伴食管平滑肌瘤的Alport综合征基因突变特征

目的：认识我国伴食管平滑肌瘤的Alport综合征患者的基因型特点。方法：对l例中国汉族伴食管平滑肌瘤的Alport综合征男性患者应用PCR方法扩增COL4A5基因的外显子l、2和COL4A6基因的外显子l(部分序列)、2及3，同时应用Southem杂交的方法进行DNA重组分析。结果：经PCR扩增和Southem杂交的方法揭示患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5’端的大片段缺失，缺失范围可能至少包括COL4A5基因的外显子l、COL4A6基因的外显子l～2以及两基因间的启动子，估计此大片段缺失的断点在COL4A5基因的内含子l至COL4A6基因的内含子2中。结论：首次发现中国汉族中伴食管平滑肌瘤的Alport综合征患者具有COL4A5和COL4A6两个基因的缺失突变，该突变有可能累及C0L4A6基因的内含子2。同时亦提示具有COL4A5和COL4A6两个基因突变伴弥漫性平滑肌瘤表型的Alport综合征患者与COL4A6基因突变位置有关。     

小儿血尿时尿NO代谢产物及cGMP的变化

应用放免法对小儿血尿时尿中ＮＯ代谢产物（ＮＯ２／ＮＯ３）及ｃＧＭＰ的含量进行测定。结果表明：急性肾小球肾炎，狼疮性肾炎尿中ｃＧＭＰ，ＮＯ２／ＮＯ３明显升高，而ＩｇＡ肾病尿中ｃＧＭＰ下降。提示：小儿免疫性肾损害存在ＮＯ代谢异常，ＮＯ的测定有助于对血尿的鉴别     

中国Alport综合征临床特征

为分析和总结我国Alport综合征(AS)患者临床特征，选取我院确诊为AS的患者77例(男55例，女22例)，以其尿液、肾功能、纯音测听、眼裂隙灯和眼底检查以及肾穿刺组织的常规检查作为临床表型资料进行分析和总结；并对74／77例患者进行了皮肤基底膜Ⅳ型胶原α5链免疫荧光学检查；对34／77例进行肾穿刺活组织检查。结果显示AS在16岁以前发病占92％，其中10岁以前占68％；首发症状以血尿并蛋白尿多见，占93．5％的患者均有血尿，部分伴发作性肉眼血尿；85．7％的患者伴有蛋白尿，且达肾病水平蛋白尿者为31．8％；感音神经性耳聋的男性患者发病率较国外报道高(分别为68％和55％)，而在女性患者却相对较低(7％和45％)；眼部病变发生率与国外报道类似。肾活检组织光镜下的病理变化以轻度系膜增生性肾小球肾炎多见(18／29例，62．1％)；常规免疫荧光学染色多为IgM沉积(9／24例)；52例男性患者皮肤基底膜中α5(Ⅳ)链染色49例阴性，3例阳性，女性患者中21例呈间断阳性，1例呈阳性；绝大多数患者(70／77例)有血尿或终末期肾脏病家族史；60％患者属于青少年型AS，且男性患者在儿童期便可出现肾功能下降。提示我国AS有以下临床特征：起病多在16岁以前，尤以10岁以前居多；血尿伴蛋白尿为常见首发症状；蛋白尿的发生率高且较重；男性患者发生感音神经性耳聋的比例较高；发生终末期肾脏病早且预后差。     

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

Alport综合征(Alport syndrome,As)的诊断问题日益受到关注.采用抗不同α(Ⅳ)的单克隆抗体,对肾及皮肤活检组织进行冰冻切片免疫荧光染色对Alport综合征的诊断具有重要价值[1],但冰冻切片难以长期保存,异地标本难以运送,相对于此石蜡切片有其优势.     

