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1.
目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物。结果根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区。RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99%。Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞。结论构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达。 相似文献
2.
为获取具有生物学活性的弓形虫P30蛋白,采用定向克隆的方法,自行设计引物通过PCR扩增得到P30基因片段,用EcoRI和SalI双酶切后,连接到同样酸切的原核表达载体(pBV220和pMALP2)上,转化大肠杆菌DH5α,分别得到含重组闰pBV220-P30和pMALP2-P30的工程菌,扩菌提取质粒经过酶切分析和PCR扩增鉴定后,证实P30基因的两个原核表达载体构建成功,为其在原核系统中的表达作 相似文献
3.
1999~2002年,我们观察了针刺内关穴对冠心病心绞痛患者心脏动力学的影响。现报告如下。 临床资料:本文40例冠心病心绞痛患者(其中高压力负荷冠心病心病心绞痛24例,低压力负荷冠心绞痛16例);男16例,女24例;年龄50~79岁,平均61岁。病程2个月至20年,平均6.8年。患者平时服用养心氏、步常脑心通、丹参滴丸、消心痛、降压片中的1~2种药物。 相似文献
4.
5.
弓形虫P30基因非融合蛋白表达的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E.coli中进行表达。方法:采用定向克隆的方法。将PCR扩增得到的P30片段,插入原核表达质粒pBV220上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆,经过酶切及PCR扩增鉴定重组子,将含阳性重组子pBV220-P30的工程菌经温度诱导表达,SDS-PAGE电泳及免疫印迹分析。结果:成功构建了pBV220-P30重组质粒;SDS-PAGE电泳及Western-blot显示表达P30非融合蛋白的分子量为29kD,且能被弓形虫高免鼠血清识别。结论:从弓形虫基因组DNA中获取P30基因。并成功构建了pBV220-P30重组质粒,诱导表达了P30非融合蛋白,对弓形虫病基因疫苗研制奠定了基础。 相似文献
6.
用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP3)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC [Ca2+]i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L-1)引起的[Ca2+]i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L-1)时,丙泊酚抑制NE升高[Ca2+]i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP3合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP3介导的细胞内钙释放密切相关. 相似文献
7.
用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300μmol·L-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP3)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72h,对PASMC[Ca2+]i基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE3μmol·L-1)引起的[Ca2+]i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30μmol·L-1)时,丙泊酚抑制NE升高[Ca2+]i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进IP3合成作用.结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP3介导的细胞内钙释放密切相关. 相似文献
8.
9.
生物瓣支架几何造型设计的理论分析 总被引:3,自引:1,他引:2
以薄膜理论为依据,以接近或达到人体天然心瓣的性能为目的,对生物瓣支架几何造型设计进行详尽的理论分析,为生物瓣支架数学模型的建立以及计算机辅助设计提供理论基础。 相似文献
10.
目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒,为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备。方法 用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组DNA;用PCR技术从基因组DNA中扩增编码表而抗原P30、P22的基因片段,分别重组入pMD18T载体中。将pMD18-T载体中的P30、P22基因片段分别酶切,定向克隆入pUC18克隆载体中,pUC18-P30-P22中的P30P22片段经酶切、纯化后,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,用酶切、PCR及测序的方法对重组子进行鉴定。结果 从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的P30及P22片段;大小均与预测值相符;克隆pUC18-P30P22重组质粒的酶切片段分别与P30、P22基冈大小一敛:经亚克隆、筛选鉴定获得了pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,所测P30、P22基因序列与文献报道一致。结论 成功构建弓形虫pUC8-P30P21重组质粒和pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,为研制弓形虫DNA疫苗奠定了基础。 相似文献