转铁蛋白受体1对淀粉样蛋白前体/早老素1转基因小鼠神经元的保护作用

目的 探讨转铁蛋白受体1(TfR1)在淀粉样蛋白前体（APP）/早老素1（PS1）转基因小鼠脑内异常表达情况及其对阿尔茨海默病（AD）神经元的保护作用。 方法 首先,利用免疫荧光及Western blotting技术检测出生后1月（P1M）至P12M各发育时间点,APP/PS1转基因小鼠与野生型小鼠大脑TfR1的表达情况;其次,取APP/PS1转基因与野生型新生小鼠原代海马神经元培养,培养12 d后利用TfR1 shRNA质粒干扰TfR1基因的表达,利用Western blotting技术检测干扰后细胞TfR1的表达变化;ELISA技术检测TfR1干扰前后细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)_1-42的分泌量;利用微管相关蛋白2(MAP2)标记神经元突起,观察TfR1干扰前、后神经元突起的生长变化;最后,利用FM1-43染色观察由TfR1介导的轴质运输中囊泡的运输情况。 结果 在APP/PS1转基因小鼠生长发育过程中,随着年龄的增长TfR1的表达呈现先增加后减少的趋势,在P6M之后明显降低,且与对照组相比差异有显著性;TfR1 shRNA 干扰后可以使原代神经元细胞内TfR1基因沉默,使其突起明显变细、变长并影响囊泡的运输。与对照组相比,TfR1基因在APP/PS1转基因小鼠原代神经元中表达量减少,荧光减弱。 结论 APP、PS1基因突变可导致TfR1的表达下降;APP/PS1转基因小鼠原代神经元经TfR1 shRNA干扰Aβ_1-42分泌量增多,影响神经元突起的生长,使轴质运输速率减慢,囊泡的活动减缓,加重AD病情。故TfR1的表达可以对神经元起到保护作用。     

淀粉样蛋白前体/早老素1转基因小鼠大脑皮质内kinesin1介导的神经元轴浆运输障碍

目的 探讨轴突运输蛋白,kinesin1和神经丝蛋白（SIM-312）在阿尔茨海默病(AD)发生、发展中的作用。 方法 出生后30～360 d淀粉样蛋白前体（APP）/早老素1（PS1）转基因小鼠（n＝40）和野生型小鼠（n＝40）用于此研究,利用免疫荧光染色和Western blotting技术检测上述两种小鼠大脑皮层内老年斑的沉积及星形胶质细胞的分布以及在大脑皮质发育过程中kinesin1和SIM-312阳性细胞个数及蛋白的表达变化。 结果 APP/PS1转基因小鼠与正常对照组相比,β-淀粉样蛋白（Aβ）斑块增多,星形胶质细胞数目增多,神经元减少;而kinesin1阳性细胞的数量在APP/PS1转基因小鼠生长发育过程中减少,且在出生9月（P9M）之后与野生型小鼠之间差异存在着显著性 (P<0.05);SIM-312标记的神经丝蛋白随着年龄的增长自P6M之后开始出现缠结现象。 结论 Kinesin1和SIM-312的异常改变导致神经元中轴浆运输障碍以及AD的病理变化。     

浅谈人类脑与智力进化

人脑是生物进化最高产物,人类智力以S型模式由低级向高级演变,故现代人处于智力进化的第二个缓慢发展阶段。人类的智商是有限的,但是人类认识自然、认识社会是无限的。提高人类智力应当在勤用脑,抗衰老,延年益寿上下功夫。     

孕期酒精暴露对子代小鼠视皮质N-SMase/Cer的影响

目的探讨孕期酒精暴露后子代小鼠大脑视皮质神经酰胺(ceramide,Cer)和中性鞘磷脂酶(sphingomyelinase,N-SMase)的变化趋势。方法通过建立孕期酒精暴露模型鼠,利用免疫荧光技术和荧光分光光度法检测各实验组Cer和NSMase的变化趋势。结果孕期酒精暴露后子代小鼠大脑视皮质神经细胞Cer含量和N-SMase酶活性较对照组明显增加,差异具有统计学意义。结论孕期酒精暴露可导致子代小鼠视皮质神经细胞N-SMase酶活性增加,水解鞘磷脂生成Cer,最终诱导细胞凋亡。     

煮沸裂解法快速提取Tg2576小鼠DNA

目的 建立Tg2576小鼠DNA快速简便高效的提取方法.方法 借鉴煮沸裂解法制备质粒DNA方法,改进后用于提取Tg2576小鼠DNA,比较酚/氯仿法和煮沸裂解法两种提取DNA的方法.结果 在小鼠鉴定过程中,使用酚/氯仿法和煮沸裂解法提取DNA均能取得满意的结果；但前者操作繁琐,至少需2d完成,而后者操作步骤大大简化,可...     

