非临床专业解剖学线上教学的效果分析与思考*

为有效应对疫情,确保疫情防控期间"停课不停学"[1-4],重庆医科大学积极开展疫情期间线上教学工作.非临床专业的解剖学学时少,本教研室结合其教学目标制定了全新的线上教学模式,并积累了一些经验.在后疫情时代,对于这些专业,仍延续线上教学为主的教学模式.现将本教研室在疫情期间线上课程建设的过程及存在的问题进行浅析,供同行参考.     

大鼠脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变及MBP、Id2的表达变化

目的 分析脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脱髓鞘病变与髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)的表达变化之间的关系,以探讨CSCI脱髓鞘病变机制.方法 采用自行设计的方法制作SD大鼠CSCI模型,通过锇酸染色检测CSCI后1、3、7d有髓神经纤维变化;运用免疫荧光双标和免疫印迹(Westem blot)检测MBP及Id2的表达变化.结果 CSCI后出现脱髓鞘病变,并随着压迫时间延长,髓鞘逐渐发生水肿、变性、崩解;脊髓损伤后MBP表达下调,其表达趋势与脱髓鞘溃变的严重程度一致;CSCI后,Id2广泛分布于白质,随着压迫时间延长,其表达逐渐上调.结论 Id2表达上调,并负向调控MBP基因启动子的活性,使MBP的表达下降,是CSCI后神经纤维脱髓鞘病变的机制之一.     

水通道蛋白-4在大鼠睾丸和附睾中的表达

目的 观察水通道蛋白-4（AQP4）在雄性大鼠睾丸和附睾的表达及分布特点，为探讨水通道蛋白在睾丸和附睾中的作用提供形态学基础。方法 采用免疫组织化学的方法，检测AQP4在睾丸和附睾的表达分布。结果 AQP4在睾丸中表达于各级生精细胞、支持细胞以及间质细胞中；在附睾管内表达于柱状上皮细胞，且腔面表达更明显。结论 AQP4可能参与了精子的生成及成熟过程，在激素的分泌调节中发挥作用。     

康复训练联合神经肌肉电刺激对有机磷迟发性神经病的疗效

目的 观察康复训练联合神经肌肉电刺激(NMES)对有机磷迟发性神经病(OPIDP)的疗效.方法 44例OPIDP患者,随机分为对照组和试验组,每组22例.对照组入院后开始康复训练;试验组患者在此基础上增加NMES治疗.比较两组患者简式Fugl-Meyer评定量表(FMA)评分、改良Barthel指数(MBI)评分、Berg平衡量表(BBS)评分和尺神经和腓总神经的神经传导速度.结果 治疗10周后,两组FMA评分、MBI评分和BBS评分均高于治疗前,且试验组评分优于对照组(P＜0.05).治疗10周后,两组神经传导速度也快于治疗前,且试验组快于对照组(P＜0.05).结论 康复训练可以促进OPIDP患者的神经功能恢复,提高OPIDP患者运动能力、平衡能力和日常生活活动能力;在此基础上联合NMES治疗可进一步提高OPIDP患者的临床疗效.     

Notch-1对嗅成鞘细胞脑源性神经营养因子表达的影响

目的:观察Notch-1对嗅成鞘细胞(OECs)脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,为增强OECs对中枢神经系统损伤的修复能力提供实验基础.方法:将有活性的Notch质粒(NotchICV),无活性的Notch质粒(NotchVK)以及空白质粒转入OECs中,将实验对象分成活性质粒组、非活性质粒组和空白组,通过免疫荧光双标、RT-PCR及免疫印迹技术检测各组OECs中BDNF的表达变化.结果:活性质粒组OECs中BDNF及其mRNA的表达较非活性质粒组和空白组均增高,而非活性质粒组和空白组比较无差异.结论:Notch-1转染OECs后,其BDNF的表达上调,提示Notch-1能增强OECs中BDNF的合成.     

脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变及caspase-12表达变化

目的 研究脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脱髓鞘病变与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)表达变化之间的关系,探讨CSCI后脱髓鞘病变机制.方法 成年SD大鼠75只,按随机数字表法分为5组:正常组、对照组、压迫1d组、3d组、7d组,每组15只.采用自行设计制作的脊髓压迫模型,通过电镜和TUNEL染色、免疫荧光双标分别检测各组CSCI后神经纤维脱髓鞘的超微结构以及少突胶质细胞凋亡情况;运用免疫印迹技术检测与细胞凋亡有关的caspase-12表达.结果 CSCI后神经纤维出现脱髓鞘病变,并随着压迫时间延长而逐渐加重;脊髓损伤后出现少突胶质细胞凋亡,压迫7d组与正常组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).caspase-12表达也随压迫时间延长而上调.结论 caspase-12介导了少突胶质细胞凋亡,是CSCI后神经纤维脱髓鞘病变的机制之一.     

脑出血脑组织中水通道蛋白4的极性表达缺失

目的：观察脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）大鼠脑组织中水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的极性表达变化情况,以初步探讨其在出血性脑水肿中的作用。方法：SD大鼠随机分为sham组和ICH组,采用自体血注入法建立大鼠ICH动物模型,应用核磁共振成像检测血肿产生及发展情况,干湿重法检测脑水含量变化以及免疫荧光检测AQP4的极性表达变化情况。结果：ICH后1 d,血肿体积最大,脑水含量达到峰值,高达（79.769±0.710）%,差值具有统计学意义（P=0.000）;血肿周围组织中AQP4极性表达缺失,AQP4表达在星胶细胞胞体和突起上,而sham组中AQP4则极性表达在星胶细胞终足膜上。结论：ICH后血肿周围组织中AQP4极性表达缺失,后者可能促进了出血性脑水肿的发生。     

