微囊化嗅鞘细胞移植周围神经损伤痛及下调背根神经节P2X3嘌呤受体的表达

目的:探讨微囊化与非微囊化嗅鞘细胞移植对周围神经损伤的作用及对P2X3嘌呤受体的表达水平影响。方法:取SD大鼠嗅球组织运用差速贴壁方法并扩增培养嗅鞘细胞。将SD大鼠分成4组,对照组(sham)、慢性坐骨神经损伤模型组(CCI)、非微囊化嗅鞘细胞移植组(non-MC-OECs)及微囊化嗅鞘细胞移植组(MC-OECs);于术后10d和20d运用行为学方法测各组大鼠机械缩足反射阈值;原位杂交组织化学方法检测背根节P2X3受体的阳性细胞百分比及平均吸光度。结果:术后10d和20d,CCI组、non-MC-OECs组、MC-OECs组及sham组大鼠机械缩足反射阈值从低到高;原位杂交检测背根节P2X3受体阳性细胞百分比及平均吸光度依次减低。non-MC-OECs组与CCI组对比,大鼠机械缩足反射阈值明显增高,P2X3受体阳性细胞百分比及平均吸光度明显减低;与non-MC-OECs组比较,MC-OECs组大鼠机械缩足反射阈值增高,P2X3受体阳性细胞百分比及平均吸光度降低,各组间比较差异均有统计学意义。结论:与非微囊化嗅鞘细胞相比,微囊化嗅鞘细胞移植能更好治疗慢性周围神经损伤,减低其背根节P2X3受体表达水平。     

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的作用

目的:观察脊髓损伤大鼠进行微囊化兔坐骨神经组织细胞移植后胶质纤维酸性蛋白表达的变化。方法:实验于2004-03/2005-02在江西医学院人体解剖学教研室应用解剖研究室完成。①选取健康成年家兔10只,用于制备坐骨神经组织细胞。②选取健康成年SD大鼠130只,随机分为4组:正常对照组10只、损伤对照组40只、细胞悬液组40只、微囊组40只。③损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠均建立脊髓半横断伤模型,于损伤处分别植入明胶海绵、明胶海绵吸附的10μL细胞悬液、明胶海绵吸附的10μL微囊化坐骨神经组织细胞。移植前后均不使用免疫抑制剂。正常对照组未给予材料移植。④损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠分别于术后3,7,14,28d取材,每时相点10只,行免疫组织化学染色,观察胶质纤维酸性蛋白表达的变化。结果:实验选取健康成年SD大鼠130只,全部进入结果分析。①术后各组脊髓切片炎性反应苏木精染色结果:脊髓损伤后3d,损伤对照组和细胞悬液组可见明显核固缩,部分神经元萎缩变小,神经元数量减少,细胞边界模糊不清,并有大量巨噬细胞浸润;第7天损伤对照组和细胞悬液组炎性反应进一步加剧,有大量的噬中性粒白细胞浸润,但微囊组少见;第14天损伤对照组和细胞悬液组胶质细胞明显增生、肥大,炎性反应减轻,神经元的形态有所恢复,而微囊组炎性反应较轻,胶质细胞增生减少。②术后各组脊髓切片胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色结果:正常对照组可见胶质纤维酸性蛋白染色阳性细胞,空白及阴性对照染色未见阳性反应。损伤对照组和细胞悬液组术后3,7,14d内胶质纤维酸性蛋白的表达呈进行性增高趋势,28d回落。微囊组术后7,14,28d胶质纤维酸性蛋白的表达显著低于损伤对照组、细胞悬液组(P<0.01)。结论:微囊化异种坐骨神经组织细胞移植能抑制损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白的表达,减轻由反应性胶质化所形成的胶质瘢痕。     

