神经内科住院医师规范化培训考核指标评价体系研究

运用德尔菲法建立神经内科住院医师规范化培训考核指标评价体系。对22位专家进行两轮问卷咨询,确定指标及权重。得到一个以"病例考核""辅助检查判读""操作考核""病历书写"为一级指标的体系,其中包括二级指标10个。该指标体系较为科学,可操作性强,可为临床考核提供参考依据。     

难治性复发性急性淋巴细胞白血病治疗进展

难治和复发是导致急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗失败的根本原因,提高难治和复发ALL的疗效无疑将改善ALL的预后.     

多重实时荧光定量PCR同时检测急性白血病患者WT1和MDR1基因表达水平方法的建立

目的 构建可同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.方法 提取K562细胞的总RNA,并逆转录扩增WT1和MDR1的cDNA,通过Bam H Ⅰ及BglⅡ酶切后连接成WT1和MDR1重组片段,对WT1和MDR1重组片段进行PCR扩增,PCR产物纯化后与pMD18载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,构建载有WT1和MDR1基因的标准品重组质粒,用限制性核酸内切酶法和PCR法鉴定质粒.用FAM荧光标记MDR1探针、VIC荧光标记WT1探针,建立能在1个试管中同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR反应体系.应用该体系检测47例AL患者及32例对照者WT1和MDR1基因表达水平,比较两组之间WT1和MDR1基因表达水平的差异,并随访7例AL患者不同病程中WT1和MDR1基因表达水平的变化与临床预后的关系.结果 经EcoR1酶切及PCR法证实WT1和MDR1基因重组质粒已成功构建.所建立多重实时荧光定量PCR方法的灵敏度为102拷贝/μl;所建立标准曲线的R2分别为0.999和0.998.AL患者WT1和MDR1基因的表达水平中位数分别为37 000(163～6 370 000)拷贝/μg RNA和76 200(179～18 000 000)拷贝/μg RNA,显著高于对照组的258(0～643)拷贝/μg RNA和333(0～779)拷贝/μg RNA,差异有统计学意义(Z=6.755、6.736,P＜0.01).对应用相同的诱导和巩固化疗方案治疗的7例AL患者进行随访,3例持续缓解患者中,WT1和MDR1的表达水平在初治时分别为2 170和86 900、1 130和5 860、1 170和586拷贝/μg RNA,治疗后WT1和MDR1的表达水平明显下降,分别为370和560、138和980、150和690拷贝/μg RNA,此3例患者获长期完全缓解.在3例完全缓解后复发患者中,WT1和MDR1表达水平在初治时分别为1 600和11800、24 800和968、48 200和1 100 000拷贝/μg RNA,在化疗获得完全缓解后均降低,但在随后治疗过程中,WT1、MDR1表达量又逐渐升高,分别为20 314和25 660、184 364和31 530、15 680和878 000拷贝/μg RNA,此3例患者最终均出现临床复发.另外1例未缓解患者初治时WT1和MDR1表达水平分别为81 600和1 200 000拷贝/μg RNA,化疗后WT1、MDR1表达水平不仅未下降,反而有所上升,分别为124 100和7 632 400拷贝/μg RNA,此例患者始终未获缓解.结论 本研究成功构建了可同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的变化可能有助于判断预后.

Abstract：

Objective To set up a multiplex real time quantitative PCR method to detect the expression of WT1 and MDR1 gene simultaneously in acute leukemia patient. Methods Total RNA was extracted from k562 cell line and was reverse transcribed to cDNA by the outer primers of WT1 and MDR1 respectively. The cDNA of WT1 and MDR1 were purified and digested by Bam H Ⅰ and Bgl Ⅱ , and then the two fragments were ligated to form the recombinant fragment WT1 + MDR1. The outer forward primer of WT1 and outer reverse primer of MDR1 were used to amplify the recombinant fragment WT1 + MDR1. The PCR product was purified and cloned into pMD18-T vector, and then transferred into E. coli DH-5α. A new kind of WT1-MDRl-contained standard plasmid was obtained from the positive colony. The recombinant plasmid was verified by digestion with restriction enzyme and PCR amplification. A multiplex real time quantitative PCR method was set up with FAM-labeled MDR1 probe and VIC-labeled WT1 probe in one reaction tube. The WT1 and MDR1 gene expression was detected in forty-seven AL patients and thirty-two controls by this method. Seven patients were followed-up to elucidate the relationship between the gene expression levels and clinical prognosis. Results The recombinant plasmid was confirmed by EcoR1 digestion and PCR amplification. The multiplex real time quantitative PCR technique could reach the sensitivity of WT1 and MDR1 gene up to 102 copy/μl. The standard curve slopes were 0. 999 and 0. 998. The WT1 [ 37 000( 163-6 370 000 )copies/μg RNA ] and MDR1 [ 76 200( 179-18 000 000 )copies/μg RNA ]expression levels of AL patients were significantly higher as compared to the controls [ 258( 0-643 ) copies/μg RNA and 333( 0-779 )copies/μg RNA ]( Z= 6. 755,6. 736, P ＜ 0. 01 ). Following up seven patients with similar regimen of chemotherapy, the WT1 and MDR1 expression correlated to the clinical course. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels (2 170 and 86 900, 1 130 and 5 860, 1 170 and 586 copies/μg RNA )significantly decreased after chemotherapy and kept in the low range ( 370 and 560,138 and 980, 150 and 690 copies/μg RNA ), and had a favorable outcome. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels ( 1 600 and 11 800, 24 800 and 968, 48 200 and 1 100 000 copies/μg RNA )decreased after initial chemotherapy, but increased significantly afterwards (20 314 and 25 660,184 364 and 31 530, 15 680 and 878 000 copies/μg RNA ),and suffered clinical relapse. One patient with high WT1 and MDR1 expression levels ( from 81 600 and 1 200 000 copies/μg RNA to 124 100 and 7 632 400 copies/μg RNA )showed the persistence of disease. Conclusions A multiplex real time quantitative PCR method to detect WT1 and MDR1 gene simultaneously is constructed successfully. The expression of WT1 and MDR1 may provide useful information for AL patients prognosis.     