Cajal-Retzius细胞调节锥体细胞顶树突发育及海马片层化的形成

目的 探讨Cajal-Retzius(CR)细胞与海马锥体细胞顶树突发育以及海马片层化形成的关系.方法 利用DiI示踪法标记槽通路和穿通通路,并采用微管蛋白(tubulin)、神经元核抗原(NeuN)和Reelin免疫荧光染色法,对120例小鼠苔藓纤维的发生、锥体细胞顶树突的生长以及海马分子层Reelin阳性的CR细胞...     

胼胝体与穹窿连合纤维的来源与发育

目的:研究小鼠胼胝体联合和穹窿连合的发生、发育以及细胞来源.方法: 利用快蓝活体示踪和DiI离体示踪技术对不同日龄的胚胎以及生后胼胝体联合和穹窿连合进行了顺行和逆行示踪.结果: 穹窿连合约在胚胎第16天左右形成,而胼胝体连合在胚胎18天左右形成.穹窿连合的纤维主要由海马CA3区锥体细胞、门细胞及内嗅皮质和下托锥体细胞所...     

大脑皮质类器官培养及其在中枢神经系统疾病中的应用

文题释义： 大脑皮质类器官：利用三维细胞培养的方法,在合适的条件下将多能干细胞从单细胞生成一种能发育成神经上皮并具有类似活体大脑组织的复杂结构。 自我重组：像胚胎干细胞或诱导性多能干细胞这一类的多能干细胞,具有自发发育成某些原始结构的趋势。 背景：大脑组织是人体发育最复杂的结构,许多人类大脑疾病难以在动物体内重现,因此建立大脑发育的体外模型具有非常重要的研究价值。最近几年随着干细胞领域的飞速发展,出现了一种人工组织培养技术,即通过体外三维培养的方式,将干细胞从单个细胞生成一种复杂的、类似活体组织的结构,这种结构称为类器官。 目的：文章从大脑类器官的培养现状、发生机制、组织学特征及在神经系统疾病中的应用等多个方面综述了近年来大脑类器官的研究进展,并分析了目前大脑类器官的研究缺陷,旨在为相关领域的研究提供参考。 方法：由第一作者检索1998年1月至2019年6月中国知网、万方、PubMed数据库相关文献,检索词为“类器官、大脑类器官、胚胎干细胞、诱导性多能干细胞、神经发生、大脑皮质、发育、神经退行性疾病”“organoids,cerebral organoids,embryonic stem cells,induced pluripotent stem cells, neurogenesis,cerebral cortex,development,neurological diseases,self-organization”,纳入45篇文献进行综述。 结果与结论：利用多能干细胞自我重组的特性及添加神经诱导因子的方法,在体外可以有效产生大脑皮质类器官。作为一种全新的生物培养技术,大脑类器官在研究活体组织的发育、疾病形成的机制、组织替代疗法以及药物实验等方面都有很大的研究和应用价值。 ORCID: 0000-0002-8700-3030(范文娟) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Reelin在小鼠穿通纤维及大脑连合纤维寻径中的作用

目的通过对比野生型小鼠和Reeler小鼠穿通通路及连合纤维的发育,探讨Reelin在穿通通路及连合纤维寻径中的作用。方法共取野生型小鼠(WT)和Reelin基因缺失小鼠(Reeler),从胚龄16 d(E16)至出生7d(P7)各年龄点,共123例。采用Di I/Di O离体示踪技术对不同年龄点的WT小鼠及Reeler小鼠的穿通通路及连合纤维进行顺行和逆行示踪。结果 1.穿通通路主要由内嗅皮质第Ⅱ层和第Ⅳ层神经元所发出,在E16时进入海马腔隙分子层,P1时穿通纤维出现在齿状回,P7时穿通纤维形成致密纤维束终止于齿状回外分子层2/3;Reeler小鼠的穿通通路出现明显的发育延迟并且投射纤维分布紊乱;2.穹隆连合纤维主要由海马CA3锥体细胞,门细胞及内嗅皮质Ⅱ~Ⅳ层神经元发出,在E16时形成;Reeler小鼠穹隆纤维与WT小鼠在发育中无明显区别;3.胼胝体连合纤维主要由新皮质Ⅱ~Ⅳ层神经元及纹状体神经元所投射,在E18时形成并向对侧皮质进行纤维投射,并且投射部位出现对称分布,P3时一侧胼胝体纤维到达对侧纹状体。Reeler小鼠胼胝体投射的皮质神经元向对侧新皮质投射出现延迟。结论 Reelin可能是穿通通路及连合纤维发育的导向因子。Reelin的缺失导致穿通通路发育延迟,并且连合纤维在皮质的细胞来源及穿通通路细胞来源紊乱。