不同厚度神经球冰冻切片免疫荧光细胞化学染色结果的比较

目的探索适合免疫荧光细胞化学染色的神经球最佳冰冻切片厚度。方法选取悬浮培养10～12 d的神经球,制作厚度分别为4、7、10μm的冰冻切片。采用免疫荧光细胞化学染色比较神经球神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达和定位。结果培养10～12 d的神经球直径为200～250μm,状态良好,折光性强,呈圆球状,周边有毛刺。4μm的神经球冰冻切片制作较难,容易卷片,但细胞层次清楚,染色均匀,密疏适宜,可较清楚计数细胞。成像清楚。胞核清晰,可见较多nestin染色阳性的完整胞质包绕4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色阳性的胞核,能观察更多的细胞间细节。7μm切片较4μm切片制作容易,切片较平整,细胞层次不如4μm切片清楚,染色较均匀。所含细胞数较4μm多,可粗略计算细胞数。荧光拍照不能完全对焦,可见部分完整细胞形态。10μm的冰冻切片制作相对容易,切片平整,但细胞层次不清楚,堆叠严重,成像不清楚,难以看到完整细胞形态。结论 4μm厚度的神经球冰冻切片较适合进行免疫荧光细胞化学染色和分析。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗唐氏综合征临床观察

目的探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗唐氏综合征患儿的有效性。方法海军总医院儿科自2012年11月—2014年11月收治的骨髓间充质干细胞移植的唐氏综合征患儿51例（年龄0.5～7岁）,骨髓动员后进行骨髓采集间充质分选,分别行右侧侧脑室穿刺1次及腰椎穿刺2次骨髓间充质干细胞移植。每次移植的细胞数为1×106/kg。每例患儿进行Gesell发育诊断量表评估,对术前6个月及术后6个月2个相同长度时间内发育速率进行自身对照观察。同时,对移植术后1、3、6个月患儿的发育情况进行追踪随访。结果51例中1例失访,余50例完成观察。其中32例在术后1~6个月逐渐出现不同程度智力、语言、运动进步,术后6个月患儿细动作能、应物能、应人能进步月份值较术前6个月明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞移植安全可靠,能改善唐氏综合征患儿智力和运动发育水平,且主要表现在情绪、细动作能、应人能及应物能的改善。     

骨髓间充质干细胞的培养和超顺磁氧化铁标记

目的探讨全血贴壁法培养成年大鼠骨髓间充质于细胞的可行性，寻找一种对间充质干细胞进行示踪的方法。方法取6～8周龄雄性SD大鼠胫骨、股骨，收集骨髓腔冲洗悬液直接培养，经多次换液、传代，免疫组化法检测CD34、CD44表达情况。以超顺磁氧化铁和P1代间充质干细胞共同孵育培养24h，普鲁士蓝染色评价标记效率，台盼蓝染色检验标记后细胞的活性。结果全血贴壁法培养的大鼠间充质干细胞贴壁，呈纤维细胞样生长，CD44阳性细胞比率为96％，不表达CD34。经超顺磁氧化铁标记后，普鲁士蓝染色标记效率为90％，标记后98％的细胞保持活性。结论全血贴壁法能成功培养大鼠间充质干细胞，超顺磁氧化铁可以安全、有效地标记间充质干细胞。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗重度精神发育迟滞儿童临床观察

