miR-192负性调控人肝癌细胞株HepG2中RB1基因的表达

目的 探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用.方法 运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1 mRNA 3′端非编码区(3′UTR)片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用.结果 生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性(4.80±0.36)较相应过表达miR-NC组(7.90±0.91)明显降低(P＜0.05),而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性[pMIR-Luc:(7.68±1.04);pMIR-RB1-mut:(7.56±0.99)]较相应过表达miR-NC组[pMIR-Luc:(7.86±0.73);pMIR-RB1-mut:(7.82±1.05)]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1 mRNA[(0.56±0.10)vs (1.05±0.13)]和蛋白(47% vs 100%)的表达.结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1 mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达.     

小鼠白蛋白基因启动子的克隆及其在不同细胞系中转录活性的检测

目的：对比小鼠白蛋白（mouse albumin promoter, ALB）启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）在不同细胞系中的转录活性。方法：以小鼠全血基因组DNA为模板,聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增ALB启动子序列,克隆至pEGFP-1中,构建重组体pALB-EGFP;在Lipofectamine介导下将pALB-EGFP、pEGFP-N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、人胰腺癌细胞Bxpc-3;荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果：pALB-EGFP构建成功;L02转染pALB-EGFP 72 h后,ALB启动子可起始EGFP的表达,转录活性为人巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）启动子的1/4,其它转染细胞的ALB不能起始EGFP的转录;稳定筛选后,ALB的转录活性达到与CMV相当的水平。结论：构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性, 为建立肝脏特异性表达目的基因的转基因小鼠模型奠定了基础。     

基于文献研究的小儿反复呼吸道感染常见证素与症状相关性分析

目的：探讨小儿反复呼吸道感染中证素与症状之间的相关性。方法在对近20年小儿反复呼吸道感染文献资料进行全面检索的基础上,筛选符合纳入标准的文献,规范证候、症状名称,提取病位、病性证素,对其进行统计,并运用秩和检验分析检出率在5%以上的常见证素和症状之间的相关性。结果经初步规范化后,获取病位证素10个,病性证素11个,常见证素与症状之间存在一定相关性。结论通过文献研究,初步确定小儿反复呼吸道感染常见证素与症状之间的对应关系,可为本病的临床辨证和科学研究提供一定的参考。     

谢静副教授从湿热论治小儿疱疹性疾病经验

介绍了谢静副教授从湿热论治小儿疱疹性疾病的经验。谢教授认为病机关键是湿热相搏、外蒸皮肤,治疗以清热、祛湿、解毒为主。附验案2则,以资验证。     

高通量技术筛选的米托蒽醌促进肝癌HepG2细胞凋亡的作用及机制

目的 探讨高通量技术(HTS)筛选的米托蒽醌(MTX)促进肝癌细胞凋亡的作用及机制.方法 将不同浓度的MTX(0、0.5、1、2.5、5、10、20μmol·L-1)处理肝癌HepG2细胞24 h,采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,采用免疫印迹检测HepG2细胞凋亡标记分子cleaved Caspase-3的表...     

中医体质类型与小儿热性惊厥复发的相关性研究

目的研究中医体质类型与小儿热性惊厥(FC)复发的相关性,进而从中医体质角度为热性惊厥复发的防治提供依据。方法采用1∶2病例对照研究设计,病例组32例,对照组64例,填写小儿中医体质类型调查表,分析体质因素在两组中的差异,再进行多因素条件Logistic回归分析。结果病例组平和质、阳盛质、性别因素较对照组分布差异有统计学意义(P0.05);平和质、阳盛质在不同惊厥类型FC复发患儿中分布差异无统计学意义(P0.05);多因素条件Logistic回归分析显示平和质、性别与FC复发无关(P0.05),阳盛质与FC复发相关(P0.05),OR为4.256,95%CI为3.262~44.787。结论阳盛质是热性惊厥复发的危险因素。     

腹部按摩护理联合穴位注射应用于心脏术后腹胀患者中的效果观察

目的 探讨腹部按摩联合足三里穴位推注甲硫酸新斯的明注射液改善心脏术后患者腹胀的应用效果。方法 选取2018年4月—2021年4月南昌市某三级甲等医院总院行心脏手术并发腹胀的患者259例,按照组间基本特征均衡可比的原则分为观察组(129例)和对照组(130例)。对照组实施足三里穴位推注甲硫酸新斯的明注射液并采用传统护理方法,观察组在对照组基础上进行腹部按摩。观察两组术后肛门首次排气时间、首次排便时间、肠蠕动恢复和腹胀消失时间。结果 观察组术后肛门首次排气时间、肛门首次排便时间、肠蠕动恢复时间、腹胀缓解时间均短于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 腹部按摩联合足三里穴位推注甲硫酸新斯的明注射液能有效缓解心脏术后患者腹胀症状,且操作简便、安全可靠。     

新型核苷类似物beta-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用及其机制

目的: 对人DNA聚合酶δ进行纯化和鉴定, 通过检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用, 观察β-L-D4A的毒副作用. 方法: 运用多次离子交换层析的方法提取、纯化人Hela细胞的DNA聚合酶δ; 检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学作用. 结果: 提纯并鉴定了DNA聚合酶δ, 收得率是15%, 比活力是1911 Ukat/mg. beta-L-D4A为抑制剂时, 对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学参数分别是Km = 1.86 mumol/L, 2.45 mumol/L, IC50 = 25.21 mumol/L和150.1 mumol/L, Ki = 24.03 mumol/L和132.7 mumol/L, 结果均提示β-L-D4A对DNA聚合酶β和δ的抑制作用远小于拉米夫定. 结论: beta-L-D4A是人DNA聚合酶β和δ的竞争性抑制剂, 他对这两种酶的毒副作用远小于拉米夫定, 可望成为更高效低毒的抗HBV类药物.     

PPAR-γ的激动剂吡咯列酮抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的观察PPAR-1的激动剂吡咯列酮对肝癌细胞的生长抑制作用。方法采用MTT法研究了不同浓度盐酸吡咯列酮与肝癌细胞株SMMC7721的生长抑制作用，并观察了不同时间对SMMC7721的生长抑制作用。结果吡咯列酮对肝癌细胞有明显抑制作用，随着浓度的升高吡咯列酮对肝癌细胞的生长抑制作用逐渐增强；在高浓度组（20μM以上），在一定的时间范围内（24—120h）随着作用时间延长，抑制作用逐渐增强。结论PPAR-1的激动剂吡咯列酮可抑制肝癌细胞的生长，并且呈剂量和时间依赖关系。     

靶向Kus基因的串联短发夹状RNA表达系统对HepG2细胞中Ku70和Ku80的同时干预作用

目的在同一载体上串联针对不同靶基因的短发夹状RNA（shRNA）,探讨其同时干预不同靶基因的效应。方法在已筛选到高效干预靶基因Ku70、Ku80的shRNA表达载体的基础上,构建串联的shRNA表达载体psiRNAKus,该载体能同时表达针对Ku70的shRNA和针对Ku80的shRNA,酶切鉴定和DNA测序确定psiRNAKus构建成功后,将其转染入肝癌细胞株HepG2,转染后48 h提取细胞总RNA和蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测其干预靶基因的效果。结果psiRNAKus表达的shRNAs能够同时抑制Ku70和Ku80在转录水平和翻译水平的表达。结论在同一载体上串联的针对不同靶基因的shRNA表达系统有望在实验和临床治疗中得到应用。