加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化

目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ＣＴｎＴ）。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取ＣＴｎＴ,以ＤＥＡＥ５２柱层析纯化。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳初步鉴定,每１００ｇ左心室肌经此法可得１１．７９ｍｇＣＴｎＴ纯品,纯化后的ｃＴｎＴ为单一条带,分子量为３７ＫＤ。结论本法提取ＣＴｎＴ步骤简单,纯度尚可,可做抗原使用。     

新乡市区产妇及新生儿脐带血清弓形虫免疫球蛋白G抗体检测结果分析

我们近期采集新乡地区待产孕妇外周血及其出生婴儿脐带血 ,在同一时间、由同一人操作、采用同一批号试剂集中进行检测 ,现将结果报道如下。对象与方法一、对象　随机留取 2 0 0 3年 3～ 6月新乡市各医院胎位无异常、B超监测胎儿无畸形的足月待产孕妇空腹静脉血及其产后新生儿脐带血各 80份 ,分离血清并编号 ,- 4 0℃冻存备用。二、方法　试剂盒由珠海海泰生物制药有限公司 (生产批号 :0 30 4 2 1)提供 ,严格按说明书进行操作 ,同时设立阴性、阳性和临界对照以做好质量控制。A值观测采用国营华东电子管厂生产的DG30 2 2A型酶联免疫检测仪。…     

中国山东沿海地区汉族男性人群白介素-23受体基因多态性与痛风的易感性研究

目的探讨中国山东省沿海地区汉族男性群体的白细胞介素23受体（IL-23R）基因rs7517847位点G／T的多态性是否与痛风的易感性有关。方法选取202例痛风患者和346例健康对照者,检测中国汉族男性群体的IL-23受体内含子区rs7517847位点基因多态性分布,数据经,检验得出其与痛风发病的遗传易感性的关系。结果经,检验,痛风组和对照组中IL-23R基因rs7517847位点GG,GT和1Tr基因型频率（10．4％,49．5％,40．1％;16．2％,49．7％,34．1％;X^2=4．305,P〉0．05）与等位基因频率G和T（35．1％,41％;64．9％,59％;X^2=3．727,P〉0．05）均无统计学意义。IL-23R基因rs7517847位点G／T基因多态性与痛风病的危险因素无显著性关联。结论尚不能认为中国沿海地区汉族男性人群中IL-23R内含子区rs7517847位点基因多态性与痛风有关联性。     

甲醛固定石蜡包埋子宫内膜癌变组织中microRNA-29b表达及其临床意义

目的探讨以甲醛固定石蜡包埋组织为材料、实时荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌变组织中microR-NA-29b表达的可行性及其临床意义。方法选取甲醛固定石蜡包埋组织96份,其中正常子宫内膜16份,不典型增生内膜20份、子宫内膜癌60份。设计microRNA-29b和U6的茎环结构反转录引物和PCR扩增引物,以U6为内参,利用SYBR green实时荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌变组织中microRNA-29b的含量,分析microRNA-29b在癌变组织中的表达及其与临床病理特征的关系。结果 microRNA-29b在甲醛固定石蜡包埋组织中有表达;mi-croRNA-29b在子宫内膜癌组织中的表达低于正常内膜及不典型增生内膜(P均<0.05);microRNA-29b表达与病理分期及有无淋巴结转移有关(P均<0.05)。结论可以利用甲醛固定石蜡包埋组织进行microRNA-29b的相关研究;microRNA-29b在子宫内膜癌变组织中表达的差异可能与子宫内膜癌的发生、发展有关,对子宫内膜癌的早期诊断、预后评估可能有一定的指导意义。     

山东地区汉族儿童先天性甲状腺功能减低症NNT基因突变筛查研究

目的 探讨山东地区汉族儿童先天性甲状腺功能减低症(CH)烟酰胺核苷酸转氢酶(NNT)基因突变情况及其与CH的关系,为CH的诊断提供理论依据。方法 对50例来自山东地区的汉族CH患儿进行NNT基因编码区筛查。提取血液基因组DNA,PCR扩增NNT基因全部编码区后进行Sanger测序,将测序结果与NCBI中NNT基因编码区原序列(NM_012343.3)进行比对,检测这些患儿是否携带NNT基因突变并对发现的突变进行生物信息学分析。结果 2例患儿中发现了NNT基因c.1475C＞T(p.A492V)突变,1例患儿中发现NNT基因c.2704C＞A(p.P902T)突变,Polyphen值显示前者几乎无蛋白危害性,可能不是致病突变,而后者蛋白危害性较大,应为致病突变。结论 NNT基因突变可能不是山东汉族人群CH的主要病因,仍需扩大样本量进行研究。     

