新城疫病毒诱导结肠癌Caco2细胞株发生Caspase和p38MAPK依赖性诱凋亡

目的研究新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)毒株FMW(NDV/FMW)诱导结肠癌Caco2细胞发生凋亡及其机制。方法通过病毒滴度法测定病毒在细胞内复制情况;CCK8法检测细胞存活率;显微镜下观察细胞形态学的变化;Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase3、PARP及MAPK下游信号通路相关p38、JNK、Erk1/2蛋白表达水平。结果NDV/FMW在Caco2细胞内复制,降低2D及3D培养Caco2细胞存活率（P＜0.001）;NDV/FMW诱导Caco2细胞中裂解的Caspase3(cleaved-Caspase3)及PARP裂解片段(cleaved-PARP)增加,泛Caspase抑制剂预处理降低Caspase3及PARP裂解片段表达水平;NDV/FMW感染组Caco2细胞磷酸化p38和磷酸化JNK较对照组增加,磷酸化ERK1/2及总p38、JNK、ERK1/2蛋白水平无显著增加;与NDV/FMW感染组相比较,p38抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平显著减低,但JNK抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平没有显著变化。结论NDV/FMW诱导结肠癌Caco2细胞发生Caspase和p38MAPK依赖性细胞凋亡。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态与结直肠癌遗传易感性的相关性

目的:探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T多态与结直肠癌(CRC)遗传易感性的关系.方法:采用TaqMan方法检测CRC 449例与对照672例的MTHFR C677T的基因型分布及差异.以非条件Logistic回归法计算表示相对危险度的比值比(OR)及其95%可信区间(CI).OR值均经性别、年龄、吸烟、饮酒、体质量指数和一级亲属CRC家族史等因素校正.结果:CRC组677T等位基因频率显著低于对照组,其为CRC发生的保护因素(OR:0.70,95%CI:0.58-0.83,P<0.01).与CC纯合子相比,CT杂合子的CRC风险显著降低至0.73倍(95%CI:0.56-0.95,P<0.05),而TT纯合子的CRC风险进一步降至0.47倍(95%CI:0.33-0.68,P<0.01).在非饮酒人群中,C677T的CRC风险保护效应略有增强;而在饮酒人群中,CT和TT基因型携带者的CRC发病风险虽仍低于CC基因型携带者,但差异无统计学意义.在CRC人群中,荷大肿瘤(最大直径>4cm)者携带TT基因型的比例高于荷小肿瘤者(16.3% vs 8.3%,P<0.05);荷黏液腺癌者携带TT基因型的比例高于荷乳头状腺癌及管状腺癌者(22.2% vs 17.1%,10.3%,P=0.084).结论:MTHFR C677T降低CRC发病风险,饮酒可能削弱该多态的CRC风险保护效应.TT基因型可能与CRC肿瘤进展有关.     

染色体8q拷贝数变异与肝细胞癌患者术后总生存期的相关性及其靶基因筛选

目的　探讨染色体8q拷贝数变异（CNA）与肝细胞癌（HCC）患者术后总生存期（OS）的关系,并筛选生存相关CNA内的潜在靶基因。方法　收集2007—2008年于第二军医大学附属东方肝胆外科医院手术住院的HCC患者187例为研究对象。收集患者一般资料,检测其染色体8q CNA、染色体8q24.13-24.3片段内50个已知基因mRNA表达水平;术后对患者进行随访,最终共66例患者完成随访。一般资料、染色体8q内各高频CNA（增益发生率>20%）片段与OS的相关性分析采用Log-rank检验;采用Cox比例风险回归模型分析OS的影响因素;生存曲线比较采用Log-rank检验;染色体8q24.13-24.3增益HCC患者和8q24.13-24.3无增益HCC患者基因mRNA表达水平比较采用Mann-Whitney U检验。结果　HCC患者糖尿病史、有无完整肿瘤包膜、TNM分期与OS有相关性（P<0.05）。单因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,染色体8q24.13-24.3增益与OS有相关性（P<0.05）;多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,染色体8q24.13-24.3增益、有无糖尿病史、有无完整肿瘤包膜、TNM分期是OS的影响因素（P<0.05）。生存分析结果显示,染色体8q24.13-24.3增益HCC患者生存率低于染色体8q24.13-24.3无增益HCC患者（P<0.05）。染色体8q24.13-24.3增益HCC患者C8orf76、ATAD2、WDYHV1、FBXO32、TMEM65、TATDN1、ZNF572、SQLE、KIAA0196、NSMCE2、PVT1、FAM49B、ASAP1、NDRG1、ZFAT、KHDRBS3、EIF2C2 mRNA表达水平高于染色体8q24.13-24.3无增益HCC患者（P<0.000 1）。结论　染色体8q24.13-24.3增益与HCC患者OS有关,可作为HCC的一个预后预测因子。ATAD2、PVT1、NDRG1拷贝数依赖性表达上调可能参与了HCC不良预后的演进过程。     