尼莫地平对烫伤大鼠脑内ZO-1 mRNA及血脑屏障通透性的影响

目的:观察尼莫地平对严重烫伤大鼠脑内紧密连接相关蛋白ZO-1mRNA及血脑屏障通透性的影响。方法:实验于2005-04/10在南昌大学基础医学院应用解剖实验室完成。①取健康SD大鼠132只分为正常对照组12只、烫伤组60只,尼莫地平组60只,后两组又设烫伤后1,3,6,12,24h5个时间点,每个时间点12只,其中6只用于脑组织伊文思蓝含量的测定,剩余6只用于ZO-1mRNA的检测。②烫伤组和尼莫地平组大鼠100℃开水烫伤15s,造成背部30%体表总面积Ⅲ度烧伤。尼莫地平组大鼠于烫伤后即刻腹腔注射尼莫地平(0.5mg/kg),其他2组不给药。③各组大鼠于相应的时间点麻醉并处死动物取材,应用化学定量方法检测大鼠脑组织内伊文思蓝含量,运用RT-PCR方法检测大鼠脑内ZO-1mRNA的表达变化。结果:经补充后132只大鼠进入结果分析。①大脑伊文思蓝含量:正常对照组为(10.18±1.79)μg/g,烫伤组伤后1,3,6,12h均高于正常对照组(P<0.05),其高峰在烫伤后6h,为(20.00±0.58)μg/g;尼莫地平组伤后1,6,12h均低于烫伤组(P<0.01),烫伤后6h时为(16.74±0.78)μg/g。②小脑伊文思蓝含量:正常对照组为(12.90±1.32)μg/g,烫伤组伤后1,3,6,12h均高于正常对照组(P<0.05),其高峰在烫伤后6h,为(31.3±1.47)μg/g;尼莫地平组伤后1,3,6,12h均低于烫伤组(P<0.01),烫伤后6h时为(21.05±2.36)μg/g。③脑组织ZO-1mRNA的表达:烫伤组烫伤后3,6,12,24h分别为正常对照组的(0.1235±0.0158),(0.1890±0.0531),(0.2014±0.0412),(0.1555±0.0163)倍(P<0.01);尼莫地平组较烫伤组高,以烫伤后3,6h最为明显,分别为烫伤组的3.96及1.81倍(P<0.01).结论:①严重烫伤后血脑屏障通透性增高,脑内ZO-1mRNA表达下降。②烫伤后早期应用尼莫地平能防止脑内ZO-1mRNA表达下降,并能起到保护血脑屏障功能的作用。     

复方丹参对严重烫伤大鼠血脑屏障的保护作用

目的　观察复方丹参注射液对严重烫伤大鼠血脑屏障通透性及脑内ZO-1mRNA影响,探讨复方丹参对严重烫伤大鼠血脑屏障损伤的保护作用。 方法　将大鼠随机分成假烫伤组、烫伤组、复方丹参治疗组。紫外分光光度计检测各组大鼠脑组织内伊文氏蓝的含量,RT-PCR检测严重烫伤大鼠脑内ZO-1 mRNA表达变化。 结果　大鼠严重烫伤后3～48 h脑内ZO-1mRNA表达下降。脑内伊文氏蓝（EB）含量从烫伤后3h开始升高,在6～12 h显著升高。用复方丹参治疗后, 严重烫伤大鼠脑内EB含量降低,以3、6 h下降最明显（P<0.010）;脑内ZO-1mRNA表达升高,以烫伤3 h治疗组最为明显。 结论　复方丹参注射液可防止严重烫伤大鼠脑内ZO-1mRNA的下降,减轻严重烫伤对大鼠血脑屏障的损害。     

移植自体嗅黏膜对脊髓损伤大鼠脊髓内MMP-2、9表达的影响

目的探讨自体嗅黏膜移植干预脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠脊髓组织内基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)的表达与动物神经功能恢复的关系。方法制作SD大鼠半横断脊髓损伤模型,按随机数字表法分为模型对照组和自体嗅黏膜组,每组20只(同时取5只大鼠设为正常对照组)。自体嗅黏膜组在损伤处植入自体嗅黏膜,移植后1、3、7、14d(每时间点5只大鼠)采用BBB评分评价神经功能、免疫组织化学法检测脊髓内MMP-2、9表达。结果 SCI后自体嗅黏膜组BBB评分高于模型对照组(P<0.05)。各时间点SCI大鼠脊髓内MMP-2、9的表达显著升高(正常对照组大鼠未见MMP-2、9的表达)。伤后同一时间点自体嗅黏膜组脊髓内的阳性细胞数少于模型对照组(P<0.05)。结论自体嗅黏膜移植可明显促进神经运动功能恢复情况;此种作用可能与其能够抑制MMP-2、9过度表达有关。     

