兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景:角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系,包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等.目的:探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法,并对其生物学特性进行鉴定.方法:采用兔角膜缘组织块培养法,以人羊膜为载体,在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养.倒置显微镜观察其体外生长特征;苏木精-伊红染色以及扫描电镜观察其形态;AE5和P63单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定其蛋白表达.结果与结论:采用组织块培养法可在体外获得角膜缘上皮干细胞,能成功传代培养且保持较高增殖潜能.培养于去上皮羊膜上的干细胞可融合成片,呈"拉网"现象.原代角膜缘上皮干细胞AE5单克隆抗体染色阳性率低于5%,P63染色阳性达90%;随传代次数增加AE5染色阳性率增高,P63染色阳性率降低.结果显示兔角膜缘组织块培养法可以在体外成功获得角膜缘上皮干细胞,原代和传代细胞均具有干细胞特性,以羊膜为载体培养可形成角膜移植片.

Abstract：

BACKGROUND: How to establish a stable in vitro culture system, including location of corneal limbal epithelial stem cells, in vitro sample harvest, in vitro culture, vector selection, as well as identification methods, play a key role in corneal limbal epithelial stem cells culture. OBJECTIVE: To culture the isolated rabbit corneal limbal epithelial stem cells and to identify the biological properties of cultured cells. METHODS: The primary rabbit cornel limbal epithelial stem cells were isolated and cultured with tissue inoculation using human amniotic membrane as vector. The growth features of cells were observed under an inverted microscope. The morphology of cells was observed by hematoxylin-eosin staining and a scanning electron microscope. Furthermore, the monoclonal antibody AE5 and P63 two-step immunohistochemical staining were used to identify limbal epithelial stem cell protein expression. RESULTS AND CONCLUSION: The rabbit corneal limbal epithelial stem cells could be successfully cultured and maintained a relatively high value-added potential in vitro. Rabbit corneal limbal epithelial stem cells cultured on the amniotic membrane pull netted cellular layer. The AE5 monoclonal antibody positive rate of primary cultured cells was about 5% and P63 monoclonal antibody positive up to 90%. AE5-positive rate increased and P63-positive rate decreased with the increase in the number of subculture. The rabbit limbal epithelial stem cells can be successful culture and amplified on human amniotic membrane in vitro by limbal tissue culture method. The cultured cells maintain the characteristics of corneal epithelial cells. The rabbit corneal limbal epithelial stem cells can form grafts on the amniotic membrane.     

兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景:角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系,包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等.目的:探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法,并对其生物学特性进行鉴定.方法:采用兔角膜缘组织块培养法,以人羊膜为载体,在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养.倒置显微镜观察其体外生长特征;苏木精-伊红染...     

兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景：角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系,包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等。目的：探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法,并对其生物学特性进行鉴定。方法：采用兔角膜缘组织块培养法,以人羊膜为载体,在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养。倒置显微镜观察其体外生长特征;苏木精-伊红染色以及扫描电镜观察其形态;AE5和P63单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定其蛋白表达。结果与结论：采用组织块培养法可在体外获得角膜缘上皮干细胞,能成功传代培养且保持较高增殖潜能。培养于去上皮羊膜上的干细胞可融合成片,呈＂拉网＂现象。原代角膜缘上皮干细胞AE5单克隆抗体染色阳性率低于5%,P63染色阳性达90%;随传代次数增加AE5染色阳性率增高,P63染色阳性率降低。结果显示兔角膜缘组织块培养法可以在体外成功获得角膜缘上皮干细胞,原代和传代细胞均具有干细胞特性,以羊膜为载体培养可形成角膜移植片。     

兔角膜缘上皮干细胞体外扩增及生物学鉴定

背景：角膜缘干细胞体外培养的关键在于建立稳定的体外培养体系，包括角膜缘干细胞的定位、培养条件、载体选择和鉴别方法等。 目的：探索兔角膜缘上皮干细胞体外扩增方法，并对其生物学特性进行鉴定。 方法：采用兔角膜缘组织块培养法，以人羊膜为载体，在体外进行兔角膜缘上皮干细胞原代和传代培养。倒置显微镜观察其体外生长特征；苏木精-伊红染色以及扫描电镜观察其形态；AE5和P63单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定其蛋白表达。 结果与结论：采用组织块培养法可在体外获得角膜缘上皮干细胞，能成功传代培养且保持较高增殖潜能。培养于去上皮羊膜上的干细胞可融合成片，呈“拉网”现象。原代角膜缘上皮干细胞AE5单克隆抗体染色阳性率低于5%，P63染色阳性达90%；随传代次数增加AE5染色阳性率增高，P63染色阳性率降低。结果显示兔角膜缘组织块培养法可以在体外成功获得角膜缘上皮干细胞，原代和传代细胞均具有干细胞特性，以羊膜为载体培养可形成角膜移植片。     

丹参酮ⅡA对人肺癌细胞株A549/CDDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对人耐药非小细胞肺癌细胞株（A549/CDDP）增殖与凋亡的影响。方法体外培养A549/CDDP,以不同剂量组TanⅡA干预A549/CDDP,在48、72、96小时后用四氮唑盐（MTT）法检测活细胞OD值;采用Heochst33258荧光染色观察TanⅡA干预后细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR检测用药后A549/CDDP survivin和Bax基因表达;流式细胞术检测TanⅡA干预后细胞周期分布。结果在0.6-5.0 mg/L浓度范围内,TanⅡA对A549/CDDP均有增殖抑制作用,并呈剂量依赖趋势,在96小时各组增殖抑制率达高峰;5.0mg/L 72小时组,形态学观察细胞凋亡明显;2.5、5.0 mg/L 72小时组,survivin DNA条带强度较对照组减弱,BaxDNA条带强度较对照组明显增强;流式细胞术检测显示TanⅡA明显抑制A549/CDDP进入增殖周期,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 TanⅡA可诱导凋亡抑制A549/CDDP增殖并影响细胞周期,其分子机制可能与survivin下调,Bax上调有关。