细胞周期蛋白D1基因A870G多态与前列腺癌遗传易感性的相关性研究

目的 探讨细胞周期蛋白D1(CCND1)基因A870G多态与中国人群前列腺癌(PCa)遗传易感性的关系.方法 采用TaqMan-MGB实时荧光定量PCR法,检测245例PCa与245名非前列腺癌个体对照的CCND1 A870G基因型分布及差异.结果 PCa组和对照组870G等位基因频率分别为47.6%(233/490)和40.8%(200/490),G的PCa发病风险是A的1.31倍(95%CI为1.00～1.72,P=0.054).与AA纯合子相比,AG杂合子的PCa风险增至1.43倍(95%CI为0.89～2.31,P=0.142),而GG纯合子的PCa风险显著增至2.02倍(95%CI为1.07～3.80,P=0.029).将AA、AG和GG视为不同的等级,经趋势Armitage检验,存在等位基因剂量-反应关系(P=0.029).PCa者中,有转移者携带G等位基因(AG、GG基因型)的比例高于无转移者(P=0.014).结论 CCND1 870G增加PCa发病风险,并呈等位基因剂量-反应关系,GG基因型是中国人的PCa遗传易感因素;G等位基因携带可能与Pca转移有关.     

Transcribed single nucleotide polymorphism: Ideal markers for detecting gene imprinting by 5' nuclease assay

Objective: To establish a novel approach for quick and highly efficient verification of human gene imprinting. Methods: A pair of dye-labelled probes, 5' nuclease assay was combined with RT-PCR to determine the genotype of a transcribed single nucleotide polymorphism (SNP) rs705(C>T) of a known imprinted gene, small nuclear ribonucleotide protein N (SNRPN), on both genomic DNA and cDNA of human lym-phoblast cell lines. Results: Allele discrimination showed a clear monoallelic expression pattern of SNRPN, which was confirmed by RT-PCR based restriction fragment length polymorphism (RFLPs). Pedigree analysis verified the paternal origin of expressed allele, which was in consistency with previous report. Conclusion: Transcribed SNP is an ideal marker for detecting gene imprinting by 5' nuclease assay. This approach also may be used to discover differential allele expression of non-imprinted genes, finding out gene cis-acting functional polymorphism.     

CDH1基因多态与结直肠癌和肝癌发生、进展的关系

目的 探讨CDH1基因C-160A多态与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发病风险和肿瘤分级分期的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法 检测374例CRC与324名对照以及180例HCC与209名对照的CDH1 C-160A基因型分布及差异.结果 CDH1 C-160A基因型分布在CRC-对照和HCC-对照人群间差异均无显著性(P>0.05).然而,高TNM分期(Ⅲ Ⅳ)CRC组中A基因型(CA AA)频率显著低于低TNM分期者(Ⅰ Ⅱ)(P=0.008);淋巴结转移阳性CRC组中A基因型频率显著低于转移阴性者(P=0.016);远处转移阳性CRC组中A基因型频率也低于转移阴性者,但差异无统计学意义(P=0.169).高T分期(T2～T4)HCC组中A基因型频率低于T1期者,但差异未达到统计学意义(P=0.066).结论 CDH1 C-160A与CRC和HCC的发病风险无关,但-160A可能对CRC肿瘤进展具有保护作用.     