日本血吸虫循环抗原检测的血清预处理方法比较

血吸虫循环抗原主要有三大类：ＭＡＡ、ＧＡＡ和ＳＥＡ。在检测过程中，常存在交叉反应。为排除血清中杂蛋白的干扰，采用ＴＣＡ沉淀法［１］、ＰＥＧ沉淀法［２］和热碱处理法［３］３种方法预处理，并对其效果进行比较。材料与方法血清样品２０条尾蚴感染兔第８ｗｋ血清...     

登革2型病毒NGC株E基因部分序列原核蛋白表达

目的:构建登革2型病毒NGC株E基因区1～476 bp的原核表达载体并进行原核表达.方法:将登革2型病毒NGC株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-En;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的TCID50.结果:(1)成功构建了pET28a(+)-En原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,相对分子量约为23 kD,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western印迹表明该目的蛋白可与登革2型病毒鼠单克隆抗体结合;(2)用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%;(3)DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-4.88/0.1 ml.结论:pET28a(+)-En可在BL21(DE3)菌株中高效表达,DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有一定的细胞毒作用.     

浅-中-浅低温高钾氧合血对心肌保护的临床分析

目的通过临床随机对照试验，比较浅-中-浅低温高钾氧合血与高钾氧合冷血对心肌保护的作用。方法将20例心脏瓣膜病患者，随机分成两组：采用自配含5％KCI的停跳液与氧合血按1：50左右比例配成浅-中-浅低温高钾氧合血经冠状动脉顺行灌注（实验组），氧合血与St Thomas停搏液按4：1混合成高钾氧合冷血经冠状动脉顺行灌注（对照组）。观察体外循环时间，升主动脉阻闭时间，自动复跳率、强心药使用时间、机械通气时问、ICU停留时间。结果两组在观察体外循环时间，升主动脉阻闭时间无差别（P〉O．05），自动复跳率实验组明显高于对照组（P〈O．05）。强心药使用时间、机械通气时间、ICU停留时间方面，实验组明显低于对照组（P〈0．05）。结论在心肌保护方面浅-中-浅低温高钾氧合血优于高钾氧合冷血。     

PCR对弓形虫感染家兔血液中虫体DNA的动态检测

目的了解弓形虫感染家兔血液中是否有虫体存在,探明虫体在血液中动态变化情况。方法用不同剂量的RH株弓形虫速殖子经腹腔感染家兔6只。在家兔感染前后分别采集血液,抗凝处理后,-40℃冻存备用,用普通PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫DNA。结果5只家兔在感染后的6~14d死亡,仅1只家兔在感染后的6~72d,用PCR检测手段在血液中均可检测到弓形虫DNA。结论弓形虫感染雄兔血液中有虫体存在。     

颈椎外伤手术麻醉35例分析

近年来,颈椎外伤手术呈显著上升趋势,因颈椎外伤造成颈椎损伤,致呼吸循环功能及肌力受损,手术和麻醉风险高。我们共行颈椎外伤手术麻醉35例,效果满意。现分析报告如下。1临床资料1.1一般情况35例中,男30例,女5例;年龄23~73岁,平均38.6岁。C2骨折4例,C3~7骨折或脱位31例。1.2手术方式前路减压植骨融合钢板内固定30例,后路减压植骨融合钢板内固定2例,前路减压植骨融合钢板内固定加后路减压术3例。1.3麻醉方法本组病例采用静脉吸入复合全身麻醉,诱导期继续颅骨牵引或颈托固定头部,根据颈部活动度和气管插管难易酌情选择快或慢诱导。(1)快诱导:咪达唑仑0.05~0.08mg/kg体重,芬太尼2.0~3.0μg/kg体重,丙泊酚1~1.5mg/kg体重,维库溴铵0.08~0.12mg/kg体重。(2)慢诱导:咪达唑仑0.05~0.08mg/kg体重,环甲膜穿刺气管内注射2.0%利多卡因2~3ml,0.3%丁卡因咽喉部表面麻醉。术中监护血压、心电图、动脉血氧饱和度、呼气末二氧化碳分压和尿量。1.4结果(1)快诱导29例中,插管1次成功28例,仅1例2次成功。术中出现显著心动过缓2例;因短时间内大失血出现严重...