许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植修复大鼠脊髓损伤

目的:观察许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡、Bcl-2表达及下肢运动功能恢复的影响.方法:清洁级SD大鼠随机分为4组:正常对照组、单纯损伤组、许旺细胞组、许旺细胞海藻酸钠凝胶组.后3组制作脊髓全横断损伤模型.正常对照组、单纯损伤组不进行移植处理,许旺细胞组植入吸附许旺细胞悬液的明胶海绵块、许旺细胞-海藻酸钠凝胶组植入许旺细胞-海藻酸钠凝胶.分别于12 h,1,3,7,21 d对动物进行BBB评分后处死,取损伤区脊髓节段制成石蜡切片进行TUNEL、Bcl-2染色,观察脊髓内凋亡细胞、Bcl-2细胞的数量及分布变化.结果:正常对照组仅有少量淡染Bcl-2阳性细胞;单纯损伤组神经元Bcl-2免疫反应阳性细胞表达的高峰在第3天,14 d时Bcl-2免疫反应阳性细胞表达接近正常水平.许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植后损伤脊髓细胞Bcl-2免疫反应阳性细胞表达具有显著增高(P＜0.05),7 d高度表达并持续2周以上.单纯损伤组脊髓内细胞凋亡最多,并于损伤后1,7 d形成两个高峰,多分布于白质中.许旺细胞-海藻酸钠凝胶组BBB评分较单纯损伤组及许旺细胞组明显提高(P＜0.05).结论:许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植能抑制大鼠脊髓损伤后脊髓细胞凋亡、促进Bcl-2的表达,提高了脊髓运动功能的恢复,但未达到正常水平.     

L-硝基-精氨酸甲酯对严重烫伤早期大鼠血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对严重烫伤早期大鼠血脑屏障(BBB)通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨L-NAME对血脑屏障的保护作用.方法:健康SD大鼠,随机分为正常对照组、假烫伤组、烫伤组、烫伤+L-NAME治疗组.烫伤后又设3、6、12、24、48h等5个时相点,用透射电镜观察BBB超微结构变化;紫外分光光度计检测脑伊文氏蓝(EB)含量;免疫组织化学观察脑MMP-9表达.结果:烫伤后脑EB含量明显增高,MMP-9表达升高,差别具有显著性.电镜显示烫伤后大脑皮质的神经细胞线粒体肿胀或溶解.脑毛细血管周围出现空泡化,内皮肿胀,基底膜厚薄不均.L-NAME始疗后,脑EB含量明显下降,MMP-9表达恢复至正常水平,脑毛细血管、神经细胞、突触及基底膜等超微结构基本恢复正常.结论:烫伤后血脑屏障通透性增高与脑内MMP-9表达升高密切相关,提示MMP-9是严重烫伤后血脑屏障损伤的关键因素.早期应用L-NAME能明显减轻烫伤对BBB的损伤,可能与L-NAME抑制MMP-9表达有关.     

许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植修复大鼠脊髓损伤*

目的：观察许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡、Bcl-2表达及下肢运动功能恢复的影响。 方法：清洁级SD大鼠随机分为4组：正常对照组、单纯损伤组、许旺细胞组、许旺细胞-海藻酸钠凝胶组。后3组制作脊髓全横断损伤模型。正常对照组、单纯损伤组不进行移植处理,许旺细胞组植入吸附许旺细胞悬液的明胶海绵块、许旺细胞-海藻酸钠凝胶组植入许旺细胞-海藻酸钠凝胶。分别于 12 h,1,3,7,21 d对动物进行BBB评分后处死,取损伤区脊髓节段制成石蜡切片进行TUNEL、Bcl-2染色,观察脊髓内凋亡细胞、Bcl-2细胞的数量及分布变化。 结果：正常对照组仅有少量淡染Bcl-2阳性细胞;单纯损伤组神经元Bcl-2免疫反应阳性细胞表达的高峰在第3天,14 d时Bcl-2免疫反应阳性细胞表达接近正常水平。许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植后损伤脊髓细胞Bcl-2免疫反应阳性细胞表达具有显著增高(P < 0.05),7 d高度表达并持续2周以上。单纯损伤组脊髓内细胞凋亡最多,并于损伤后1,7 d形成两个高峰,多分布于白质中。许旺细胞-海藻酸钠凝胶组BBB评分较单纯损伤组及许旺细胞组明显提高(P < 0.05)。 结论：许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植能抑制大鼠脊髓损伤后脊髓细胞凋亡、促进Bcl-2的表达,提高了脊髓运动功能的恢复,但未达到正常水平。 关键词：脊髓损伤;细胞凋亡;许旺细胞;Bcl-2     