细胞周期蛋白D1基因多态与人结直肠癌遗传易感性

目的探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因第870位点单核苷酸多态(G870A)与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测345例CRC与670名对照的G870A基因型分布及差异。结果CRC和对照两组人群的Cyclin D1 G870A基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。与GG基因型相比,GA、AA基因型及A等位基因携带者(GA及AA基因型)的CRC风险分别为1.08倍(95%CI=0.75～1.54)、1.01倍(95%CI=0.68～1.51)及1.06倍(95%CI=0.75～1.49)。经性别、年龄、肿瘤位置、组织学分化程度和Dukes分期等因素分层分析,结果均显示G870A与CRC发病风险无显著性相关。结论Cyclin D1 G870A多态与宁波地区人群的CRC发病风险无相关性。     

肝脏少见原发性间叶性肿瘤101例的临床病理研究

目的：研究肝脏少见原发性良、恶性间叶性肿瘤的临床病理特点以提高病理诊断的准确性。方法：回顾性分析于1982年1月至2002年12月间经手术切除、组织病理和免疫病理诊断证实的原发性间叶性肿瘤共性18种101例（不包括肝海绵状血管瘤）。结果：肝良性间叶性肿瘤有7种48例，占47.5%(48/101)，男女之比为1：1.8，平均31.2岁；以肝血管平滑肌脂肪瘤最为常见，占70.8%(34/48)；该组患者术后至今全部生存，无1例复发。肝恶性间叶性肿瘤有11种53例，占52.5%（53/101），男女之比为1.2:1，平均44.1岁；其中最常见者为肝淋巴瘤[20.8%(11/53)]，全部见于男性，且63.6%(7/11)的患者有HBV感染史，2例合并肝细胞癌；该组患者术后2年和3年生存率分别为61.9%(13/21）和33.3%(7/21)。结论：肝脏可以原发大部分类型的软组织肿瘤，良、恶性肿瘤患者之间的性别和年龄分布有所不同，值得在诊断时参考。在做出病理诊断之前必须结合临床排除转移；鉴别诊断应首先排队肝细胞癌与肝内胆管癌的梭形细胞型或局部内瘤样化等变异类型；科学、合理地使用免疫组化染色谱具有重要的诊断和鉴别诊断价值。     

肝细胞癌与肝内胆管癌的免疫组化诊断

目的 评价一组免疫组化标志物在诊断和鉴别诊断肝细胞癌(HCC)和肝内胆管癌(ICC)中的价值.方法 对手术切除的90例HCC和80例ICC分别进行石蜡包埋肝细胞1(Hep Par 1)、多克隆性癌胚抗原(pCEA)、CD34、CD10、CD105、多药耐药相关蛋白3(MRP-3)、环氧合酶2(COX-2)、黏糖蛋白1(MUC-1)、水通道蛋白1(AQP-1)和CK19等10种抗体的免疫组化染色,比较其表达阳性率的差异性.结果 Hep Par 1、pCEA、CD34、CD10、CD105、MRP-3和COX-2在HCC的表达阳性率分别为85.6%、82.2%、87.8%、18.9%、8.9%、11.1%和48.9%,MUC-1、AQP-1和CK19在ICC的表达阳性率分别为73.8%、65%和92.5%.结论 HCC的一线诊断抗体由Hep Par 1和CD34组成,二线诊断抗体由pCEA和COX-2组成;ICC的一线诊断抗体由MUC-1和CK19组成,二线诊断抗体为AQP-1.     

腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用

目的研究腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用.方法应用PCR克隆出人KDR基因启动子序列-225 bp～+127 bp,以AdEasy system为载体,构建携带受KDR启动子或CMV启动子调控tk基因表达的2种重组腺病毒质粒pAdKDR-tk和pAdCMV-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外感染表达KDR的脐静脉血管内皮细胞系HUVEC和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2,并给予不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理,5 d后收集存活细胞并计数.结果产生的病毒滴度均为5×109pfu/ml.在MOI为100、GCV为50μg/ml条件下,AdKDR-tk转染HUVEC后细胞生存率下降(31.49%±6.42%),AdKDR-tk转染HepG2后细胞生存率为76.57%±3.49%,而转染AdCMV-tk的2细胞系生存率均显著下降,细胞生存率分别为22.24%±3.77%(HUVEC)和26.53%±6.84%(HepG2).结论KDR基因启动子可调控HSV-tk在血管内皮细胞中特异性表达,为进一步开展靶向肿瘤血管内皮的自杀基因治疗研究奠定了基础.