针对gyrA基因突变的反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的研究

目的 建立快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization,RDBH)技术,并观察其效果。方法 针对结核分枝杆菌gyrA基因序列及常见的突变位点,分别设计1条野生型和7条突变型探针,建立RDBH技术,对临床分离结核分枝杆菌菌株进行喹诺酮耐药性检测,以比例法药敏试验和DNA测序做对照。结果 应用比例法药敏试验、DNA测序、RDBH三种方法分别检测59株喹诺酮耐药株和51株喹诺酮敏感株,与比例法相比,RDBH试验灵敏度和特异度分别为69.49%(41/59)、100%(51/51),符合度为83.63%;而RDBH与DNA测序结果比较,敏感度和特异度分别为97.56%(40/41),98.55%(68/69),符合度达98.18%。结论 RDBH技术检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药具有良好的灵敏度、特异度和符合度。     

间隔区寡核苷酸分型技术用于结核分枝杆菌多重感染的初步研究

目的 初步评价间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)技术在鉴定结核分枝杆菌多重感染中的应用。方法 选取结核分枝杆菌临床分离株,5 μm孔径滤膜过滤法制备单个细菌菌悬液,平板接种37 ℃培养,选取生长良好的单个菌落培养增菌,提取基因组DNA,Spoligotyping进行基因分型鉴定,比较临床分离株与相应的单克隆分离株的分型结果。结果 共选取32株结核分枝杆菌临床分离株,获得306个单克隆分离株。Spoligotyping分型鉴定结果显示30株结核分枝杆菌临床分离株与相应的单克隆分离株的分型结果一致,2株临床分离株的单克隆分离株呈现了多种基因型,多重感染率为6.25%。结论 Spoligotyping可用于快速,有效地区分结核分枝杆菌多重感染。     

人类免疫缺陷病毒/结核分枝杆菌双重感染者结核分枝杆菌分离株一线药物耐药特征

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的结核分枝杆菌(MTB)分离株对一线抗结核分枝杆菌药物的耐药特征,为临床治疗HIV/MTB双重感染提供参考依据。 方法选取上海市公共卫生临床中心2012年1月至2016年12月收治的HIV合并MTB感染者154例(实验组)和单纯结核分枝杆菌感染者357例(对照组),进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(STR)4种一线药物耐药性检测,比较两组患者MTB的总耐药率和总耐多药率,初始及获得性耐药、耐多药率。 结果HIV/MTB双重感染组患者总耐药率(44.2%,68/154)、初始耐药率(42.2%,19/45)、初始耐多药率(13.3%,6/45)、STR总耐药率(31.8%,49/154)和初始耐药率(28.9%,13/45)显著高于单纯结核分枝杆菌感染组(33.9%、25.0%、3.8%、22.7%、11.4%)(P均<0.05)。INH、RFP、EMB耐药率与单纯结核分枝杆菌感染组差异无统计学意义(P均> 0.05)。单纯结核分枝杆菌感染组患者获得性耐药率(39.1%,88/225)和获得性耐多药率(19.1%,43/225)分别高于初始耐药率(25.0%,33/132)和初始耐多药率(3.8%,5/132)(χ²= 16.785、P < 0.001;χ²= 7.393、P = 0.004)。 结论HIV/MTB感染者分离的MTB对一线抗结核分枝杆菌药物耐药率和耐多药率高,其中STR耐药最为严重,提示临床治疗应重视HIV/MTB双重感染者的结核耐药问题,及时采取预防措施和制定个体化治疗方案。     

环介导等温扩增技术用于结核病诊断的价值评估

 目的 评估环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）在诊断结核病中的应用价值。方法 以疑似活动性结核患者为研究对象。前瞻性收集患者临床标本,分装后进行荧光涂片显微镜镜检、BACTEC MGIT 960液体培养、MTB GeneXpert （Xpert）和LAMP检测,分析比较这4种检测方法的灵敏度和特异度,同时进行一致性检验。结果 研究共入组315例患者,分为痰标本组和非痰标本组,两组分别有175例和80例纳入分析。对于痰标本的检测,以液体培养为诊断标准时,LAMP的灵敏度为78.9%,特异度为82.7%;在有抗结核活性药物暴露史亚组中,LAMP的灵敏度为92.3%,Xpert的灵敏度为88.5%;以临床诊断为诊断标准时,LAMP的灵敏度优于涂片（58.9% vs. 46.0%,P<0.05）,特异度为98.0%;亚组分析提示在有抗结核活性药物暴露史的患者标本中,LAMP的灵敏度高于其他检测方法。对于非痰标本的检测,同样显示出优于涂片的灵敏度。结论 LAMP在结核病的诊断中具有较好的灵敏度和特异度,与Xpert检测结果一致性较高,与培养一致性中等,优于结核菌涂片法。在有抗结核活性药物暴露史的患者中,LAMP有可靠的检出率。     

微孔板Alamar blue显色法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的研究

目的 评价微孔板Alamar blue显色法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的可行性。方法 用微孔板Alamar blue显色法对78株结核分枝杆菌检测氧氟沙星的最小抑菌浓度,记录获得结果时间,利用ROC曲线确定氧氟沙星的最佳耐药阈值,并和传统的药物敏感性实验罗氏培养基比例法进行比较。结果 微孔板Alamar blue显色法获得结果平均时间为8 d,氧氟沙星的最佳耐药阈值为2 μg/mL,以罗氏培养基比例法为金标准,氧氟沙星的灵敏度和特异度分别为88.6%和94.1%。结论 微孔板Alamar blue显色法是一种简便、敏感、快速的药物敏感性检测方法,可用于结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的快速检测。     

上海地区328例新型冠状病毒肺炎患者实验室数据分析

目的分析常用感染与炎症指标及细胞因子检测在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疾病进展中的意义。方法选取2020年1—2月上海市公共卫生临床中心COVID-19患者328例,按疾病程度分为轻型及普通型组和重型及危重型组。回顾性比较各组患者的C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肝素结合蛋白(HBP)、乳酸脱氢酶(LDH)、降钙素原(PCT)、白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LPC)计数、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、α-干扰素(IFN-α)和γ-干扰素(INF-γ)等20项感染与炎症相关血液学指标的差异。结果与轻型及普通型组比较,重型及危重型组患者年龄更高[68.5(11.5)岁,P0.01]、住院天数更长[21(10)d,P0.01]、出院率更低(32.14%,P0.01);与轻型及普通型组比较,重型及危重型组CRP[55(84.5)mg/L,P0.01]、hs-CRP[43.58(76.46)mg/L,P0.01]、HBP[61.37(111.01)ng/mL,P0.01]、LDH[354.5(150.5)U/L,P0.01]、PCT[0.09(0.21)mg/L,P0.01]、IL-5[0.49(1.6)pg/mL,P=0.01]、IL-6[10.78(56.24)pg/mL,P0.01]、IL-8[12.97(19.4)pg/mL,P0.01]及IL-10[0.82(1.94)pg/mL,P=0.03]水平升高,LPC[0.77(0.5)×109/L,P0.01]、IL-4[0(0)pg/mL,P0.01]及IL-17[0(0)pg/mL,P=0.01]水平降低。结论轻型及普通型COVID-19患者的感染与炎症相关指标与重型及危重型患者间存在明显差异。CRP、HBP、hs-CRP和PCT的异常升高提示COVID-19患者病情可能转向重症,LPC、IL-4、IL-6、IL-8和IL-10水平对预测患者病情进展,特别是炎症风暴的发生有重要意义。