2465例女列车员生殖健康现状调查

目的:了解某客运段女列车员生殖健康状况及相关知识知晓情况,为制订相应健康教育对策提供依据。方法:对某客运段女列车员进行妇科体检和匿名问卷调查。结果:体检的2 465例女列车员中,患病1 293例,患病率为52.45%。宫颈糜烂的检出率最高,其次为阴道炎、附件炎、子宫肌瘤等。除阴道炎外,已婚女列车员其他妇科疾病的检出率均高于未婚女列车员。女列车员对一般的性与生殖健康知识知晓率较高,但对安全避孕知识及性病预防知识知晓率较低。结论:女列车员的生殖健康状况不容乐观,应定期进行妇科检查。加强生殖健康相关知识的健康教育,可早发现、早诊断、早治疗妇科常见病及宫颈病,从而提高其生殖健康水平和生活质量。     

慢性阻塞性肺疾病患者行机械通气期间肢体功能锻炼的研究

目的 :了解慢性阻塞性肺疾病 (COPD)急性发作、呼吸衰竭患者行机械通气治疗期间的肢体功能锻炼的状况 ,探讨通过采取护理措施提高患者的体能 ,促进患者早日康复。方法 :试验组是在对照组的常规监护和护理的基础上 ,给予有计划的 7d上肢和下肢功能锻炼。结果 :虽然对照组与试验组身体周径都有不同程度的缩小 ,但试验组患者上肢的握力增加 ,下肢的抬腿时间延长 ,锻炼也未影响呼吸功能 ,呼吸机的参数也是趋向撤离呼吸机的方向。结论 :肢体功能锻炼能保持和提高患者在机械通气期间的体能 ,使患者尽早脱离呼吸机 ,减轻其经济负担 ,提高生活质量。     

大鼠脑缺血再灌注后GRP78和GADD153的表达变化研究

目的 观察内质网应激相关因子GRP78和GADD153在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达,探讨脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的内质网应激机制.方法 线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞及再通模型,应用缺口末端标记法检测细胞凋亡;通过RT-PCR、免疫组化和Western-blot方法检测脑缺血再灌注后不同时相缺血周围区GRP78和GADD153的mRNA和蛋白表达.结果 模型组GRP78和GADD153表达均高于假手术组,分别于再灌注12h和24h达高峰,GADD153表达与神经细胞凋亡时间趋势一致.结论 脑缺血再灌注启动内质网应激反应,前期以GRP78表达上调为主;后期GADD153大量表达,二者表达平衡可能对于神经细胞最后转归具有重要意义.     

NF-κB和急性淋巴细胞白血病

NF-κB(nuclear factor-kappa B)蛋白家族是一种多效性的转录因子,可以与多种基因启动子部位的κB位点发生特异性的结合从而促进其转录表达,可调控细胞的转化和凋亡,在很多肿瘤的发展中起着非常重要的作用,目前研究发现其与急性淋巴细胞白血病(ALL)也密切相关,现对NF-κB的结构特点、其在ALL发病机制中作用及治疗中的应用进行综述.     

心律失常190例的监测体会

心电监测是抢救心血管危重患者的有力措施。持续的心电监测能及时发现心律失常、明确诊断、指导治疗。现将心律失常的监测体会报告如下。 1 临床资料 心律失常190例中,21～40岁24例,41～50岁53例,51岁以上的13例,室性心动过速及短串室速36例,频发室性早搏56例,心房颤动32例,频发房性早搏18例,室上性心动过速14例,房室传导阻滞26例,扭转型室速5例,心室颤动3例。     

硫酸镁配合微波治疗化疗后静脉炎疗效观察

目的：探讨硫酸镁配合微波热疗治疗化疗后静脉炎的效果。方法：将肿瘤科住院化疗后发生静脉炎的59例患者随机分为对照组和观察组，对照组在静脉炎发生时采用20％硫酸镁湿敷，观察组采用硫酸镁湿敷同时进行微波热疗。结果：观察组化疗后静脉炎疗效明显优于对照组（P〈0．05）。结论：硫酸镁配合微波热疗治疗化疗后静脉炎疗效好。     

改良国产试剂盒提取血浆DNA的方法

目的建立一种高效、简便快速、成本低的提取血浆DNA的方法。方法对国产试剂盒提取血浆DNA的方法进行改良,并比较了4种方法提取的DNA的质量、所需时间及其费用。结果改良国产试剂盒提取血浆DNA的质量不仅能达到相关分子生物学实验的要求,而且与其他3种提取血浆DNA的方法相比,具有操作简单,耗时短,成本低等优点。结论改良国产试剂盒提取血浆DNA方法操作简单快捷、价格便宜,适合于大样本的血浆DNA提取。