高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立

目的 对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞(OPCs)。方法 新生1~2 d Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8 d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2 d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果 光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论 通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。     

血红蛋白诱导的HO-1对离体星形胶质细胞损伤作用的研究

目的探讨血红蛋白(hemoglobin,Hb)诱导的血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对离体星形胶质细胞的损伤作用。方法体外培养纯化获得星形胶质细胞,采用荧光标记胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)鉴定细胞;实验分为正常组、Hb组及HO-1活性抑制剂锌原卟啉(ZnPPIX)+Hb组。Hoechst 33342及CCK-8法检测细胞损伤情况;Western blot检测HO-1、p-JNK、JNK、Bcl-2及Bax等蛋白的表达情况;RT-PCR检测HO-1的mRNA表达情况。结果 GFAP鉴定显示97%以上的细胞为星形胶质细胞;HO-1检测结果显示:40μmol/L的Hb可显著诱导HO-1 mRNA及蛋白的表达(P<0.001);Hoechst33342及CCK-8检测结果显示:40μmol/L的Hb对离体星形胶质细胞具有损伤作用,而ZnPPIX可明显减轻上述损伤;Western blot检测结果显示:HO-1被诱导高表达时p-JNK及Bax蛋白的表达水平也显著升高而Bcl-2蛋白的表达水平显著下降(P<0.01),ZnPPIX...     

RhoA蛋白参与凝血酶对胎鼠大脑皮层神经元的损伤

目的 探讨凝血酶诱导的胎鼠大脑皮层神经元损伤与RhoA蛋白活化表达的关系.方法 体外培养胎鼠大脑皮层神经元8d后,采用Western blotting检测不同浓度凝血酶(0、1、10、30和100 U/mL)作用3h后及30 U/mL凝血酶作用不同时间(0、0.5、1、3和6h)对皮层神经元RhoA蛋白活化表达的影响;RhoA蛋白活化抑制剂Exoenzyme C3预处理0.5 h及30 U/mL凝血酶作用皮层神经元3h后,行Western blotting检测RhoA蛋白活化表达的情况,并采用Hoechst33258核染色及CCK-8法观察Exoenzyme C3预处理和未处理时凝血酶对皮层神经元的损伤情况. 结果 在浓度实验中,30 U/mL凝血酶作用皮层神经元3h后能明显增加RhoA膜蛋白表达,与0U/mL组相比差异有统计学意义(P＜0.05);而各浓度凝血酶对RhoA总蛋白表达无明显影响.在时程实验中,与其他时间点相比,30 U/mL凝血酶在3h时能明显增加RhoA膜蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.05),但对RhoA总蛋白表达也无明显影响.在Exoenzyme C3干预实验中,Exoenzyme C3预处理组与凝血酶组相比,RhoA膜蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);Hoechst3258核染色显示,与凝血酶组相比,Exoenzyme C3预处理组中核浓染细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);CCK-8法检测细胞活性显示,凝血酶组细胞存活率明显低于Exoenzyme C3预处理组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 凝血酶诱导的胎鼠大脑皮层神经元损伤与RhoA膜蛋白的高表达即RhoA蛋白活化表达有关.     

槲皮素对大鼠缺氧损伤体外培养少突胶质前体细胞增殖的作用

目的:探讨槲皮素(Quercetin,Qu)对大鼠缺氧损伤后少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的作用。方法:取新生1～2 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质细胞进行原代培养,振荡分离后纯化3 d行Olig2和A2B5免疫荧光染色鉴定。纯化的细胞分为正常对照组、模型组(缺氧9 h)和Qu处理组(3,9,27,81μmol/L)。缺氧后3 d光镜下观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞存活率,Olig2免疫荧光染色计数阳性细胞数。结果:纯化培养3 d的细胞胞体呈圆形,有双极或三极突起。免疫荧光染色显示,绝大部分细胞为A2B5和Olig2阳性,A2B5/DAPI阳性细胞率为98.54%。缺氧9 h后,模型组很多细胞出现突起皱缩或崩解,细胞密度较Qu处理组明显降低;培养至3 d,光镜下计数和CCK-8检测结果均表明9μmol/L和27μmol/L Qu处理组细胞数较模型组显著增加(P<0.01,P<0.05);Olig2免疫细胞化学染色结果进一步表明9μmol/L和27μmol/L Qu处理组OPCs数较模型组显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论:9μmol/L和27μmol/L Qu有促进缺氧损伤OPCs增殖的作用。     

高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立

目的对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞（OPCs）。方法新生1～2d Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。     