电针对大鼠脊髓压迫性损伤后髓鞘再生的影响

目的观察电针对大鼠脊髓压迫性损伤（CSCI）后DNA结合抑制物2(Id2)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化,探讨髓鞘再生的机制。 方法将54只SD大鼠分为对照组和治疗组,每组27只,再根据取材时间点的不同各分为3 d、7 d和14 d三个亚组,每个亚组9只大鼠。治疗组采用自行设计的大鼠脊髓压通器制作脊髓压通性损伤模型,针刺脊髓损伤节段局部夹脊穴、双侧足三里和双侧太溪穴,并于双侧足三里和太溪穴进行电针刺激（连续波,输出频率为2 Hz,电压1.5 V,30 min）。对照组只造模,不治疗。2组大鼠均于对应时间点取材,运用电镜观察脊髓损伤节段髓鞘的超微结构;采用免疫印迹技术和免疫荧光双标从分子水平检测Id2及MBP的表达变化。 结果CSCI后,荧光双标结果显示,造模后第3天,对照组大鼠的Id2免疫阳性少突胶质细胞数目为（20±2）个/高倍镜视野,并在造模后第14天下降至（16±1）个/高倍镜视野,组内各时间点Id2免疫阳性少突胶质细胞数目比较,差异无统计学意义（P&rt;0.05）。造模后第3天,治疗组大鼠Id2免疫阳性少突胶质细胞为（13±1）个/高倍镜视野,造模后第14天降至（7±1）个/高倍镜视野,组内各时间点Id2免疫阳性少突胶质细胞数目比较,差异有统计学意义（P<0.05）,并与同时间点的对照组比较,差异亦有统计学意义（P<0.05）。Western结果显示,造模后第3天,对照组和治疗组Id2蛋白表达分别为（1.12±0.12）和（0.67±0.01）,造模后第14天,对照组和治疗组Id2蛋白表达分别下降至（0.86±0.02）和（0.25±0.01）,与组内造模后第3天比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,2组相同时间点Id2蛋白表达组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。造模后第3天,对照组和治疗组的MBP蛋白表达分别为（0.44±0.02）和（0.67±0.04）,造模后第14天,对照组和治疗组MBP蛋白表达均分别上调至（0.95±0.04）和（1.74±0.09）,与组内造模后第3天比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,2组相同时间点的MBP蛋白表达比较,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论电针刺激可调节Id2的表达从而负向调控MBP的表达。     

低渗状态下星形胶质细胞AQP8的表达变化

目的 探讨低渗透压作用下,星形胶质细胞水通道蛋白8(aquaporin8,AQP8)的表达变化规律.方法 原代培养大鼠星形胶质细胞,随机分为对照组(常规培养液)和低渗组(268、254、240 mmol/L),每组分别作用1、3、6、12、24 h,共5个时间点.通过MTT比色法检测细胞活力,免疫细胞化学、免疫荧光、Real time-PCR研究AQP8及其mRNA的表达变化.结果 对照组星形胶质细胞的细胞形态、细胞活性、AQP8及其mRNA的表达在各时间点均无明显变化(P>0.05).低渗组中,星形胶质细胞水肿,细胞活性下降;AQP8及其mRNA的表达水平随低渗程度的下调和低渗作用时间的延长而增强.低渗液(268、254、240 mmol/L)作用后,免疫细胞化学显示星形胶质细胞的AQP8表达从低渗作用1 h的(0.258 3±0.009 8, 0.280 0±0.010 9, 0.281 7±0.007 5) 到低渗作用24 h的(0.385 0±0.010 9, 0.406 7±0.007 0, 0.425 0±0.010 4) (P<0.05);Real time PCR显示:AQP8与beta-actin 的mRNA水平比从低渗作用1 h的(0.127 5±0.011 8,0.134 4±0.032 4, 0.167 5±0.007 8)上升到(3.278 0±0.121 2,5.410 4±0.104 1,8.351 0±0.288 0).结论 低渗作用下,AQP8介导的水分子运输可导致星形胶质细胞肿胀,继而引发细胞结构、功能的损伤; AQP8的表达上调可能是导致星形胶质细胞水肿形成和发展的重要分子机制之一.     

SOCS3对人肝癌MHCC97-H细胞上皮间质转化的影响

目的:研究细胞因子信号转导抑制因子3（suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3）对人肝癌细胞MHCC97-H细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:体外培养人肝癌高转移细胞株MHCC97-H,应用25 nmol/L的SOCS3 siRNA瞬时转染细胞（阳性转染组）,同时使用空质粒转染细胞（阴性对照组）。24 h后用荧光显微镜观察转染后的细胞荧光表达情况。48 h后,应用倒置显微镜观察细胞形态变化情况,采用细胞免疫荧光染色法检测MHCC97-H 细胞中EMT的上皮标志物E-cadherin和间质标志物α-SMA的表达情况。结果:与阴性对照组相比,SOCS3 siRNA成功转染的MHCC97-H细胞显示出绿色荧光。SOCS3 siRNA瞬时转染后肝癌细胞从呈现上皮样特征的鹅卵石形态,向具有间质细胞形态的纺锤形和梭形特征发生转变。免疫细胞荧光检测E-cadherin和α-SMA的表达结果显示,SOCS3 siRNA阳性转染组上皮标志物E-cadherin的免疫荧光表达明显减弱,而细胞的间质标志物α-SMA的免疫荧光表达显著增强。结论:本实验研究显示,下调肝癌细胞的SOCS3表达,其通过改变细胞的EMT表型分子及表型特征,促进肝癌的增殖,提示SOCS3可能在肝癌细胞的EMT中发挥着重要作用。调控SOCS3表达水平可以抑制肝癌的发生发展,为临床防治肝癌提供了新思路。