目的观察自体骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cell,BM MNC)移植治疗重度精神发育迟滞(mental retardation,MR)儿童的临床疗效。方法海军总医院儿科自2011年1月—2012年3月收治的重度MR患儿40例(年龄2~14岁),骨髓动员后进行BM MNC分选,分别进行右侧颈动脉穿刺1次及腰椎穿刺3次行BM MNC移植。每次移植的BM MNC细胞数为1×106 /kg。每例患儿对其进行术前6个月及术后6个月自身对照观察,采用家长随访量表,评估2个相同长度时间段内患儿智力、运动的发育状态。同时对移植术后1、3、6个月及1年患儿的发育情况进行追踪随访分析。结果40例中3例失访,余37例完成评估随访。其中,术后有明显进步19例,有效率为513%;患儿在术后3 d至1个月逐渐出现不同程度的变化,持续至术后6个月后无再进步病例。随访量表进步值术前6个月为（469±433）分,术后6个月为(1604±1254)分,进步幅度术后较术前明显增加,差异有统计学意义(P<0．01)。结论自体BM MNC移植安全可靠,能在短时间内改善重度MR患儿智力发育水平,移植及手术不良事件极其轻微。     

人神经前体细胞移植治疗儿童广泛性发育障碍初探

目的：观察人神经前体细胞（hNPCs）移植治疗儿童广泛性发育障碍的安全性及疗效。方法：对22例广泛性发育障碍患儿进行研究,其中孤独症9例,Rett综合征13例,经颅骨钻孔侧脑室穿刺注射hNPCs治疗。分别于手术前、术后1个月、术后6个月、术后1年采用孤独症行为评定量表（ABC）对移植患儿进行评估。结果：治疗及随访过程中无严重不良事件发生。移植后22例患儿中,1例失访,17例患儿临床症状出现不同程度的改善,其中孤独症患儿8例,Rett综合征患儿9例。孤独症患儿行ABC量表评估后发现,术后6个月交往因子得分,以及术后1年ABC总分、交往及语言因子得分均低于术前,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：临床应用hNPCs移植治疗儿童广泛性发育障碍是安全、可行的,并具有一定疗效,有必要扩大观察病例数进一步研究。     

超顺磁性氧化铁标记神经干细胞及对其生物学特性的影响

背景:细胞标记与核磁共振联合,可无创性活体标记移植的神经干细胞存在部位、存在方式及其一些生物学特性.目的:观察超顺磁性氧化铁体外标记人神经干细胞的效果.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-12/2007-06在解放军海军总医院儿科实验室完成.材料:流产人胚胎由解放军海军总医院提供.超顺磁性氧化铁,Lot number97060601,为Advanced magnetics,inc.American 产品.方法:取人胚胎脑海马组织,机械法分离单细胞悬液,加入含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的神经干细胞培养基体外培养.取11.2 g/L.超顺磁性氧化铁,用神经干细胞培养基稀释成28 mg/L.后,加入1.0 mg/L多聚赖氨酸8μL混匀,制成超顺磁性氧化铁一多聚赖氨酸复合物的标记培养基.取增殖活跃的神经干细胞球,机械吹散制成浓度为1×109 L-1的单细胞悬液,加入等体积的含超顺磁性氧化铁的无血清培养液.1周后撤除各种细胞因子,添加体积分数为5%的胎牛血清诱导神经干细胞分化24 h.主要观察指标:普鲁士蓝染色鉴定标记阳性率,免疫荧光染色检测分化细胞胶质纤维酸性蛋白和神经丝的表达. 结果:超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞球颜色微黄,与末标记细胞比较,其克降形成的速度并没有减慢.经超顺磁性氧化铁标记20 h后,神经干细胞胞浆中含有蓝色铁颗粒,阳性率达90%.诱导后超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞胶质纤维酸性蛋白、神经丝均呈阳性表达.结论:在体外超顺磁性氧化铁能够高效标记神经干细胞,且标记后不影响其生物学特性,仍可以正常扩增和定向分化为神经元、星形胶质细胞.     

