心不停跳心脏移植的初步研究

目的建立大鼠异位不停跳与停跳心脏移植模型,探讨其手术方法及要点,测定受体外周血心肌酶含量,为移植物缺血再灌注损伤（IRI）相关研究提供操作简便、易于观察的大鼠心脏移植实验动物模型。方法自行设计建立大鼠异位不停跳心脏移植模型,改良Heron法建立大鼠异位心脏移植模型;术后3d,每组随机取30只受体大鼠,检测外周血心肌酶（cTnI、CK-MB、LDH）含量。结果连续完成正式实验不停跳模型53只,停跳模型52只,建模成功率为94.3%和96.8%。不停跳组受体外周血心肌酶含量低于停跳组,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论不停跳心脏移植模型经济可靠、易于复制,利于进行不停跳心脏移植的基础研究,在防止供心IRI上优势明显。     

持续氧合血灌注供心对移植心脏急性排斥反应的影响

目的 观察持续氧合血灌注供心对移植心脏急性排斥反应的影响.方法 建立无缺血再灌注损伤(同系A1组、异系B1组)和缺血再灌注损伤(同系A2组、异系B2组)4种异位心脏移植模型,并设立对照组C,术后第7天取标本,Real-Time聚合酶链反应(PCR)检测移植心脏MHC-Ⅱ、B7-2 mRNA表达,免疫组织化学法检测CD4+T细胞浸润.结果 A2、A1组MHC-ⅡmRNA分别为9.30±0.53、1.48 ±0.31 (P ＜0.05)、B7-2 mRNA分别为5.45±0.43、1.46 ±0.30(P ＜0.05)、CD4+T 细胞数分别为4.86±0.90、3.14 ±0.69(P＜0.05);B2、B1组MHC-ⅡmRNA分别为21.12±1.15、14.14±0.80(P ＜0.05)、B7-2 mRNA分别为13.41±0.43、8.23±0.48(P ＜0.05)、CD4+T细胞数分别为43.57±2.07、18.86±0.69(P ＜0.05).结论 持续氧合血灌注供心有助于减轻或延缓急性排斥反应的发生.     

同种异位不停跳心脏移植模型的建立

目的:建立不停跳心脏移植模型,以便于与传统供心保存方法对比,研究缺血再灌注损伤对移植心脏各方面的影响.方法:采用活鼠替代体外循环机,经活鼠下腔静脉输血,腹主动脉氧合血灌注给供体心脏,维持供心有节律地跳动,并用双血管套管连接法把供心移植给受体,从而建立大鼠颈部不停跳心脏移植模型.结果:连续正式试验53次,移植成功50次,手术成功率94.3%.每例手术总时间90～120min,其中,受体颈部血管套管准备(18±3)min,供心摘取(33±5)min,颈部移植(8士1)min,体外灌注(15±2)min.结论:活鼠替代体外循环机模型辅助下,能够常规建立大鼠颈部不停跳心脏移植模型,不需要体外循环机,无需显微外科操作,是一种无缺血再灌注损伤、经济可靠、易于复制、新的器官移植研究动物模型.     

改良Heron法建立大鼠颈部心脏移植模型

目的:对Heron法建立心脏移植模型的手术方法进行改良,建立更合理、符合实验需要的心脏移植模型.方法:对Her-on法进行改良,将受体右颈外静脉套管插入供心右肺动脉,右颈总动脉套管插入供心主动脉,环扎固定,供心左肺动脉结扎,从而建立改良的大鼠颈部心脏移植模型.结果:单人操作连续进行正式试验52次,移植成功50次,成功率96.2%.全组受体无手术死亡,无吻合口漏血、血液回流障碍.每例手术总时间需50～60 min;受体血管套管准备时间为(18士3)min;供心摘取时间为(10士1)min;颈部移植时间为(6士1)min;冷缺血时间为(16士1)min.结论:改良Heron法建立大鼠颈部心脏移植模型,无需显微外科操作,是一种更合理、实用、稳定可靠和易于复制的器官移植研究动物模型.     

缺血再灌注损伤对移植心脏急性排斥反应的影响

目的:探讨缺血再灌注损伤对移植心脏急性排斥反应的影响.方法:分别建立有IRI(同种系和异系)和避免IRI(同种系和异系)4种大鼠异位心脏移植模型,并设立空白对照组,于术后第7天取供心检测移植心脏,采用RT-PCR方法检测移植心脏MHC-2 mRNA、B7-1/B7-2 mRNA表达情况及应用免疫组织化学染色方法观察CD4+T细胞在供心的浸润情况.结果:同种系两组心脏移植研究表明,IRI增强了移植心脏的免疫源性,但CD4+T细胞浸润情况两组间无明显差异(P>0.05);结合同种异系两组心脏移植研究表明,同种异系移植心脏的免疫源性比同种系两组心脏移植均明显增强,且IRI的异系组增加更明显,CD4+T细胞浸润情况更显著(P<0.05).结论:IRI促进移植心脏排斥反应的发生,不停跳心脏移植由于避免了IRI,因此有助于减轻急性排斥反应发生的强度或延缓急性排斥反应的发生.     

豚鼠骨髓间充质干细胞分离培养及形态学观察

目的：分离和培养豚鼠骨髓间充质干细胞（MMSCs）,并通过观察了解其细胞生物学特性。方法：利用MMSCs和其它细胞不同的生长特性,采用细胞差速贴壁法,以含10%（体积分数）标准胎牛血清的L-DMEM培养基培养;用2.5%胰蛋白酶、37℃条件下消化,按1∶2的比例传代;倒置相差荧光显微镜下逐日观察各代MMSCs形态及生长情况。结果：经数次换液和连续传代培养,红细胞等杂质逐渐减少,可得到形态较均一的MMSCs,其增殖速度和细胞活性良好。结论：细胞差速贴壁法经济可靠、操作简单、易于掌握,是体外分离培养MMSCs的可行的实验方法;以此法获得的豚鼠MMMSCs生长旺盛,活性好,增殖能力强。     

不停跳心脏移植模型的建立

目的：建立不停跳心脏移植模型，以便于与传统供心保存方法对比，研究缺血再灌注损伤对移植心脏的影响。方法：所用动物均为雄性Wistar大鼠。采用活体大鼠替代体外循环机，经大鼠颈总动脉输血，颈总动脉部分氧合血灌注给供体心脏，维持离体供心有节律地跳动，并用双血管套管连接法移植给受体，从而建立大鼠颈部不停跳心脏移植模型。结果：连续正式试验53次，移植成功50次，手术成功率94.3％。每例手术总时间90-120min，其中，供心摘取（33&#177;5）min，颈部移植（8&#177;1）min，体外灌注（15&#177;2）min。结论i活体大鼠替代体外循环机模型辅助下，能够常规建立大鼠颈部不停跳心脏移植模型，不需要体外循环机，无需显微外科操作，是一种无缺血再灌注损伤、经济可靠和易于复制的器官移植研究动物模型。