实时定量逆转录聚合酶链反应检测大肠癌患者术前外周血CK20 mRNA和CEA mRNA的临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血CK20 mRNA和CEA mRNA的表达及其临床意义。方法采用实时定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）技术,对68例大肠癌患者及30例健康志愿者（对照组）术前外周血CK20 mRNA和CEA mRNA水平进行检测。结果在对照组中CK20 mRNA和CEA mRNA均无表达,而在大肠癌组中CK20 mRNA阳性表达率为45．6％,CEA mRNA阳性表达率为39．7％,二者联合检测阳性率为55．9％,较单项检测阳性率高（P〉0．05）,二者的表达与性别、肿瘤部位和肿瘤分化程度无明显相关,与肿瘤临床分期、淋巴结转移和肝脏转移明显相关。结论CK20 mRNA和CEA mRNA可作为大肠癌细胞血行播散的标志,联合检测有助于提高肿瘤微转移的检出率及判断预后。     

创伤弧菌溶细胞素体外诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及其在细胞中的定位

目的 了解创伤弧菌溶细胞素(Vibrio vulnifru,cytolysin,WC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡作用及其机制.方法 采用PCR扩增创伤弧菌GTC333株VVC编码基因vvhA,T-A克隆后测序并构建vvhA基因原核表达系统E.coli BL21DE3pET-42a-vvhA.采用Ni-NTA亲和层析法提纯目的 重组蛋白rVVC,SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统确定rVVC表达量及提取物纯度.采用溶血试验检测rVVC溶解兔红细胞的活性.2,4-二硝基苯肼比色法和四苯硼钠比色法分别测定rVVC作用的HUVEC培养物上清中乳酸脱氢酶(LDH)和K+含量.采用流式细胞术检测rVVC诱导HUVEC凋亡的作用.将FITC标记rVVC,采用激光共聚焦技术对HUVEC中的FITC标记rVVC进行定位.结果 与GenBank中相关序列比较,所克隆的vvhA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为96.09%和98.26%.1μg/ml的rVVC即可溶解兔红细胞(P<0.01).10 μg/ml的rVVC可引起HUVEC培养物上清中K+含量明显增高(P<0.01),但LDH含量无明显改变(P>0.05).1～100μg/ml的rVVC作用2 h可使HUVEC凋亡.在FITC标记rVVC作用HUVEC 5～240 min内,rVVC逐渐从细胞膜表面向膜内侧和胞浆内移行,作用30 min时多数rVVC进入细胞.结论 rVVC具有溶细胞素活性.VVC可进入HUVEC,诱导细胞凋亡是其损伤HUVEC的主要机制.     

乙肝五项、HBV-DNA定量及乙肝前S1抗原联合检测用于诊断乙肝的临床价值分析

目的分析乙肝五项与病毒(HBV)前S1抗原及病毒DNA的相关性,并探讨联合检测对乙肝诊断的临床价值。方法选取本院门诊部和住院部2013年10月至2015年10月期间收治的患者作为研究对象,收集其HBsAg阳性血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其前S1抗原和乙肝五项,采用荧光定量PCR法检测其HBV-DNA水平,对比分析不同模式下前S1抗原的表达水平和HBV-DNA的水平,并分析其相关性。结果乙肝前S1抗原阳性率与HBV-DNA阳性率在不同HBV-M模式下比较,差异无统计学意义(P>0.05)。此外1+3+5+组中HBV-DNA阳性拷贝数较高,多数高于105copies/m L;而1+4+5+、1+2+、1+3+、1+4+和1+5+组的前S1+与前S1-组相比,其HBV-DNA阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。HBsAg阳性血清标本中前S1抗原在HBe Ag+组中阳性率明显高于HBe Ag-组,差异具有统计学意义(P<0.05),HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBe Ag具有一定的相关性。HBsAg阳性血清标本中前S1抗原在HBV-DNA+组中阳性率明显高于在HBV-DNA-组,差异具有统计学意义(P<0.05),HBsAg阳性血清标本中前S1抗原与HBV-DNA具有一定的相关性。结论前S1抗原可较好反映乙肝病毒存在和复制的情况,将前S1与乙肝五项和HBV-DNA进行联合检测可较早发现较低水平病毒的感染,其可作为抗病毒疗效的评判指标,对乙肝的临床诊断和疗效评价均具有较好的应用价值。     