槲皮素对缺氧缺血性脑白质损伤新生大鼠学习记忆能力的影响

目的：研究槲皮素(QUE,黄酮类化合物) 对缺氧缺血性脑白质损伤新生大鼠学习记忆能力的影响。方法：生后3 d Sprague-Dawley（SD）大鼠60只,随机分成对照组、模型组和QUE处理组（20 mg/kg 和40 mg/kg）,每组15只。模型组和QUE处理组行右侧颈总动脉结扎及缺氧处理以建立缺血缺氧性脑白质损伤模型。QUE处理组每日给药一次,连续6 周。第6周时分别用Morris水迷宫及开场试验评价其学习记忆能力和行为情感。结果：从训练的第2天开始,模型组逃避潜伏时间（EL）明显长于对照组（P<0.01）, 20和40 mg/kg QUE处理组EL明显短于模型组（P<0.05）。模型组大鼠穿越原平台次数明显低于对照组（P<0.01）及两个QUE组（P<0.05）。开场试验显示,模型组大鼠后肢站立次数较对照组增加,中央区域驻留时间较对照组延长,QUE处理后大鼠后肢站立次数较模型组明显减少（P<0.05）,中央区域驻留时间明显缩短（P<0.05）。结论：QUE可以明显改善缺血缺氧性脑白质损伤新生大鼠的学习记忆及行为情感障碍,对中枢神经系统脑白质损伤具有保护作用。     

新生大鼠少突胶质前体细胞低糖缺氧损伤模型的建立

目的:利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)低糖缺氧损伤模型。方法:取新生1 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质,体外混合及纯化培养获得OPCs,O4免疫荧光染色鉴定;取纯化2 d的OPCs,分为正常组和Na2S2O4损伤组,Na2S2O4损伤组又分为0.5、1 h和1.5 h三组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;CCK-8法检测细胞存活率;透射电镜观察细胞超微结构。结果:免疫荧光染色鉴定显示纯化的细胞绝大部分为O4阳性;形态学观察显示,缺氧0.5 h,大部分细胞突起回缩,胞体变圆,颜色变暗,随低糖缺氧损伤时间的延长OPCs逐渐脱壁,1.5 h时只有少数贴壁细胞;CCK-8法检测显示损伤0.5、1 h和1.5 h组细胞的存活率显著降低,与正常组比较均有统计学意义,损伤后1.5 h与0.5 h比较,细胞的存活率具有显著性差异;电镜观察损伤1.5 h后的细胞,线粒体肿胀,有些细胞胞核固缩成块,细胞器破碎。结论:用浓度为2mmol/L Na2S2O4的低糖培养基处理OPCs 1.5 h可以建立有效的低糖缺氧损伤模型。     

优质护理服务对重症脑出血行气管切开术患者的效果与评价

目前，脑血管病的发病率越来越高，每年死于中风者近百万。据统计约40％出血加昏迷在入院1周内死亡，发病后30 d内病死率为40％～80％。脑出血昏迷患者常因急性喉头水肿、舌后坠、呼吸道分泌物、呕吐物阻塞、食物误吸等原因引起窒息，严重危及生命，进行气管切开术处理及高效的护理措施是决定抢救成功与否及预后效果的关键。由于各种条件和因素的影响，如术后护理不当，不细致的观察，常会出现严重并发症。我院于2011年1月起在我科开始实行优质护理服务，本次研究选取115例脑出血重症行气管切开术后患者，对其进行优质护理服务，结果如下。     

缺血缺氧性脑损伤对新生3日龄幼鼠学习记忆及情感行为的影响

目的 观察缺血缺氧对新生3日龄SD大鼠生长发育、学习记忆以及情感行为等的影响,建立早产儿缺血缺氧性脑白质损伤的动物模型.方法 结扎幼鼠右侧颈总动脉,2 h后再置缺氧仓缺氧处理2 h;对照组仅游离右侧颈总动脉.术后不同时间点对各组存活大鼠进行生长发育评价;术后第6周开始分别用Morris水迷宫和开场实验对大鼠学匀记忆能力和情感行为进行测评.结果 模型组大鼠存活率为80.6%,体重增长缓慢,从生后8～28 d与对照组相比均差异具有显著性(P<0.01);31.0模型组大鼠于7周内存在右侧眼睑持续闭合,对照组则无;同日龄8 d前翻正反射模型组大鼠所需时间较对照组长(P<0.05);Morris水迷宫实验显示模型组大鼠上台成功率较对照组显著降低(P<0.05),逃避潜伏时间较对照组明显延长(P<0.01);开场实验显示模型组大鼠后肢站立次数和中央区域驻留时间较对照组显著增加,两组间差异均存在显著性(P<0.01).结论 缺血缺氧损伤可导致新生幼鼠生长发育迟缓、学习记忆以及情感行为等障碍,用此法制作的动物模型可用于模拟新生儿缺血缺氧脑损伤的研究.     

槲皮素保护少突胶质前体细胞缺氧低糖损伤的体外研究

目的观察槲皮素(quercetin,QUE)对Na2S2O4联合低糖培养基诱导少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)缺氧低糖损伤的保护作用。方法建立OPCs缺氧低糖损伤模型(OGD);在所建模型基础上,通过检测OPCs相对存活率、LDH漏出率及观察细胞形态学变化,研究槲皮素对OPCs缺氧低糖损伤的保护作用,并比较QUE共孵育和预孵育对OPCs的保护效果。结果随OPCs损伤时间延长细胞凋亡数量增多,而QUE能提高OPCs相对存活率、降低LDH漏出率并改善其形态学变化,其神经保护作用有剂量效应,且共孵育比预孵育的保护效果更明显。结论槲皮素可通过提高OPCs相对存活率及减少LDH漏出率对缺氧低糖损伤的OPCs发挥保护作用。