遗传性肾脏疾病临床资料数据库的建立与应用

目的建立遗传性肾脏疾病临床资料数据库,并探讨其临床应用价值。方法搜集1993-2008年北京大学第一医院儿科肾脏病房收治及医院遗传性肾脏病门诊就诊的所有疑诊遗传性肾脏疾病的患者及其家系成员,利用Access2003软件建立遗传性肾脏疾病临床资料数据库。结果共收录病例1093例。该数据库具有检索查询及简单的统计功能,而且输入输出界面友好,数据随时更新。结论利用Access2003软件建立遗传性肾脏疾病的临床资料数据库,不仅方便临床资料的信息化管理,而且为临床科学研究建立了良好的平台,为今后开展各项临床研究奠定了重要基础。     

检测皮肤成纤维细胞cDNA确定Alport综合征COL4A5基因突变

目的:检测、分析Alport患者Ⅳ型胶原α5链mRNA及其序列,试图建立一种简单、快捷的检测COL4A5基因突变的方法,同时明确基因突变对COL4A5基因转录的影响.方法:取21例X连锁显性遗传型Alport综合征患者和2例对照的皮肤标本培养后提取成纤维细胞总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 和直接测序的方法分析Ⅳ型胶原α5链mRNA.对于cDNA序列异常者,进而应用PCR和直接测序的方法分析COL4A5基因.结果:成功进行了原代、传代皮肤成纤维细胞的培养并提取了总RNA;直接测序揭示对照组Ⅳ型胶原α5链mRNA序列及已检测的8例患者Ⅳ型胶原α5链3′端mRNA 序列与所发表的序列完全一致;通过RT-PCR和直接测序发现了4 例新突变,并与从基因组DNA样本中检测到的突变相一致.结论:通过分析皮肤成纤维细胞中Ⅳ型胶原α5链mRNA序列,可用以检测Alport综合征患者COL4A5 基因突变,且本文报道的4例突变均为新突变;COL4A5基因突变后存在异常的转录产物.     

多重竞争性荧光PCR检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变

目的 探讨多重竞争性荧光PCR在X连锁Alport综合征分子诊断中的应用。方法 选择20例在北京大学第一医院确诊且未进行基因诊断的X连锁Alport综合征患者为研究对象,同时选择2例经多重连接依赖性探针扩增技术检测到COL4A5基因大片段缺失突变的患者作为阳性对照和1例经肾活检组织电子显微镜检查证实非Alport综合征的男性作为正常对照。首先应用多重竞争性荧光PCR技术扩增COL4A5基因53个外显子和4个参照基因,对于检测到COL4A5基因缺失第1外显子者,进而应用相同技术扩增COL4A5基因外显子1~4、COL4A6基因外显子1~4、两基因共用启动子以及3个参照基因;对于检测到拷贝数缺失者,应用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增后的PCR产物或直接测序。结果 两例阳性对照应用多重竞争性荧光PCR技术检测到的COL4A5基因缺失突变与应用多重连接依赖性探针扩增技术检测到的COL4A5基因缺失突变一致。20例患者中6例(30%)明确了基因型,其中2例患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5'端的大片段缺失,2例患者具有累及COL4A5基因30个外显子以上的大片段缺失,1例患者具有累及COL4A5基因至少1个外显子的大片段缺失,1例患者具有COL4A5基因缺失13个碱基的小的缺失突变,未检测到重复突变。结论 多重竞争性荧光PCR技术可用于检测X连锁 Alport 综合征大片段缺失突变,是对该病分子诊断检测方法的重要补充。     

儿童Gitelman综合征一例并文献复习

目的 :分析1例Gitelman综合征患儿的临床表现及基因检测结果 ,以提高医师对Gitelman综合征的认识。方法:分析1例Gitelman综合征患儿的临床资料,行SLC12A3基因检测,并结合文献资料进行分析、诊断。结果:患儿表现为低钾性代谢性碱中毒、低镁血症、低钙尿症、高镁尿症,而其血清肾素和血管紧张素水平增高,但血压正常;检测到SLC12A3基因5个变异,但未检测到致病性突变。结论:应提高对Gitelman综合征的认识,以防漏、误诊。