不同年龄段女性人乳头瘤病毒感染状况分析

目的了解不同年龄段女性人乳头瘤病毒(HPV)感染状况,为宫颈癌防治提供理论依据。方法对临床3 426例宫颈分泌物标本采用多通道实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪检测8种高危型HPV DNA亚型(HPV16、18、45、31、33、52、58、67),分析不同年龄段受检者HPV感染状况。结果 3 426例标本中共检出HPV阳性583例,阳性率为17.02%。HPV感染人群分布以19~40岁组为主,以19~30岁人群中感染率最高,达到20.37%,明显高于其余的年龄组(P0.05)。在检出类型中有单一亚型感染,也有多亚型的多重感染,其中比例最高的亚型是HPV33/52/58/67(59.01%),明显高于其它HPV亚型(P0.05);居第2位和第3位的分别为HPV16(14.92%)、HPV18/45(9.43%)。结论 19~30岁是女性感染HPV的高峰期,HPV感染有年轻化趋势,但中老年女性群体中HPV感染率依然居高不下。常见的HPV感染基因型为33/52/58/67、16和18/45,提示有一定人群特点。     

流式细胞术用于鲍曼不动杆菌体外药敏试验的研究

目的探讨流式细胞术(FCM)方法快速检测鲍曼不动杆菌体外药敏试验的临床应用价值。方法选用碘化丙啶(PI)作为荧光染料,用FCM检测大肠埃希菌标准菌株和66株鲍曼不动杆菌临床菌株对舒氨西林、左氧氟沙星、美罗培南、头孢噻肟钠的敏感性。根据细菌培养物在不同浓度药物作用后所检测到的荧光强度来判断细菌存活率,从而推断MIC值。并与微量稀释法和VITEK仪检测结果进行比较。结果 66株鲍曼不动杆菌流式细胞荧光法抗菌药物敏感试验(FCST)结果测得舒氨西林耐药35株,左氧氟沙星耐药30株,美罗培南耐药13株,头孢噻肟钠耐药38株。采用χ2检验,分别比较与微量稀释法、VITEK仪检测判断的敏感性结果,差异均无统计学意义(P0.05)。结论鲍曼不动杆菌流式细胞荧光法药敏试验与常规方法检测结果具有一致性,并且更快速、灵敏、客观。     

骶管注药阻滞联合左旋氧氟沙星治疗慢性前列腺炎358例

目的探讨慢性前列腺炎的治疗方法及临床疗效。方法358例慢性前列腺炎患者,按照美国国立卫生研究所(NIH)制定的前列腺炎症评分标准(CPSI)和前列腺液(EPS)指标变化及细菌学检查结果评估疗效,应用骶管注药阻滞联合左旋氧氟沙星治疗。结果358例平均随访10.2个月,依据CPSI进行疗效判定,临床治愈180例、显效79例、有效73例、无效26例。结论CPSI是一种较好的疗效评价方法,骶管注药阻滞联合左旋氧氟沙星治疗慢性前列腺炎有较好疗效。     

多通道实时荧光定量PCR检测HPVDNA结果分析

目的探讨多通道实时荧光定量PCR检测HPVDNA的效果,并应用于日常检测工作。方法对临床1100例宫颈分泌物标本采用多通道实时荧光定量PCR仪进行8种高危HPVDNA分型及定量检测。8种高危HPV型别为主要高危型HPV16、18、45、31和次要高危型HPV33、52、58、67。结果在1100例标本中排除了14例B球蛋白为阴性的标本,剩余1086例标本总体的内标平均值为3．71×10^6IU／ml。随机重复性试验和对每个型别的各浓度标本进行的重复性试验每次扩增均为阳性,型别符合率为100％。共检测出阳性标本287例,HPV16、HPV18／45、HPV31、次要高危型和合并感染各有46、17、14、146和64例,分别占总阳性标本的16％、6％、5％、51％和22％。所有标本绝对定量值的分布近似于正态分布。结论多通道荧光定量PCR检测HPVDNA灵敏度高、复性好,可用于临床HPV感染的筛查与宫颈病变程度预测以及患者术后疗效观察。