自体嗅黏膜移植联合β-七叶皂甙钠干预脊髓损伤大鼠基质金属蛋白酶2、9的表达

背景：脊髓损伤后基质金属蛋白酶2、9的过表达与脊髓组织的继发性损伤有关。 目的：观察自体嗅黏膜移植联合β-七叶皂甙钠干预脊髓损伤大鼠脊髓组织内基质金属蛋白酶2、9的表达与动物神经功能的恢复情况。 方法：制作半横断脊髓损伤大鼠模型,随机分为4组,分别于腹腔注射β-七叶皂甙钠或生理盐水,以及损伤处植入自体嗅黏膜。 结果与结论：干预后7,14 d自体嗅黏膜组、β-七叶皂甙钠组、自体嗅黏膜联合β-七叶皂甙钠组BBB评分均高于模型对照组(P < 0.05),自体嗅黏膜联合β-七叶皂甙钠组BBB评分高于自体嗅黏膜组、β-七叶皂甙钠组 (P < 0.05)。干预后1,3,7,14 d自体嗅黏膜联合β-七叶皂甙钠组脊髓内基质金属蛋白酶2、9阳性细胞数少于模型对照组、自体嗅黏膜组、β-七叶皂甙钠组(P < 0.05)。结果提示自体嗅黏膜移植与β-七叶皂甙钠之间有协同作用,可明显改善神经运动功能恢复情况;此种作用可能与其抑制基质金属蛋白酶2、9过度表达有关。     

微胶囊对大鼠糖尿病异种胰岛组织移植免疫隔离作用的实验研究

目的　观察微胶囊 (海藻酸钠 多聚赖氨酸 海藻酸钠 )对大鼠糖尿病异种胰岛组织移植的免疫隔离作用。方法　糖尿病大鼠 30只。随机分为 5组 :( 1)微囊组 ;( 2 )未包囊组 ;( 3)空囊移植组 ;( 4 )生理盐水组 ;( 5 )糖尿病组。每组各 6只。微囊组用微囊化的小鼠胰岛细胞注入糖尿病大鼠腹腔内。未包囊组用纯化后的胰岛细胞注入糖尿病大鼠腹腔内。空囊移植组用与微囊组数量相同的空微囊注入糖尿病大鼠腹腔内。生理盐水组用等量的生理盐水注入糖尿病大鼠的腹腔内。糖尿病组对糖尿病大鼠不行移植操作。各组大鼠分别于移植后 2h、4h测量血糖 ,以后每天测定血糖 1次 ,1周后改为每 10d测 1次 ;同时称量体重 ,观察饮水量及尿量 ,直至空腹血糖高于 19.3mmol/l定为胰岛移植物排斥。结果　糖尿病组、空囊移植组及生理盐水组大鼠血糖无明显变化 ;微囊组糖尿病大鼠异种胰岛移植 2h后血糖明显低于未包裹组 ,下降幅度为 8～ 12mmol /L ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ;未包裹组血糖下降仅维持 2～ 3d ,微胶囊组血糖下降可持续 5 6～ 12 0d ,两组持续天数比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。移植后 1个月从腹腔回收的微囊胰岛呈圆型、表面光滑 ,无明显纤维组织包绕。囊内胰岛DTZ染色呈桔黄色。结论　微胶囊制作技术可明显延长小