利用CRISPR/Cas9系统构建HeLa细胞Cdc25C基因敲除稳定细胞株

目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类宫颈癌细胞HeLa中的细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cycle 25 homolog C,Cdc25C)基因,构建Cdc25C基因稳定敲除细胞株.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别Cdc25C基因第一外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建真核重组表达质粒.测序鉴定后,将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选稳定敲除Cdc25C基因细胞株,再用免疫印迹方法鉴定细胞Cdc25C敲除效果.最后用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响.结果 筛选出稳定敲除Cdc25C基因细胞株,且Cdc25C敲除显著影响G2/M期进程.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源Cdc25C基因敲除细胞株,为研究Cdc25C在细胞周期进程的功能以及相关癌症的发生奠定了基础.     

非受体酪氨酸激酶c-Abl/Arg对细胞微管结构的影响

c—abl／Arg非受体酪氨酸激酶的主要生物学功能是参与细胞增殖分化、细胞周期和细胞凋亡的调控,并在氧化应激和DNA损伤修复过程中发挥重要作用。已有研究发现,绝大多数胞质c—Abl的C端可与F-肌动蛋白细胞骨架结合,因而c—Abl在调节肌动蛋白动态平衡、细胞形态以及细胞迁移等方面有着重要的作用。