)的状态。4. 1因HIV-1/2检测有反应性而被屏蔽的献血者的归队4. 1. 1目前FDA尚未找到由于下述HIV-1检测结果被屏蔽献血者归队的适当程序1) HIV-1 NAT(如双病毒NAT有反应性后做鉴别NAT或HIV-1 RNA单病毒NAT)有反应性和