刚地弓形虫14-3-3蛋白真核表达载体的构建与表达

目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物。结果根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区。RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99%。Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞。结论构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达。     

急性胆囊炎、胆囊结石嵌顿患者腹腔镜切除效果观察

目的探讨急性胆囊炎、胆囊结石嵌顿患者行腹腔镜处理的临床疗效。方法 80例急性胆囊炎、胆囊结石嵌顿患者均行腹腔镜手术治疗,其中76例顺行切除,4例逆行切除。观察治疗效果。结果胆囊均完整切除。手术时间40～150 min,置管时间2～10 d。术后发生胆漏4例,胆管损伤1例,胆管残留结石2例。患者均治愈出院,无死亡病例。结论急性胆囊炎、胆囊结石嵌顿时应用腹腔镜处理是有效且安全的。     

大肠埃希菌肠毒素B亚基对弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因免疫效果的影响

目的研究大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)对弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因免疫效果的影响。方法构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-SAG1-ROP2和pEASY-E1-LTB。BALB/c小鼠88只,随机均分为4组,分别用PBS(A组)、pcDNA3.1空质粒(B组)、pcDNA3.1-SAG1-ROP2质粒(C组),以及pcDNA3.1-SAG1-ROP2质粒和pEASY-E1-LTB质粒(D组)进行滴鼻免疫,每种质粒20μg/(只·次)。每组小鼠随机抽取15只,每周免疫1次,共4次,末次免疫后2周,测定其血清IgG和IgA抗体水平,气管和小肠黏膜冲洗液分泌型IgA(sIgA)水平,以及脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;每组中余7只小鼠,每周免疫1次,共3次,末次免疫后4周,弓形虫速殖子腹腔接种感染(1×103/鼠),观察比较各组生存时间。结果成功构建pEASY-E1-LTB重组表达质粒。D组小鼠血清IgG(0.626±0.100)和IgA抗体水平(1.086±0.138),气管和小肠黏膜冲洗液sIgA水平(0.886±0.164),以及细胞因子IFN-γ[(2017±266)pg/ml]和IL-4水平[(203±31)pg/ml]均显著高于其他各组(均P0.05)。感染弓形虫速殖子后,A、B、C和D组小鼠的生存时间中位数分别为3、4、6和10d,D组的生存时间长于其他各组(均P0.05)。结论LTB能明显增强弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因的免疫效果。     

寄生虫基因组的研究进展

随着对寄生虫病和寄生虫学研究的深入,该领域已经取得了很多重大的进展.但是我们必须清醒地认识到整个寄牛虫领域的现实情况依然不容乐观,如对一些传统寄生虫病的防治还没有取得根本性的改观,新的动物源性寄生虫和机会性致病寄生虫又不断地出现,寄生虫的分类地位、致病机制、寄生虫病的诊断,尤其在药物和疫苗防治等方面也面临一系列的困难,这些问题的解决最终都要依靠人们在更基础的分子水平上寻找答案,所以开展寄生虫基因组的研究意义深远.     

弓形虫重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18的构建及鉴定

目的 构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18 DNA重组质粒,并对其进行克隆及鉴定。方法 采用PCR法对目的基因进行扩增,构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18重组质粒,转染至人包皮成纤维细胞（HFF）进行表达并用SDS-PAGE和β-actin进行鉴定。 结果 经测序、双酶切和PCR鉴定,重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18构建正确;经RT-PCR和SDS-PAGE鉴定, AMA1、ROP18基因均在哺乳动物细胞中正确转录与表达。结论 成功构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18重组质粒,并可在HFF细胞中稳定表达。     

腹腔镜切除急性胆囊炎、胆囊结石嵌顿80例临床分析

目的探讨急性胆囊炎、胆囊结石嵌顿腹腔镜处理的体会和预防并发症的措施。方法总结笔者80例急性胆囊炎腹腔镜手术治疗的经验。结果术后发生胆漏4例,胆管损伤1例,胆管残留结石2例,全部治愈出院,无死亡病例。结论操作规范,急性胆囊炎、胆囊结石嵌顿时应用腹腔镜处理是安全的。     

弓形虫ROP18 MIC2重组真核质粒的构建与表达

目的 构建弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)和微线体蛋白2(MIC2)的基因融合的重组真核表达质粒,并在转录和翻译水平进行鉴定。方法 利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,体外转染人包皮成纤维细胞(HFF),采用RT-PCR在48h时检测转录水平, SDS-PAGE在72h时检测蛋白表达。结果 重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2构建正确,经RT-PCR、SDS-PAGE鉴定,弓形虫ROP18、MIC2可在HFF细胞中瞬时表达。结论 成功获得重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。     

折弯反向导针技术在经皮逆行耻骨上支螺钉治疗骨盆前环损伤中的应用研究

目的 探讨折弯反向导针技术在经皮逆行耻骨上支螺钉治疗骨盆前环损伤中的安全性、准确性和临床疗效。方法 回顾性分析2020年6月至2022年6月在我院采用折弯反向导针技术经皮逆行耻骨上支螺钉置入治疗的13例骨盆损伤病人的临床资料，其中男9例，女4例；年龄为31~76岁，平均50.7岁；单纯耻骨上支骨折2例，合并骨盆后环损伤的11例。常规导针置入失败后，空心钻开口，钝头折弯在前进入髓腔，旋转导针使其尖部指向近骨折端髓腔或远离关节，锤击导针顺利通过，选择合适的6.5 mm空心钉内固定。依据术后影像学检查及体格检查评价该手术方法的安全性和准确性。统计置入逆行耻骨上支髓内螺钉的透视次数和手术时间。末次随访采用Majeed评分评价骨盆骨折术后功能恢复情况。结果 13例病人共置入14颗螺钉。置入1枚螺钉所需透视次数为28~49次，平均37次；手术时间为18~60 min，平均32 min。术后CT证实14枚螺钉完全位于骨内，均未突破耻骨支及髋臼骨皮质。术后所有病人均无血管、神经或泌尿生殖系统及切口感染并发症。病人术后获6~20个月随访，平均10个月。除1例于术后1个月首次复查发现松动，后减少下地活动，延迟愈合外，其他病人均于术后3个月左右复查时愈合，平均愈合时间为98天。末次随访时根据Majeed评分，优10例，良3例。结论 折弯反向导针技术可以有效提高经皮逆行耻骨上支螺钉置入的可操作性，尤其是狭窄髓腔，其准确性、安全性高，可减少术中透视次数和手术时间，值得临床推广借鉴。