人神经干细胞移植治疗脑性瘫痪并重度视觉障碍患儿的疗效

目的 观察人神经干细胞(NSCs)移植治疗脑性瘫痪(CP)并重度视觉障碍患儿的临床疗效,探讨重度视觉障碍患儿可能的治疗方法.方法 11例严重视觉障碍的CP患儿行人NSCs移植.取孕11周正常发育人胚胎前脑细胞,在培养基中进行培养,培养基中添加表皮生长因子20μg/L、碱性成纤维细胞生长因子10μg/L、白血病抑制因子1μg/L,培养至第14天,获取生长旺盛的NSCs小集落.制成细胞悬液,并经前肉穿刺注入患儿右侧侧脑室.术后即进行临床视觉功能的观察,同时第28天进行闪光视觉诱发电位(F-VEP)、功能核磁(fMRI)及眼底复查,术后视觉检查追踪至6个月.结果 移植后7例患儿在术后第6-13天即出现视觉功能改善,表现为临床视物及视物追踪的明显好转.同时伴F-VEP、fMRI的改变.另4例患儿无效.无1例患儿出现病情的倒退及其他不良并发症.结论 人NSCs移植能改善部分CP并重度视觉障碍患儿的视觉功能.实用儿科临床杂志,2009,24(10):771-773     

脂肪干细胞生物活性分泌物防治早产儿脑白质损伤的安全性及早期疗效北大核心CSCD

目的探索脂肪干细胞生物活性分泌物（ASCBS）鞘内注射防治早产儿脑白质损伤（WMI）的安全性和疗效。方法按统一标准在多个医疗中心分3个胎龄组募集63例WMI早产儿,A组：胎龄24～28^＋6周,21例;B组：胎龄29～32^＋6周,20例;C组：胎龄33～36^＋6周,22例。各胎龄组以抛硬币的方法随机分为治疗组及对照组,治疗组连续3 d每天1次腰椎穿刺并鞘内注射ASCBS。于矫正胎龄足月进行新生儿行为神经测定（NBNA）,于矫正月龄6个月通过贝利婴幼儿发展量表（BSID）、Peabody运动发育量表第2版（PDMS-2）进行神经发育评估,比较2组间早产儿存活率、NBNA评分、智力发育指数（MDI）、精神运动发育指数（PDI）及PDMS-2发育商。结果63例中包括治疗组31例,对照组32例,所有病例中只有治疗组1例失访。治疗组未发现治疗相关不良反应,所有胎龄组中治疗组及对照组存活率及早产并发症发生率比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。治疗A组的纠正6月龄的粗大运动发育商及总运动发育商高于对照A组,差异均有统计学意义（粗大运动发育商：治疗A组98.330±6.282、对照A组90.330±3.777,P＝0.040;总运动发育商：治疗A组97.330±4.803、对照A组91.000±4.472,P＝0.023）,其余结果未发现组间差异。结论ASCBS治疗早产儿WMI具有较好安全性,并能促进24～28周出生胎龄早产儿的运动发育。     

人神经前体细胞移植治疗新生儿获得性脑损伤的临床观察

目的 观察人神经前体细胞(human neural precursor cells,hNPCs)移植治疗新生儿获得性脑损伤的临床疗效.方法 6例重度获得性脑损伤新生儿行人hNPCs移植.其中1例为生后5 d一氧化碳中毒导致的极重度脑损伤;1例是低血糖脑损伤;其余患儿均为出生前后窒息缺氧导致重度缺氧缺血性脑病(HIE),Apgar评分5 min≤5分,临床表现、体征及辅助检查均符合重度HIE诊断.在医院伦理学委员会通过及患儿家长知情同意的情况下,于生后第4～20天行神经前体细胞移植治疗;神经前体细胞取自孕12周自然流产胚胎的前脑细胞,经体外培养扩增为hNPCs球,并经侧脑室穿刺注入患儿脑室.结果 移植后第2天,所有患儿的吸吮、吞咽反射逐渐恢复,肌张力开始恢复,惊厥缓解;3例28 d时新生儿行为神经测定(NBNA)评分恢复止常水平,术后12个月的随访结果显示,4例恢复正常,2例出现后遗症表现,诊断脑性瘫痪.结论 人hNPCs移植对重度新生儿获得性脑损伤患儿有治疗作用,能明显减低其致残率.